任贲
- 作品数:8 被引量:3H指数:1
- 供职机构:南京工业大学更多>>
- 发文基金:江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学理学轻工技术与工程更多>>
- 蔗糖异构酶基因在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达及重组菌的细胞固定化被引量:3
- 2010年
- 分别利用IPTG和乳糖两种诱导物诱导蔗糖异构酶(SIase)基因在E.coliBL21(DE3)中实现表达,对诱导温度、诱导时机、诱导物浓度、诱导持续时间进行比较分析并优化,确定了二者的最佳诱导条件,在E.coli培养3h后(OD600约为0.9)添加终浓度为0.8mmol/L的IPTG(0.5mmol/L乳糖)在20℃(24℃)条件下诱导14h(12h)能获得最高的蛋白表达量及SIase酶活。在最优条件下以IPTG为诱导物时目的蛋白占总蛋白的41.6%,单位体积培养液中SIase酶活为12.37U/mL,以乳糖为诱导物时分别为27.2%,14.72U/mL,从收获酶活角度考虑可见乳糖作为诱导物的优势;而后利用海藻酸钠包埋法固定化重组菌,转化初始浓度为500g/L的蔗糖溶液,转化10~11h后异麦芽酮糖平均得率在83%以上,蔗糖平均转化率大于99%,固定化细胞能够连续稳定转化25批次,转化效率相对于原始菌提高了近55%。
- 任贲李莎徐虹蔡恒
- 关键词:乳糖诱导IPTG固定化
- 一种高活力高产物特异性蔗糖异构酶生产菌株的高通量筛选方法
- 本发明公开了一种高活力高产物特异性蔗糖异构酶生产菌株的高通量筛选方法,即将待筛选的蔗糖异构酶生产菌接入含有培养基的微孔板中振荡培养,离心去除上清液,加入蔗糖溶液进行酶转化反应,反应结束后,将每孔的上清液依次转移至另一微孔...
- 徐虹李莎环民霞任贲冯小海蔡恒欧阳平凯
- 文献传递
- Erwinia rhapontici NX-4中蔗糖异构酶的纯化及酶学性质
- 对Erwinia rhapontici NX-4中的蔗糖异构酶(SIase)进行了纯化和酶学性质的研究。粗酶经硫酸铵沉淀、DEAE弱阴离子层析和SP Fast Flow强阳离子层析三步获得电泳纯的蔗糖异构酶,其分子量约为...
- 任贲李莎冯小海蔡恒徐虹
- 关键词:分离纯化酶学性质
- Erwinia rhapontici NX-4中蔗糖异构酶的纯化及酶学性质
- 对Erwinia rhapontici NX-4中的蔗糖异构酶(SIase)进行了纯化和酶学性质的研究。粗酶经硫酸铵沉淀、DEAE弱阴离子层析和SP Fast Flow强阳离子层析三步获得电泳纯的蔗糖异构酶,其分子量约为...
- 任贲李莎冯小海蔡恒徐虹
- 关键词:离子交换层析酶学性质酶活力
- 文献传递
- 大黄欧文菌中蔗糖异构酶基因的克隆表达及应用被引量:1
- 2011年
- 以大黄欧文菌(Erwinia rhapontici)NX-5基因组DNA为模板,PCR扩增得到编码蔗糖异构酶(SIase)的基因palⅠ,构建克隆载体pUC18-palⅠ。经测序正确后,将palⅠ亚克隆至表达载体pET-22b(+)上,并在E.coliBL21(DE3)中成功表达相对分子质量约为66 000的可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱对表达产物进行纯化,纯酶的比活为40 U/mg。转化条件研究表明:重组菌能够高效转化质量分数为50%的蔗糖溶液,转化液中异麦芽酮糖得率为85%。
- 李莎任贲林璐徐虹蔡恒
- 关键词:克隆表达
- 一种蔗糖异构酶基因及其高效表达方法
- 本发明公开了一种蔗糖异构酶基因,pal I基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还公开了上述基因的编码蛋白质,SIase酶。本发明还公开了包含上述基因的表达载体及宿主细胞,以及该基因的高效表达方法。包含上...
- 徐虹李莎任贲蔡恒汪晨
- 文献传递
- 一种蔗糖异构酶基因及其高效表达方法
- 本发明公开了一种蔗糖异构酶基因,pal I基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还公开了上述基因的编码蛋白质,SIase酶。本发明还公开了包含上述基因的表达载体及宿主细胞,以及该基因的高效表达方法。包含上...
- 徐虹李莎任贲蔡恒汪晨
- 一种高活力高产物特异性蔗糖异构酶生产菌株的高通量筛选方法
- 本发明公开了一种高活力高产物特异性蔗糖异构酶生产菌株的高通量筛选方法,即将待筛选的蔗糖异构酶生产菌接入含有培养基的微孔板中振荡培养,离心去除上清液,加入蔗糖溶液进行酶转化反应,反应结束后,将每孔的上清液依次转移至另一微孔...
- 徐虹李莎环民霞任贲冯小海蔡恒欧阳平凯
- 文献传递