史西保
- 作品数：22 被引量：27H指数：3
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白(nsp)1α抑制β干扰素转录的分子机理研究
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起机体免疫抑制和持续性感染，给养猪业造成巨大损失。研究PRRSV的免疫抑制机理，对于抑制PRRSV活性、减少PRRSV感染具有重要的理论指导意义。 1.重组IFN-β抑制PRRSV...
- 史西保
- 关键词：锌指结构非结构蛋白
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α(nsp1α)的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需
- 殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难.NLRP3炎症小体作为...
- 王超史西保王丽陈静司朝朝邓瑞广张改平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒拮抗作用
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白11(nsp11)的核酸内切酶活性是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需
- RP3炎症小体作为一个多蛋白复合物,可以引起促炎性细胞因子IL-1β的成熟和分泌,是连接天然免疫和适应性免疫反应的重要桥梁.前期研究表明猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)可以激活NLRP3炎症小体但却会诱发机体的免疫抑...
- 王超史西保王丽陈静司朝朝邓瑞广张改平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒拮抗作用
- 基于局域表面等离子体共振技术的核酸适配体筛选方法
- 本发明公开了基于局域表面等离子体共振技术的核酸适配体筛选方法，属于分子识别和核酸适配筛选领域。本发明主要借助局域表面等离子体共振个人型分子相互作用分析仪筛选出可特异结合靶标物的核酸适配体，其筛选方法为：以纳米金芯片为介质...
- 张改平王方雨邓瑞广邢广旭郝俊芳胡骁飞余秋颖王晶郅玉宝赵东史西保滕蔓
- 文献传递
- 核因子I/A(NFIA)依赖其N末端的DNA结合结构域抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制被引量：2
- 2020年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害世界养猪业,目前仍无有效防控策略,因此探究宿主内源性蛋白拮抗PRRSV的分子机理意义重大。前期试验发现核因子I/A(nuclear factor I/A,NFIA)可以有效抑制PRRSV复制,故本试验以非洲绿猴胚胎肾细胞Marc-145细胞为模型,对NFIA抑制PRRSV复制的分子机理进行了深入探究。首先,构建NFIA的N末端DNA结合结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-ΔN和C末端转录激活结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-ΔC并分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后用qRT-PCR和Western blot的试验方法分别检测病毒N蛋白的RNA和蛋白表达水平。结果显示ΔC仍能有效降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,但ΔN则不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,这表明NFIA的N末端结构域是抑制病毒的关键。其次,对NFIA全长质粒pcDNA3.1-Flag-WT进行N末端结构域内不同功能位点的双碱基突变,分别破坏掉NFIA的促腺病毒复制功能(Mut1,YR86~87WL)、DNA结合功能(Mut2,LR119~120VD)和二聚化功能(Mut3,LF135~136VD),将突变质粒分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后通过qRT-PCR和Western blot检测发现,Mut2和Mut3不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,说明N端结构域的DNA结合功能位点和二聚化功能位点是NFIA抑制PRRSV复制的关键。结果表明,核因子I/A(NFIA)主要依赖其DNA结合结构域的二聚化与DNA结合功能来抑制PRRSV复制。
- 赵旭阳史西保张小转陈静王丽邓瑞广张改平
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α(nsp1α)的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需被引量：1
- 2015年
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。NLRP3炎症小体作为先天性免疫的重要组分在机体抗病毒中发挥重要作用。前期研究发现PRRSV能够激活NLRP3炎症小体,但PRRSV是否存在拮抗NLRP3炎症小体的组分还未见报道。本研究首先在缺失内源性炎症小体的HEK293T细胞中,共转染NLRP3、ASC、procaspase-1和pro-IL-1β四个真核表达质粒,建立NLRP3炎症小体的体外研究模型。然后,在该炎症小体模型细胞和猪肺泡巨噬细胞中,转染PRRSV nsp1α的真核表达质粒,结果表明nsp1α能够明显拮抗炎症小体的活化,而进一步的突变试验表明缺失N端锌指(ZF)结构或者突变ZF结构的nsp1α均不能抑制NLRP3炎症小体活化。本研究不仅首次发现了拮抗NLRP3炎症小体活化的PRRSV蛋白——nsp1α,而且发现nsp1α的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需。本研究进一步发现了PRRSV拮抗天然免疫的新机制,并为PRRSV的防控提供了潜在的分子靶点和理论指导。
- 王超史西保史西保王丽陈静王爱萍王爱萍邓瑞广
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒IL-1Β
- 稳定表达靶向BVDV shRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影响
- 2014年
- 为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对BVDV复制的影响,利用脂质体介导法将BVDV shRNA真核表达质粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及对照质粒pSGH1转染MDBK细胞,通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDV shRNA单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235及对照细胞系subclonepshmock。通过观察其细胞病变效应(CPE)、测定TCID50及RT-PCR、流式细胞术检测BVDV shRNA细胞系对BVDV复制的影响。结果表明,与阴性对照组相比,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV 72h后CPE不明显,其TCID50低于阴性对照组;RT-PCR结果显示,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV后病毒E2基因的表达减弱;流式细胞术检测不同细胞系接毒24h后的结合率,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235与病毒结合率分别为11.37%和11.51%,与对照组(20.25%)相比有所降低。综上,稳定转染BVDV shRNA的单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235对BVDV的复制具有抑制作用。
- 范璐王丽史西保樊剑鸣王爱萍张改平
- 关键词：RNA干扰牛病毒性腹泻病毒短发夹RNA
- 一种可实时监测的固相指数富集的配体系统进化技术
- 本发明公开一种可实时监测的固相指数富集的配体系统进化技术(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment，SELEX)方法，该方法通过将筛选靶标固定于固相载体聚苯乙...
- 王方雨张改平胡骁飞赵东职爱民史西保邓瑞广
- 文献传递
- 甲基-CpG结合结构域蛋白2抑制PRRSV复制的研究被引量：2
- 2019年
- 为了研究甲基-CpG结合结构域蛋白2(MBD2)在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制是否有抑制作用。首先,构建MBD2的3’-UTR报告质粒,通过双荧光素酶报告结果表明MBD2是miR-373靶基因。然后用MOI=1的PRRSV感染MARC-145细胞,在24、36、48 h后分别取样,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blots试验进行检测。结果表明,PRRSV感染下调MBD2的mRNA和蛋白的表达水平。用真核表达载体pcDNA3.1-Flag构建了MBD2的真核表达质粒pcDNA3.1-Flag-MBD2,用pcDNA3.1-Flag-MBD2转染MARC-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后收获细胞。TCID50的试验结果表明,过表达MBD2能降低PRRSV滴度,而qRT-PCR和Western blots的结果则表明MBD2能降低PRRSV的载量;相反,MBD2的siRNA试验表明,下调表达有利于PRRSV在MARC-145细胞复制。通过基因缺失试验,构建MBD2部分结构域缺失的表达质粒,最终发现MBD2的GR与MBD结构域可能在MBD2抑制PRRSV复制起关键的作用。研究结果表明,MBD2是拮抗PRRSV的宿主内源性蛋白,并发现MBD2的GR与MBD结构域可能在MBD2抑制PRRSV复制中起关键的作用,而PRRSV可能利用miR-373来下调MBD2的表达,从而逃逸宿主对病毒的清除。
- 赵慧君赵旭阳史西保陈静陈静王丽王丽李青梅邓瑞广邓瑞广
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- PRRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化被引量：4
- 2011年
- 从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T载体。基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化。SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40 kD的融合蛋白;使用1.0 mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8 h可获得最大表达量。
- 刘明张改平肖治军郭军庆乔松林王丽史西保刘运超游雷鸣王爱萍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征反转录克隆WESTERN-BLOT
