刘晓海
- 作品数：6 被引量：31H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学药学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人β_3肾上腺素受体真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β_3-AR的构建及表达被引量：7
- 2007年
- 目的构建人β3肾上腺素受体(β3-AR)的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR,并通过脂质体介导转染HEK293细胞使之表达该受体蛋白。方法以pENTR_ADRB3-Stop质粒为模板,采用PCR法扩增出人β3-AR cDNA,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建成真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR。将该质粒转染HEK293真核细胞,通过RT-PCR检测β3-AR mRNA在HEK293细胞内的表达,通过免疫荧光法检测β3-AR蛋白在HEK293细胞中的表达。结果酶切和DNA测序鉴定均证实重组质粒含有人β3-AR编码区全长。在转染重组质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR的HEK293细胞中检测到了β3-AR基因的转录和翻译产物。结论通过基因工程方法成功构建了β3-AR的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β-AR,为进一步建立β-AR的稳定表达细胞株,用于筛选高效、高选择性β-AR激动剂奠定了基础。
- 曾凡新董志傅洁民刘晓海
- 关键词：Β3肾上腺素受体真核表达载体HEK293细胞
- 倍他福林改善胰岛素抵抗的体内、体外实验研究
- 目的：本课题研究目的旨在通过建立体内、体外胰岛素抵抗模型，观察β3-AR激动剂倍他福林对胰岛素抵抗的影响，从而为开发抗糖尿病药物提供实验依据。
方法：(1)体外实验研究中，在培养的HepG2细胞中加入5×10-...
- 刘晓海
- 关键词：抗糖尿病药胰岛素抵抗倍他福林实验药理
- 文献传递
- 倍他福林对胰岛素抵抗HepG2细胞模型的作用及其初步机制被引量：11
- 2008年
- 目的:探讨倍他福林(betaphrine)对胰岛素抵抗的作用及其机制。方法:将HepG2细胞置于5×10-7mo.lL-1胰岛素培养液中16 h,观察高胰岛素对HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响。模型建立后,培养液中加入倍他福林共同孵育,观察倍他福林对胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖消耗量以及培养液中甘油的含量。并用Western blotting法测定各组细胞内葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)的表达。结果:与正常对照组相比,模型组细胞葡萄糖消耗量减少,培养液中甘油的含量增加,细胞内葡萄糖转运蛋白-4的表达减少。与模型组相比,倍他福林作用组细胞葡萄糖消耗量增加,培养液中甘油的含量减少,细胞内葡萄糖转运蛋白-4的表达增加。结论:倍他福林可改善胰岛素抵抗HepG2细胞模型初步的胰岛素抵抗性。
- 刘晓海董志傅洁民曾凡新
- 关键词：倍他福林胰岛素抵抗HEPG2细胞
- 稳定表达β1、β2及β3肾上腺素受体细胞株的鉴定
- 2011年
- 目的:对稳定转染有携带人β1、β2或β3肾上腺素受体基因质粒的CHO-K1细胞(β1-CHO、β2-CHO和β3-CHO细胞)进行鉴定,以为将这几种细胞用于β3肾上腺素受体激动剂的筛选奠定基础。方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光、western blott和放射性配体结合法对3种细胞进行鉴定。结果:β1-CHO、β2-CHO和β3-CHO3种细胞经免疫细胞化学检测,细胞内均出现明显的棕黄色免疫阳性反应;经免疫荧光检测,3种细胞内均有明显的荧光;3种细胞提取的蛋白质经Western blot检测均出现预期的受体蛋白条带,且均可与不同浓度的放射性核素标记配体125I-cyanopindolol呈饱和结合。结论:β1-CHO、β2-CHO和β3-CHO细胞分别稳定表达有β1、β2或β3肾上腺素受体蛋白,可以用于特异性β3肾上腺素受体激动剂的筛选。
- 曾凡新董志傅洁民邓杰刘晓海杨佳丹
- 关键词：肾上腺素受体Β1肾上腺素受体Β2肾上腺素受体Β3肾上腺素受体激动剂
- PPAR的结构及其与疾病的关系被引量：9
- 2007年
- 过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activatived receptors,PPAR)是由配体激活的转录因子,属于核激素受体超家族。PPAR的激活对调节体内的多种代谢过程有重要的作用。对于多种人体的疾病,以PPAR作为治疗靶点可以取得明显的效果。本文对PPAR的结构及其与疾病的关系作一综述。
- 刘晓海董志付洁民
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体肿瘤代谢综合征炎症反应皮肤疾病
- 基于报告基因检测的β_3肾上腺素受体激动剂筛选模型的建立与应用被引量：4
- 2010年
- 目的:建立基于双荧光素酶报告基因检测的β3肾上腺素受体(β3-AR)激动剂筛选模型,并用于β3-AR激动剂的筛选。方法:应用免疫细胞化学法鉴定β3-AR在β3-CHO细胞上的稳定表达,并将pCRE-luc质粒与pRL-TK质粒共同瞬时转染β3-CHO细胞,建立一种基于双荧光素酶报告基因检测的β3-AR激动剂筛选模型。通过检测报告基因萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶活性的比值,来间接反映配体对β3-AR的激动活性。并以β-AR激动剂异丙肾上腺素刺激对模型的有效性进行验证,在此基础上以此模型对20种新化合物的β3-AR激动活性进行筛选。结果:β3-CHO细胞经免疫细胞化学法鉴定有特异性受体蛋白表达。通过将两个报告基因质粒转染该细胞后,与加入溶剂对照相比,加入异丙肾上腺素可显著促进荧光素酶报告基因的表达,表明该模型有效、可靠。以此模型从20个化合物中初筛出8个活性较强的β3-AR激动剂。结论:本研究建立了基于双荧光素酶报告基因检测的β3-AR激动剂筛选模型,并以此模型筛选发现了几个活性较强的β3-AR激动剂。
- 曾凡新董志傅洁民刘晓海
- 关键词：Β3肾上腺素受体激动剂荧光素酶报告基因
