吴治昊
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：东北林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学更多>>
- 转肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株的筛选
- 2012年
- 为了筛选肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株,研究利用人工合成的小鼠肌肉启动子SP,连接前期工作中获得带有GFP基因的小鼠MSTN基因RNA干涉载体pR-NAT-M1,构建真核表达载体pRNAT-SP-M1,将pRNAT-SP-M1线性化后转染小鼠成纤维细胞并通过300μg/mL G418筛选获得转基因阳性细胞。结果表明:获得的转基因阳性细胞呈现正常的小鼠成纤维细胞的梭形,且在荧光显微镜下呈现出表达绿色荧光蛋白的绿色;转基因阳性细胞的生长曲线呈"S"形;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍具有正常的细胞形态和增殖特性;PCR鉴定结果显示转基因阳性细胞基因组DNA中整合有pRNAT-SP-M1序列。说明成功获得了转肌细胞特异表达的MSTN基因RNA干涉序列小鼠成纤维细胞株。
- 吴治昊薛超安星兰王春生苗向阳安铁洙朴善花
- 关键词：小鼠MSTN基因RNA干涉成纤维细胞
- 转KAP6.1-GFP-蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1
- 2011年
- 【目的】通过体细胞核移植为获得皮肤特异表达蜘蛛拖丝蛋白的绵羊奠定基础。【方法】将pcDNA3.1和带有角蛋白结合蛋白启动子质粒pGM-T-KAP6.1分别用BglⅡ和Hin dⅢ双酶切后连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S连接,最后通过酶切与pIRES2-EGFP质粒连接后构建真核表达载体pIRES2-EGFP-4S;将此载体线性化后,采用脂质体法转染绵羊皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因阳性细胞。【结果】筛选得到转pIRES2-EGFP-4S的阳性细胞。对阳性细胞经体外培养后的检测显示:(1)细胞形态(长梭形)、细胞生长曲线(呈S形)、群体倍增时间(随培养时间增加逐渐缩短)和细胞接种率(细胞贴壁率及存活率在24 h内逐渐升高,并达到最高值125%)等均具有正常绵羊成纤维细胞的生物学特征;(2)阳性细胞经冷冻复苏后具有与新鲜阳性细胞相似的生物学特征;(3)PCR检测结果显示,pIRES2-EGFP-4S在阳性细胞的基因组中整合。【结论】获得具有在绵羊皮肤特异表达,且便于检测的转蜘蛛拖丝蛋白4S的绵羊成纤维细胞株。
- 王春生原璐宁方勇吴治昊朴善花安铁洙
- 关键词：真核表达载体构建转基因
- 鸡卵清蛋白启动子克隆及特异性表达质粒构建
- 利用转基因动物生物反应器技术来进行人类药用蛋白的生产，在研究生物学领域和开发生物技术方面具有较为广泛的应用。目前有许多的人类药用蛋白，譬如单克隆抗体等都是利用工业生物反应器技术生产，但这样一种体系的建立时间周期长并且经济...
- 吴治昊
- 关键词：启动子基因克隆
- 文献传递
