唐桂霞
- 作品数：19 被引量：48H指数：5
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- 表达人骨形成蛋白2的成纤维细胞系的建立与鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的:建立能稳定表达BMP2的成纤维细胞系。方法:运用阳离子聚合物转染试剂,将含有人BMP2基因的真核表达载体pcDNA3.1-B2导入NIH3T3细胞,通过G418筛选获得阳性细胞克隆,RT-PCR、免疫组化和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BMP2基因的稳定转染和蛋白表达。结果:转染细胞内有BMP2mRNA的转录,胞内及胞外有BMP2蛋白的表达。结论:采用阳离子聚合物转染法可成功地将外源性hBMP2基因导入NIH3T3细胞,为进一步研究诱导牙周膜细胞骨化分化建立基础。
- 王娟孙卫斌卢春唐桂霞
- 关键词：骨形成蛋白2基因转染成纤维细胞
- HIV-1相关炎性细胞因子诱导人血管内皮细胞中潜伏感染KSHV的溶解性周期复制被引量：4
- 2005年
- 目的研究HIV21感染相关炎症细胞因子是否能够激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中潜伏感染的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV);探讨该激活作用是否由KSHVRta基因所介导。方法采用体外模拟系统,研究了与HIV-1感染T细胞诱生的细胞因子相似的重组人细胞因子对HUVEC中潜伏感染的KSHV复制的影响。通过Northernblot和定量PCR检测ORF26(该基因编码的病毒次要衣壳蛋白仅在KSHV被激活时表达)mRNA表达来分析KSHV的激活。运用KSHVRta基因启动子(KSHV复制时最先被激活的启动子)驱动的虫荧光素酶报告基因进一步证实并扩展研究结果。结果包括干扰素-γ(IFN2γ)、肝细胞生长因子P扩散因子(HGFPSF)及制瘤蛋白M(oncostatinM,OSM)在内的重组细胞因子不仅可诱导HUVEC中潜伏感染的KSHV发生溶解性周期复制,而且能增强Rta启动子活性。结论HIV-1感染相关的炎性细胞因子是诱导HUVEC中KSHV溶解性周期复制的因素,而且该过程至少有部分由KSHV的Rta启动子介导。
- 卢春唐桂霞曾怡钱超秦娣
- 关键词：细胞因子卡波济肉瘤相关疱疹病毒
- 逆转录病毒介导Fcy∷Fur/5-FC基因治疗对脑胶质瘤杀伤作用的研究被引量：2
- 2006年
- 目的:研究融合型自杀基因Fcy∷Fur联合5-FC对胶质瘤细胞株C6的杀伤效果。方法:扩增Fcy∷Fur基因并构建Fcy∷Fur基因重组逆转录病毒载体PLXSN-Fcy∷Fur;载体转染包装细胞PT67获得高滴度病毒再转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;以MTT法和FCM法检测5-FC对Fcy∷Fur转基因细胞的杀伤效应。结果:PCR法扩增出全长Fcy∷Fur基因,经测序证实序列正确;PLXSN-Fcy∷Fur滴度为3×106CFU/ml;RT-PCR检测显示Fcy∷Fur转基因阳性克隆的C6细胞有效表达目的基因的mRNA;应用5-FC后FCM法检测到显著的凋亡峰,MTT法检测细胞有明显的杀伤效应。结论:融合型自杀基因Fcy∷Fur联合5-FC可对胶质瘤细胞C6产生明显的杀伤作用。
- 封林森胡卫星卢春唐桂霞史德志贾雪梅
- 关键词：逆转录病毒胶质瘤细胞C6
- 开放读码框架50基因介导HIV-1感染相关的肝细胞生长因子诱导人类疱疹病毒8型复制被引量：3
- 2004年
- 目的 研究人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)开放读码框架 (ORF) 5 0基因启动子在HIV 1感染相关细胞因子肝细胞生长因子 /驱散因子 (HGF/SF)诱导原发性渗出性淋巴瘤 (PEL)BC 3中潜伏感染的HHV 8复制过程中的作用。方法 将HGF/SF连续加入到体外培养的BC 3中 ,分别于培养第 3天和第 7天收集刺激细胞 ,电子显微镜观察成熟HHV 8病毒的形成 ;提取细胞总RNA ,North ernblot和定量聚合酶链反应 (PCR)法检查HHV 8次要衣壳蛋白ORF2 6mRNA转录。同时 ,将已构建的HHV 8ORF5 0启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒分别共转染BC 3和人脐静脉血管内皮细胞 (HUVECs) ,转染后 2 4h加入HGF/SF和 /或重组HIV 1gp12 0刺激 ,刺激后 2 4h收集细胞 ,进行虫荧光素酶活性检测。试验同时以佛波酯 (TPA)刺激为阳性对照。结果 HGF/SF可以上调HHV 8ORF2 6mRNA表达 ,且于刺激的第 7天 ,ORF2 6mRNA表达上升了 4 .1倍 ,BC 3细胞中同时可观察到成熟的HHV 8病毒粒子 ;HGF/SF能够诱导ORF5 0启动子活性 ,但HIV 1Tat和 gp12 0蛋白与HGF/SF协同上调ORF5 0启动子活性的能力较弱。 结论 HIV 1感染相关细胞因子HGF/SF诱导HHV 8复制的过程至少有部分由ORF5 0启动子介导。
- 卢春曾怡钱超唐桂霞
- 关键词：肝细胞生长因子启动区
- CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞的杀伤作用
- 2005年
- 采用分子克隆技术构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′ssarcoma-associatedherpesvirus,KSHV)转化基因K12和含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因重组逆转录病毒表达质粒,分别命名为LZRS-K12和pLXSN-Fcy∷Fur。将LZRS-K12质粒转染NIH3T3细胞系,诱导细胞转化获得具有肿瘤细胞生物学特性的N/K12细胞,进一步将pLXSN-Fcy∷Fur质粒转染N/K12细胞,获得含CD基因的N/K12/FF细胞。加入5-氟胞嘧啶(5-FC)后,采用MTT法、流式细胞仪和免疫组化(IHC)等方法,分别检测细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达。结果显示,N/K12/FF细胞在使用5-FC后存活率明显下降。流式细胞仪检测结果显示,5-FC作用后的N/K12/FF细胞的凋亡率与作用前相比增加了4.6%。与此同时,经5-FC作用后的N/K12和N/K12/FF细胞的生长周期发生了明显变化,均表现为G0-G1期细胞比率降低,S和G2-M期细胞比率增高。5-FC使得N/K12细胞的增殖主要阻滞在G2-M期,而N/K12/FF细胞的增殖主要阻滞在S期。IHC检测结果表明,N/K12细胞在5-FC使用前后Fas和Fas-L表达改变均不明显;而N/K12/FF细胞在5-FC使用后的Fas和Fas-L表达水平均明显高于5-FC使用前的水平。提示,CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞具有杀伤作用;凋亡有可能介导了部分杀伤过程;Fas和Fas-L有可能部分参与凋亡的诱导。
- 唐桂霞卢春
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒CD/5-FC系统卡波济肉瘤杀伤作用
- HIV-1感染相关细胞因子IFN-γ通过Rta基因启动子激活人类疱疹病毒8型被引量：9
- 2004年
- 目的 研究HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ对人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)Rta基因启动子活性影响 ;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性。方法 将已构建的HHV 8Rta启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒转染多种细胞 ,转染后 2 4h加入IFN γ和 或重组HIV 1gp12 0刺激 ,刺激后 2 4h收集细胞 ,进行虫荧光素酶活性检测。试验同时以佛波酯类化合物TPA刺激为阳性对照 ,进行最佳刺激时间点的选择和不同转染方法转染效率的比较。结果 ①HHV 8Rta启动子启动活性在TPA刺激后的 2 4h达到最高峰 ;②HHV 8Rta启动子启动活性的发挥不依赖于HHV 8和 或EBV基因组的存在 ,且在血管内皮细胞 (HUVECs)中启动活性最佳 ;③IFN γ可以诱导Rta启动子活性 ;但HIV 1Tat和gp12 0蛋白与IFN γ协同上调Rta启动子活性的能力较弱。结论 HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ至少部分通过Rta基因启动子激活HHV
- 卢春曾怡黄丽钱超唐桂霞
- 关键词：IFN-Γ基因启动子人类疱疹病毒8型基因重组质粒
- 姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨姜黄素(curcumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO鄄8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响。方法:选用人卵巢癌细胞株HO鄄8910进行体外培养,以1.25-20μg/ml姜黄素分别处理HO鄄8910细胞6鄄24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas鄄L、Bcl鄄2及Bax的表达。结果:姜黄素对HO鄄8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO鄄8910细胞积聚在S和G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas鄄L、Bcl鄄2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论:姜黄素对人卵巢癌细胞株HO鄄8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas鄄L、Bcl鄄2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。
- 王清王淑玉贾雪梅黄丽曾怡唐桂霞
- 关键词：姜黄素卵巢癌凋亡
- 姜黄素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响被引量：6
- 2005年
- 目的 探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株 HO 8910 裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法 1×107 个HO 8910细胞接种于裸鼠皮下,待瘤长成约为 10 mm×10 mm×10 mm时,随机分成对照组和治疗组,对照组给予RPMI 1640 4 ml/kg、治疗组分别给予50、100 mg/kg姜黄素腹腔注射治疗5d后,计算移植瘤的体积、瘤重、抑瘤率;瘤组织标本分别进行 HE染色病理检查,电镜和流式细胞仪检测。结果 姜黄素对移植瘤的生长有明显抑制作用,低剂量组和高剂量组的抑瘤率分别达53 .08%和70 .47%,病理、电镜和流式细胞仪检测瘤组织标本均提示经姜黄素治疗后的肿瘤细胞发生了凋亡。结论 姜黄素对人卵巢癌移植瘤的生长具有抑制作用。
- 王清贾雪梅王淑玉唐桂霞黄丽曾怡
- 关键词：姜黄素卵巢癌裸鼠移植瘤
- 卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:对已制备并经初筛的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),经3次克隆选择,筛选出能稳定分泌针对K8.1蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株共9株。采用Westernblot法评价9株杂交瘤细胞培养上清识别原核表达重组K8.1蛋白和原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白的能力。结果:筛选了9株能够稳定分泌抗K8.1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Westernblot法显示,9株单抗均能特异性识别原核表达K8.1/GST融合蛋白和BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白。结论:成功制备了KSHV包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体。
- 姚水洪卢春张玲汤巧曾怡唐桂霞秦娣钱超
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验WESTERNBLOT
- 卡波济肉瘤相关疱疹病毒K12基因诱导裸鼠体内肿瘤的形成被引量：6
- 2005年
- 目的证实卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K12基因在体外可以转化小鼠成纤维细胞系NIH3T3细胞,体内可以诱导肿瘤的形成。方法采用PCR法构建含KSHVK12基因的重组反转录病毒表达质粒,将该质粒转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞。采用软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤试验,分别证实K12基因体外转化细胞和体内致瘤特性。免疫组化(IHC)染色进一步评价转化细胞及其诱导的肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Fas和FasL的表达水平。结果K12基因转化的NIH3T3细胞在软琼脂中可以形成集落、在裸鼠体内可以形成肿瘤;转化的细胞及其诱导的肿瘤组织中可观察到VEGF、Fas和FasL的表达,其中,Fas和FasL的表达较高。结论KSHVK12基因具有体外转化细胞、体内诱导肿瘤形成的能力。
- 唐桂霞卢春曾怡
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒裸鼠基因诱导转化细胞KSHV反转录病毒
