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俞殷遥
作品数:
2
被引量:2
H指数:1
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河北医科大学第四医院
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相关领域:
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合作作者
杨硕
河北医科大学第四医院
白亚玲
河北医科大学第四医院
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徐金升
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张胜雷
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2016
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KCa3.1在碱性环境促进高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化中的作用
2016年
目的:探究中电导钙激活性钾离子通道(intermediate-conductance Ca^2+-activated K+channels ,KCa3.1)在碱性环境促进高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells ,VSMCs)钙化中的作用及机制。方法体外培养原代大鼠主动脉平滑肌细胞和大鼠胸主动脉血管环,利用10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠制备血管平滑肌细胞钙化、血管环钙化模型。同时使用HCl和NaHCO3调节培养基pH值,细胞、血管环被随机分为6组:正常pH7.4组、正常pH8.0组、高磷组(在高磷培养基的基础上调整pH值为7.4、7.7、8.0三个亚组)、TRAM-34(KCa3.1抑制剂)干预组(在高磷pH8.0培养基的基础上添加20 nmol/L TRAM-34)。茜素红染色法和钙含量测定法判断细胞钙化程度;von Kossa染色法和钙含量测定法判断血管环钙化程度。RT-PCR、Western印迹法检测各组细胞中调节成骨和软骨分化的关键转录因子Runx2的表达,酶联免疫吸附法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,荧光探针法测定细胞内钙离子浓度。免疫组织化学法检测各组血管环中KCa3.1、Runx2的表达。结果体外培养VSMCs 12 d后,与正常pH7.4组相比,高磷组钙盐沉积明显增高(P<0.05),且随着pH升高逐渐增加(P<0.05);与高磷pH8.0组相比,TRAM-34干预组钙盐沉积明显降低(P<0.05)。体外培养VSMCs 4 d后,碱性环境显著促进钙离子内流(P<0.05),增加KCa3.1、Runx2表达(P<0.05),增加ALP活性(P<0.05),而TRAM-34干预可显著抑制钙离子内流(P<0.05),减少Runx2表达(P<0.05),降低ALP活性(P<0.05)。体外血管环培养12 d后,与正常pH7.4组相比,高磷组钙盐沉积明显增高(P<0.05),且随着pH升高逐渐增加(P<0.05);与高磷pH8.0组相比,TRAM-34干预组钙盐沉积明显降低(P<0.05)。体外血管环培养4 d后,免疫组化结果显示,碱性环境促进KCa3.1和Runx2表达(P<0.05
张胜雷
徐金升
杨硕
白亚玲
张俊霞
崔立文
俞殷遥
关键词:
平滑肌
钙质沉着症
表型转化
中电导钙激活钾离子通道抑制剂对高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化的作用及机制
被引量:2
2016年
目的探讨中电导钙激活钾离子通道(KCa3.1)抑制剂1-[(2-氯苯基)二苯甲基]-1H-吡唑(TRAM-34)对高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化的作用及其机制。方法体外培养原代大鼠主动脉平滑肌细胞和胸主动脉环,将传代培养至第4代的细胞和血管环均分为3组:对照组(加入含10%胎牛血清的DMEM培养基)、高磷组(在对照组培养基的基础上,加入10mmoL/L13-甘油磷酸)和TRAM-34干预组(在高磷组培养基的基础上,加入20nmol/LTRAM-34)。采用邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞和血管环的钙含量;采用荧光探针法测定胸主动脉平滑肌细胞内的钙离子浓度;采用RT—PCR和Western blot检测各组细胞中调节成骨和软骨分化的Runt相关转录因子2(Runx2)的表达水平;采用免疫组织化学法检测各组胸主动脉环中Runx2的表达水平;采用磷酸苯二钠法测定胸主动脉平滑肌细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性。结果(1)胸主动脉平滑肌细胞体外培养12d后,高磷组钙含量高于对照组[(121.67±6.17)mg/g蛋白比(84.38±8.17)mg/g蛋白,P〈0.05],TRAM-34干预组钙含量[(93.31±11.36)mg/g蛋白]低于高磷组(P〈0.05)。胸主动脉环体外培养12d后,高磷组钙含量高于对照组[(7.17±0.57)mg/g蛋白比(1.18±0.13)mg/g蛋白,P〈0.05],TRAM-34干预组钙含量[(4.71±0.42)mg/g蛋白]低于高磷组(P〈0.05)。(2)胸主动脉平滑肌细胞体外培养4d后,高磷组细胞内的钙离子浓度高于对照组(349.22±40.47比151.67±16.94,P〈0.05),TRAM-34干预组细胞内的钙离子浓度(194.67±22.21)低于高磷组(P〈0.05)。(3)胸主动脉平滑肌细胞体外培养4d后,lit—PCR结果显示,高磷组细胞Runx2mRNA表达水平高于对照组(0.630±0.033比0.340±0.058,P〈0.05),TRAM-34干预组细胞Runx2mRNA表达水平(0�
张胜雷
徐金升
杨硕
白亚玲
张俊霞
崔立文
俞殷遥
关键词:
血管
钙质沉着症
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