何璟
- 作品数：28 被引量：63H指数：4
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- 相关领域：生物学农业科学化学工程轻工技术与工程更多>>
- Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中启动子P_(aziU1)的克隆及表达被引量：1
- 2014年
- 为鉴定和分析aziU1基因的启动子PaziU1,将该基因上游183bp的DNA片段和组成型强启动子PermE*(作为阳性对照)分别克隆到启动子探针载体pIJ8660中,以增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,通过检测菌丝体中绿色荧光的强弱,对PaziU1的启动子活性进行了定性和定量分析。PaziU1在3种不同的链霉菌Streptomyces sahachiroi、Streptomyces lividans ZX1和Streptomyces albus中均表现出启动子活性。PaziU1的启动子活性在初始培养的36h略低于PermE*,在培养48h后,PaziU1的表达活性高于PermE*。结果表明,Pazi U1与PermE*一样,是一个可以在链霉菌中组成型表达的强启动子。
- 周俊何璟
- 关键词：STREPTOMYCESATCC
- Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中孢子色素合成基因簇(sah)的鉴定
- 2012年
- 【目的】Streptomyces sahachiroi ATCC 33158全基因组测序后,通过生物信息学分析找到一个II型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因簇sah。我们通过基因敲除和异源表达的方法对sah的生物学功能进行了研究。【方法和结果】对sah基因簇ORF(open reading frame)进行分析后发现,除了一个额外的氧甲基转移酶基因sahI以外,该基因簇与天蓝色链霉菌中负责孢子色素合成的基因簇whiE具有很高的相似性。将sah中负责后修饰的3个基因sahG、sahH和sahI分别敲除后,发现孢子色素的颜色随之发生明显的变化。将sah-minimal PKS基因和whiE-minimal PKS基因分别导入变铅青链霉菌ZX1中进行异源表达,高效液相色谱及液质联用分析证实它们产生相同的水溶性红色色素物质。【结论】sah与whiE基因簇具有相似的生物学功能,负责链霉菌孢子色素的合成。这两个基因簇所合成的孢子色素具有相同的母核,差别在于sah基因簇中多了一个编码氧甲基转移酶的后修饰基因,这可能是导致两种链霉菌孢子在颜色上有细微差别的原因。
- 李华王利娟何璟
- 关键词：ATCC基因中断异源表达
- 利用基因组发掘技术指导链霉菌SH-62中活性天然产物的分离及鉴定
- 2016年
- 通过生物信息学分析,利用基因组发掘技术发现链霉菌SH-62基因组中至少含有37个次级代谢产物的生物合成基因簇,除了有4个基因簇分别与已知的肠道菌素、潮霉素A、尼日利亚菌素和格尔德霉素的生物合成基因簇具有高度同源性以外,其他基因簇的功能鲜见报道。在不同发酵培养基上培养链霉菌SH-62,利用高分辨率的LC-MS对发酵产物进行分析,发现链霉菌SH-62确实能够产生肠道菌素、潮霉素A和尼日利亚菌素,从而证明了基因组发掘策略确实能够指导代谢产物的分离及鉴定。
- 鲁洲周俊何璟
- 关键词：生物合成基因簇
- 硫藤黄链霉菌抗生素调控基因及提高链霉菌抗生素产量的方法
- 本发明公开了一种硫藤黄链霉菌抗生素调控基因ORF4，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，或与SEQ ID NO：1所示核苷酸编码相同蛋白的核苷酸序列。本发明还公开了所述基因在制备抗生素高产链霉菌基因突变株中的应用以...
- 何璟朱梦奕赵瑞芳王利娟
- 文献传递
- 一种阿嗪霉素B的基因工程菌WSD2CP及制备方法和应用
- 本发明公开了一种阿嗪霉素B的基因工程菌WSD2CP及制备方法和应用，其步骤：A、<I>Streptomycessahachiroi</I>ATCC33158中<I>aziD2</I>基因缺失突变株构建：将用于缺失<I>a...
- 何璟王珊
- 文献传递
- 链霉菌SH-62中肠菌素生物合成基因簇的克隆及异源表达被引量：2
- 2015年
- 通过生物信息学分析,在链霉菌SH-62的基因组中发现一个Ⅱ型聚酮合酶基因簇(ents),与已报道的来源于Streptomyces maritimus的肠菌素生物合成基因簇具有高度的相似性。通过构建和筛选链霉菌SH-62的基因组细菌人工染色体(BAC)文库,克隆得到完整的ents基因簇。将ents基因簇导入白色链霉菌中进行异源表达,HPLC和LC-MS分析结果表明该基因簇负责肠菌素的生物合成,从而证实了ents基因簇的生物学功能。
- 张怡鲁洲黄胜何璟
- 关键词：细菌人工染色体白色链霉菌异源表达
- 适用于链霉菌大片段基因组DNA克隆和异源表达的细菌人工染色体(BAC)载体的构建及应用被引量：10
- 2012年
- 【目的】很多链霉菌来源的天然产物的生物合成基因簇往往很大,用传统的cosmid载体很难完整的克隆和异源表达。本研究通过载体改造,成功构建出一个新的细菌人工染色体(BAC)载体,用于链霉菌来源的天然产物生物合成基因簇的克隆及异源表达实验。【方法】从复合型载体pCUGIBAC1出发,通过λRED介导的PCR-targeting方法,用链霉素抗性基因替换掉原有的氯霉素抗性基因标记,同时插入链霉菌中常用的安普拉霉素抗性标记、转移起始位点oriT、φC31整合酶基因int、整合位点attP等元件。【结果】成功构建出可装载链霉菌大片段DNA的BAC载体pMSBBACs。使用pMSBBACs构建出链霉菌U27的基因组BAC文库,平均插入片段大小为100 kb。选取其中一个大小为140 kb的BAC质粒进行功能验证,实验证明通过接合转移和原生质体转化的方法都能够将这个大型BAC质粒导入链霉菌模式菌株,并通过位点特异性重组整合到染色体中进行异源表达。【结论】BAC载体pMSBBACs可成功用于放线菌大片段基因组DNA的克隆和异源表达实验。
- 黄胜李娜周俊何璟
- 关键词：生物合成基因簇链霉菌异源表达
- 利用同框敲除技术研究Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的代谢产物
- 2016年
- 为了阐明Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的功能,利用同源双交换的方法对该基因进行同框敲除,采用异位表达的方法进行了相应的回补实验。通过高效液相色谱及液相色谱-质谱联用分析发现基因orf18的敲除会明显降低发酵产物中苯甲酸盐的含量,回补该基因能够在一定程度上恢复苯甲酸盐的产量,表明orf18在原宿主中极有可能参与苯甲酸盐的生物合成。
- 原海亮管仁艳何璟
- 关键词：链霉菌
- 土壤微生物总DNA提取方法的优化被引量：32
- 2012年
- 【目的】土壤中未培养微生物约占总量的99%,这就意味着绝大多数微生物资源还未得到开发和利用。本研究通过优化土壤微生物总DNA的提取方法,获得较高质量的DNA,为后期研究土壤微生物的多样性及构建大插入片段的宏基因组文库奠定基础。【方法】通过综合比较已报道的微生物DNA提取方法的优缺点,我们设计出一种新的提取方案。对提取过程中的几个关键步骤进行了优化,包括联合使用SDS-CTAB和溶菌酶一起来破细胞,利用氯仿除蛋白,使用PVPP柱纯化DNA等。比较分析了优化后的方法和3种已报道方法所获得的土壤总DNA的产量、纯度及片段大小。【结果】优化后的方法所获得的土壤DNA质量明显有所提高:每克土壤最高能提取95μg DNA,A260/A280和A260/A230比值更接近理想水平,PCR扩增能够得到明显的目标条带,DNA片段最大能达到100 kb左右。【结论】通过比较分析,最终确立了一种较理想的土壤微生物总DNA提取方法,为更好地开发利用土壤未培养微生物资源提供了有力工具。
- 赵裕栋周俊何璟
- 关键词：土壤微生物PCR扩增
- 一种阿嗪霉素B的基因工程菌WSD2CP及制备方法和应用
- 本发明公开了一种阿嗪霉素B的基因工程菌WSD2CP及制备方法和应用，其步骤：A、StreptomycessahachiroiATCC33158中aziD2基因缺失突变株构建：将用于缺失aziD2基因的重组质粒导入到野生型...
- 何璟王珊
- 文献传递
