刘坚
- 作品数：19 被引量：136H指数：8
- 供职机构：湖北医药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省教育厅科学技术研究项目十堰市科学技术研究与开发项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学政治法律更多>>
- 黄芪多糖通过活化AMPK和促进骨骼肌FAT/CD36转位改善成肌细胞FFAs代谢被引量：7
- 2013年
- 目的:探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对骨骼肌游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)代谢的影响及其机制。方法:培养小鼠C2C12成肌细胞;MTT法检测不同浓度FFAs作用不同时间对细胞活性的影响。根据MTT结果选取FFAs最适浓度和时间处理细胞并用APS干预,采用乙酰辅酶A合成酶-乙酰辅酶A氧化酶法检测APS干预前后培养液FFAs浓度;Western blotting测APS干预前后细胞膜脂肪酸转位酶(FAT/CD36)、总FAT/CD36、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)和总AMPK蛋白表达。结果:FFAs对细胞的毒性呈浓度和时间依赖性。与FFAs组比较,FFAs+APS组细胞膜FAT/CD36及p-AMPK蛋白表达增加(P<0.05),而总FAT/CD36及总AMPK蛋白表达无明显差异(P>0.05),同时培养液FFAs浓度降低,细胞活性增加(P<0.05)。结论:APS可以增加骨骼肌细胞对FFAs的摄取利用,其机制可能与活化AMPK和促进FAT/CD36转位有关。
- 胡阳黔李静刘坚欧阳静萍宋杰
- 关键词：黄芪多糖游离脂肪酸腺苷酸活化蛋白激酶
- 黄芪多糖活化AMPK减轻游离脂肪酸对C2C12成肌细胞的细胞毒性被引量：12
- 2012年
- 目的:探讨黄芪多糖(APS)减轻游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对骨骼肌细胞的毒性作用及其机制。方法:培养C2C12成肌细胞分5组:对照组、APS组、5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(5-aminoimidazole-4-carboxamide 1-β-D-ribofuranoside,AICAR)组、FFAs组和FFAs+APS组。MTT法检测C2C12细胞存活率;透射电镜观察细胞超微结构;Western blotting检测细胞内腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activatedprotein kinase,AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)和磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)表达水平;高效液相色谱法测定细胞胞浆AMP/ATP比值。结果:(1)与FFAs组比较,APS显著提高细胞存活率(P<0.05);(2)透射电镜观察发现,APS作用24 h后可以减轻FFAs导致的线粒体肿胀;(3)Western blotting结果显示:与FFAs组比较,APS作用24 h后显著增加p-AMPK表达(P<0.01)及p-ACC表达(P<0.05),而不影响总AMPK表达(P>0.05);(4)AMP/ATP比值检测结果:与FFAs组比较,APS作用24 h后细胞内AMP/ATP比值增加(P<0.01)。结论:APS可以减轻FFAs对骨骼肌细胞的毒性,其机制可能与保护线粒体、激活AMPK途径有关。
- 宋杰李静胡阳黔刘坚欧阳静萍
- 关键词：黄芪多糖游离脂肪酸乙酰辅酶A羧化酶线粒体
- 黄芪多糖通过失活Wnt信号通路抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡被引量：15
- 2019年
- 目的:研究黄芪多糖对高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:建立高糖诱导下肾小管上皮细胞损伤;运用MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中Caspase-3、Axin-1、β-catenin蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中Axin-1、β-catenin mRNA表达。结果:与空白对照组比较,高糖(25、30、40 mmol/L)处理组细胞活力均显著降低(P<0.05),且最适浓度为40 mmol/L,在该浓度下细胞凋亡率显著升高,Caspase-3、β-catenin蛋白表达显著升高、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著降低,β-catenin mRNA显著升高(P<0.05)。与模型组比较,黄芪多糖300、400 mg/L组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Caspase-3、β-catenin蛋白表达及β-catenin mRNA表达显著降低、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:黄芪多糖可抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与失活Wnt信号通路有关。
- 鲍芳宋杰代喆刘坚
- 关键词：黄芪多糖WNT信号通路凋亡高糖肾小管上皮细胞
- 黄芪多糖对胰岛素抵抗H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响被引量：4
- 2015年
- 目的:研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对胰岛素抵抗H9c2(IR-H9c2)心肌细胞葡萄糖摄取的影响,并探讨其信号机制。方法:采用高浓度胰岛素处理复制IR-H9c2心肌细胞模型,给予一定剂量的APS处理,MTT法筛选合适的实验浓度,2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖法检测细胞的葡萄糖摄取,Western blotting法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的磷酸化水平。结果:APS可以明显促进IR-H9c2心肌细胞对葡萄糖的摄取,并能显著提高其AMPK的活性,且AMPK抑制剂Compound C明显降低了APS刺激IR-H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的作用。结论:APS可以促进IR-H9c2心肌细胞的葡萄糖摄取,这一作用与AMPK的活化有关。
- 刘坚鲍芳柯玉叶杨政炜张亚辉吴胜英
- 关键词：黄芪多糖胰岛素抵抗葡萄糖摄取H9C2心肌细胞
- 案例教学法在全科医学专业教学中的实施与探索被引量：8
- 2016年
- 全科医学是整合临床医学、预防医学、康复医学及人文社会学科相关内容于一体的综合性医学专业学科。为使全科医学生能更好地认识和掌握疾病发生、发展和转归规律及机制,针对全科医学教育教学特点,在病理生理学课程教学中实施案例教学法,将基础理论与临床知识进行优化整合,将抽象医学理论感性化,以提高学生的自主学习能力及分析和解决问题的能力。
- 刘坚张亚辉汪雄武福云吴胜英
- 关键词：教学方法病理生理学案例教学法全科医学
- 黄芪多糖改善游离脂肪酸致胰岛β细胞的脂毒性被引量：9
- 2014年
- 目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)对游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)导致的大鼠胰岛β细胞脂毒性的保护作用及机制。方法体外分离培养Wistar大鼠胰岛细胞,分为4组:对照组、APS组、FFA组、FFA+APS组。各组细胞培养72h测胰岛内三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)含量,基础状态胰岛分泌情况,Western blot法测胰岛β细胞内总腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK),肉毒碱软脂酰转移酶-1(CPT-1)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的蛋白表达情况。结果①FFA使胰岛内TG、FFA含量增加(均P<0.01),APS使胰岛内TG、FFA含量减少(均P<0.01);②油红O染色提示FFA组胰岛内脂质蓄积增加,APS可减少脂质蓄积;③FFA使胰岛素分泌增加(P<0.01),APS减少胰岛素分泌(P<0.01);④FFA抑制p-AMPK、CPT-1、ACC表达,APS使p-AMPK、CPT-1、ACC表达增加(均P<0.01)。结论 FFA使胰岛内脂质蓄积增加,胰岛素分泌增加,形成高胰岛素血症。APS可以通过AMPK脂代谢途径减少胰岛内脂质蓄积,同时减少胰岛素分泌,减轻高胰岛素血症,从而对FFA导致的大鼠胰岛β细胞脂毒性起到保护作用。
- 胡阳黔李静刘坚王文峰宋杰
- 关键词：黄芪多糖游离脂肪酸腺苷酸活化蛋白激酶脂毒性胰岛Β细胞
- 黄芪多糖改善游离脂肪酸诱导的胰岛素抵抗
- 目的: 探讨黄芪多糖（APS）改善游离脂肪酸(FFAs)诱导的胰岛素抵抗及其机制。
方法:
①MTT 法测C2C12 细胞存活率，分组：APS组（APS＋正常细胞），APS 治疗组（APS＋FFAs＋...
- 宋杰张德玲邹丰刘坚欧阳静萍
- 关键词：黄芪多糖游离脂肪酸胰岛素抵抗
- 文献传递
- 黄芪多糖对高游离脂肪酸所致巨噬细胞脂质沉积及腺苷酸活化蛋白激酶-脂肪酸结合蛋白4通路的作用被引量：3
- 2014年
- 目的：探讨黄芪多糖对高游离脂肪酸导致巨噬细胞内脂质沉积的作用及机制。方法将培养的单核源性巨噬细胞（ THP-1）分为对照组（加入与游离脂肪酸组等量的无水乙醇及牛血清清蛋白）、黄芪多糖组（培养液中加入黄芪多糖200 mg/L）、游离脂肪酸组（培养液中加入长链游离脂肪酸0．25 mmol/L）、游离脂肪酸加黄芪多糖组（培养液中加入黄芪多糖200 mg/L及长链游离脂肪酸0．25 mmol/L）及游离脂肪酸加黄芪多糖及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）阻断剂（compound C）组（培养液中加入黄芪多糖200 mg/L、长链游离脂肪酸0．25 mmol/L及compound C 50μmol/L）。采用游离脂肪酸检测试剂盒和三酰甘油试剂盒分别检测游离脂肪酸及三酰甘油含量，油红O染色观察细胞内脂质蓄积，蛋白质印迹法检测细胞内AMPK、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、脂肪酸结合蛋白4（FABP4）的蛋白表达情况。结果①游离脂肪酸组三酰甘油及游离脂肪酸含量[（3．35±0．79）mmol/L、（29．3±1．7）μmol/L]明显高于对照组[（0．81±0．19）mmol/L、（15．7±1．3）μmol/L]和游离脂肪酸加黄芪多糖组[（1．46±0．25）mmol/L、（15．5±2．1）μmol/L]，差异均有统计学意义（均P＜0．01）。②油红O染色结果：游离脂肪酸组脂质含量较对照组增多，游离脂肪酸加黄芪多糖组脂质含量较游离脂肪酸组减少，提示游离脂肪酸增加细胞内脂质蓄积，而黄芪多糖减少细胞内脂质蓄积。③蛋白质印迹法检测AMPK、p-AMPK、FABP4的蛋白表达情况发现，与对照组相比，黄芪多糖组各种蛋白表达无明显变化，游离脂肪酸组p-AMPK表达明显少于对照组和游离脂肪酸加黄芪多糖组[（54．3±3．0）％比（100．0±1．4）％、（96．5±3．9）％]，FABP4表达明显高于对照组和游离脂肪酸加黄芪多糖组[（138．3±2．3）％比（100．0±3．1）％、（72．
- 胡阳黔李静刘坚王文峰宋杰
- 关键词：黄芪多糖游离脂肪酸腺苷酸活化蛋白激酶巨噬细胞脂质沉积
- 黄芪多糖的胰岛素增敏作用及其对蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B的影响被引量：25
- 2010年
- 目的:探讨黄芪多糖(APS)对遗传性胰岛素抵抗小鼠的胰岛素增敏作用及其机制。方法:8周龄C57BL/6J小鼠分别饲以高脂饮食或正常饮食4周,高脂饮食小鼠以胰岛素耐量实验(ITT)证实成功复制胰岛素抵抗模型后,将动物随机分为2组:胰岛素抵抗+APS组[APS 700 mg/(kg.d),灌胃],胰岛素抵抗组(等体积生理盐水灌胃)继续饲以高脂饮食;正常饮食小鼠随机分为对照组和APS组,APS剂量和方法同前。每组动物8只,继续喂养8周后取血检测血糖及胰岛素耐量,免疫印迹法检测骨骼肌胰岛素受体β亚单位(IR-β)和胰岛素受体底物1(IRS-1)的表达,以及蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)的活性。结果:胰岛素抵抗组小鼠体重增加,血糖、血胰岛素水平显著高于对照组,胰岛素敏感性明显低于对照组。经APS治疗8周后,胰岛素抵抗小鼠的体重、餐后血糖和血胰岛素水平显著降低;骨骼肌IR-β和IRS-1酪氨酸磷酸化水平显著增强,PTP1B活性显著降低。APS治疗对对照组小鼠无明显影响。结论:APS对胰岛素抵抗小鼠具有胰岛素增敏作用;其机制与增加骨骼肌IR-β和IRS-1酪氨酸磷酸化水平,抑制PTP1B活性,增强胰岛素信号转导有关。
- 徐怡王保华李柯吴珂毛先晴邹丰刘坚杨海鹭欧阳静萍
- 关键词：黄芪多糖C57BL/6J小鼠PTP1BIRS-1
- 黄芪多糖通过AMPK介导的AS160磷酸化刺激葡萄糖摄取的机制研究
- 糖尿病是由遗传和环境因素相互作用而引起的严重危害人类健康和生命的内分泌代谢性疾病。随着社会经济的发展、人口老龄化以及人们生活方式的改变,糖尿病的发病率在全球范围内呈逐年增高的趋势,目前已增至3.47亿。我国是世界上糖尿病...
- 刘坚
- 关键词：黄芪多糖AMPK活化黄芪多糖葡萄糖摄取AMPK活化磷酸化
