周秩权
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- HIV-1 Tat真核表达载体的构建及在Huh-7细胞中表达
- 2008年
- 目的构建1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)反式激活因子(Tat)基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达。方法以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pCDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入人体肝癌细胞系Huh-7细胞。RT-PCR检测其基因转录情况,Westernblot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质。结果成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,RT-PCR和Westernblot方法证实该质粒能在Huh-7真核细胞中有效表达HIV-1Tat目的蛋白质。结论成功构建了HIV-1Tat基因的真核表达质粒载体,并在Huh-7细胞中表达,为在Huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础。
- 李洪涛刘水平谭宇蓉李乐周秩权
- 关键词：HUH-7细胞
- 鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合酶基因在生物被膜内的表达及耐药分析被引量：14
- 2008年
- 目的:研究携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌在生物被膜状态和普通液相培养状态下Ⅰ类整合酶基因(Class Ⅰ integrase gene,intI 1)mRNA的表达,并分析Ⅰ类整合子阳性菌耐药情况。方法:收集鲍曼不动杆菌临床株,并经过基因扩增筛选出携带Ⅰ类整合子的阳性菌株。提取携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌在生物被膜和液相培养2种生长状态下的总RNA,采用半定量RT-PCR方法分析2种生长状态下细菌的Ⅰ类整合酶表达情况。并用纸片扩散法对携带Ⅰ类整合子的临床分离鲍曼不动杆菌进行药敏试验。结果:携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌在生物被膜状态和液相培养状态下均有intI 1基因mRNA表达。但生物被膜生长状态下的intI 1mRNA表达量高于液相培养状态下表达量约4倍。在收集的64株鲍曼不动杆菌中有46株携带intI 1基因,而且Ⅰ类整合子基因盒阳性菌株的部分耐药率高于整合子基因阴性的菌株。结论:鲍曼不动杆菌在生物被膜状态intI 1mRNA的表达上调,Ⅰ类整合子在细菌耐药中发挥作用。提示整合子在生物被膜状态下可进行更活跃的基因捕获。
- 李乐夏忠弟胡朝晖周秩权李洪涛
- 关键词：鲍曼不动杆菌生物被膜RT-PCR
- 鲍曼不动杆菌耐药程度与其主动外排泵蛋白的相关性研究
- 目的：了解长沙地区鲍曼不动杆菌的耐药现状和耐药水平，为临床治疗鲍曼不动杆菌感染、合理应用抗生素提供实验依据和指导;研究鲍曼不动杆菌耐药程度与其主动外排泵蛋白的相关性，初步探讨鲍曼不动杆菌主动外排泵基因过度表达的转录调控机...
- 周秩权
- 关键词：鲍曼不动杆菌耐药水平转录调控基因表达
- 文献传递
- 主动外排系统作为鲍曼不动杆菌耐环丙沙星重要机制的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨耐环丙沙星鲍曼不动杆菌的主动外排机制。方法试管稀释法检测56株临床鲍曼不动杆菌对环丙沙星的敏感性;用直接荧光法检测耐药株在有无外排泵抑制剂时鲍曼不动杆菌胞内药物聚集浓度;结合药敏和直接荧光法两项结果筛选出6株外排抑制剂存在时胞内药物聚集浓度明显升高的环丙沙星耐药株,对该耐药组及对照敏感组做胞内环丙沙星聚集浓度的线性测定;RT-PCR法检测两组菌株主动外排泵基因adeABC的表达水平;对adeABC自身启动子区域相关基因片段进行PCR扩增并测序。结果(1)56株鲍曼不动杆菌中,48株对环丙沙星耐药(M IC>4mg/l);0株对环丙沙星中介(1mg/l≤M IC≤4mg/l);8株对环丙沙星敏感(M IC<1mg/l)。(2)耐药组药物积累量不及敏感组,加入外排泵抑制剂叠氮化钠后积累量上升并接近敏感组。(3)耐药组主动外排基因adeB的表达水平(2.372±0.032)明显高于敏感组(1.654±0.040)(P<0.01)。(4)自身启动子区域相关基因片段没有发现突变。结论鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药现象非常严峻;外排泵基因adeABC的过度表达是鲍曼不动杆菌对环丙沙星耐药的重要原因;adeABC基因自身启动子区域无导致adeABC过度表达的基因突变。
- 范志茹夏忠弟周秩权周黎
- 关键词：鲍曼不动杆菌主动外排泵外排泵抑制剂
- 鲍曼不动杆菌耐药程度与其主动外排泵蛋白的相关性研究被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨鲍曼不动杆菌耐药程度与其主动外排泵蛋白的相关性。方法:首先用纸片扩散法检测64株临床鲍曼不动杆菌对8种抗菌药物的敏感性;将其分为A组(0～2种抗生素耐药)、B组(对3～5种抗生素耐药)和C组(对6～8种抗生素耐药);检测64株临床鲍曼不动杆菌对罗丹明6G的外排情况,筛选出罗丹明6G外排明显增加的菌株;并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测主动外排泵基因AdeABC的表达水平。结果:64株鲍曼不动杆菌中有4株对0～2种抗生素耐药(A组),对3～5种抗生素耐药的有33株(B组),对6～8种抗生素耐药的有27株(C组);多重耐药组鲍曼不动杆菌罗丹6G外排明显增高,外排程度A组
- 周秩权夏忠弟李乐李洪涛邓俊范志茹叶亚菲
- 关键词：鲍曼不动杆菌主动外排泵多重耐药
