周东霞
- 作品数：15 被引量：11H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划美国洛克菲勒基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HIV1型C/B亚型DNA、MVA疫苗免疫原性和免疫策略研究
- 研究背景:HIV的基因组中含有gag、pol和env等基因,gag基因为组成病毒核心的核酸核蛋白的编码,pol基因为复制逆转录酶的编码,其编码的蛋白是联接包膜与核心的跨膜蛋白,这些基因编码蛋白在各种类型的艾滋病毒中是一致...
- 孙明蒋国润周东霞王玺李冰香黄小琴史荔褚嘉祐
- 文献传递
- 人类免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白(Gag)在大肠杆菌中的表达
- 2005年
- 目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白Gag,为HIV感染的诊断和疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增获得HIV1gag基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX5X1的tac启动子下游,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDSPAGE和Westernblot分析验证其表达产物。结果表达产物是相对分子质量为82000的GST融合蛋白,且能与抗p24单克隆抗体发生特异性反应。结论重组Gag蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达,且具有良好的抗原性,可进一步用于HIV感染及动物免疫等方面的研究。
- 王杨褚嘉祐周东霞孙明黄小琴俞建昆
- 关键词：大肠杆菌核心蛋白GST融合蛋白BLOT分析GAG蛋白
- 层析技术纯化核酸疫苗被引量：4
- 2007年
- 目的利用层析技术制备高纯度的核酸疫苗。方法用层析技术中的凝胶过滤、亲和、离子交换层析3种方法，依次对核酸疫苗进行纯化，并检测其纯度。结果连续使用3种层析方法获得的DNA达到了理想的分离效果，琼脂糖凝胶电泳未检出RNA，A260与A280的比值介于1．80～2．00之间，其中环状DNA达90％以上。经离子交换层析后的内毒素含量小于10EU／mg DNA，宿主DNA残留量小于0．002μg/μg DNA。结论纯化的核酸疫苗均符合国家标准，为制备核酸疫苗奠定了基础。
- 蒋国润周东霞孙明王玺戴青黄小琴褚嘉祐
- 关键词：核酸疫苗纯化
- 一个由HSV-1诱导的人成纤维细胞差异基因的电子克隆和特性分析
- 2004年
- 目的 :对单纯疱疹病毒1型感染KMB -17细胞后的早期基因反应进行研究。方法 :从HSV -1感染后细胞特异性cDNA文库中筛选出一个EST片段 (GeneBank登录号:Aw307599) ,NorthernBlot分析证实了该基因片段的病毒相关特异性 ,并采用生物信息学的方法进行基因的电子克隆。结果 :克隆出一个新的全基因序列HSP -5contig(GeneBank登录号 :AY142148)。结论 :HSP -5含有完整的ORF框架 ,cds全长456bp,编码156个氨基酸 ;对该基因及其编码蛋白序列的特征进行了分析和预测 ,初步推测了该基因和编码蛋白的结构特点。
- 周东霞潘云华王春丽董承红李卫东李琦涵
- 关键词：生物信息学HSV-1单纯疱疹病毒人成纤维细胞电子克隆
- 一种制备高效感受态细胞的方法被引量：1
- 2007年
- 感受态是细菌最易吸收外源DNA的状态，感受态细胞是基因工程中外源DNA转化必不可少的材料，通常是用新鲜的CaCl2溶液诱导产生，但制备时对实验条件要求较高，本方法制备感受态细胞操作简便，价格便宜，而且转化效率高。
- 潘云华周东霞陈元鼎
- 关键词：质粒感受态细胞细菌
- HIV-1 C/B’亚型多价重组MVA病毒疫苗免疫原性的研究
- 2008年
- 目的:检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)C/B’亚型与痘苗病毒安卡拉株(MVA)的多价重组疫苗的免疫原性,此疫苗中包含HIV-1C/B’CRF株的5个基因,分别是env,gag,pol,nef,tat。方法:设105pfu/ml,106pfu/ml,107pfu/mlADMVA3个剂量组,用ELISPOT方法检测细胞免疫反应。同时,以Gag蛋白作为包被抗原,使用间接ELISA的方法检测体液免疫反应。结果:免疫后的小鼠对插入基因env,gag,pol和nef所表达蛋白均产生了特异性细胞免疫应答,且免疫效果与免疫剂量呈正相关。ELISA结果表明,MVA重组疫苗免疫诱导产生了特异性体液免疫,抗HIV-1Gag的抗体滴度与免疫次数和免疫剂量都存在正相关性。结论:多价MVA重组疫苗能有效地诱导小鼠产生特异的细胞免疫和体液免疫反应。
- 高燕孙明蒋国润张银川王玺李冰香黄小琴陈丹周东霞褚嘉祐
- 关键词：HIV-1免疫原性
- 免疫酶技术在修饰的安卡拉痘苗病毒感染性滴度检测中的应用被引量：1
- 2007年
- 修饰的安卡拉痘苗(modified vaccinia Ankara,MVA)是MVA病毒在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)中经过一系列的传代得到[1],在人体内可以表达MVA病毒蛋白及其携带的外源基因蛋白,但却不形成完整的病毒颗粒,为人体内复制缺陷性病毒[2],安全性好,即使在免疫功能缺陷病人和免疫抑制的恒河猴体内也未显示出明显的副作用.……
- 陈丹于亮张银川周东霞黄小琴禇嘉祐
- 关键词：感染性滴度免疫酶技术免疫诊断稀释度MVA
- HBV重组抗原表位抗原性的研究被引量：1
- 2007年
- 目的在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达HBV抗原表位,并对其抗原性进行研究。方法人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。以表达产物为包被抗原对其抗原性进行研究。结果嵌和蛋白与抗-HBs血清可发生特异性结合反应。结论在外源抗原表位表达系统中表达的HBV抗原表位具有良好的抗原性。
- 潘云华周东霞李嘉琦陈元鼎
- 关键词：HBV抗原表位抗原性
- 抗HIV痘苗病毒载体(MVA)生产及纯化工艺的研究
- 研究背景:MVA是一种宿主自限性的病毒株,来自疫苗病毒Ankara株,是痘苗病毒科正痘病毒属成员,是目前已知结构最为复杂的病毒之一,其在鸡胚成纤维细胞(CEF)中进行多代次传代后,失去了包括宿主决定基因在内的大量DNA片...
- 孙明李冰香王玺蒋国润张银川黄小琴史荔周东霞褚嘉祐
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒重组抗原表位检测敏感性研究被引量：1
- 2007年
- 目的:在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I3位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和West-ernblot检测表达产物的抗原性,并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗-HBs。结果:嵌和蛋白可与抗-HBs特异性结合,其ELISA检测抗-HBs阳性率为77.5%,Westernblot的为68%,而对照试剂盒的为62%。结论:在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性,有诊断应用价值。
- 潘云华周东霞李嘉琦陈元鼎
- 关键词：HBV抗原表位抗原性
