孙宁
- 作品数：12 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 一种具有高转糖苷活性的β‑半乳糖苷酶组合突变体及其制备方法和应用
- 本发明属于基因工程和遗传工程领域，公开了一种具有高转糖苷活性的β‑半乳糖苷酶组合突变体，其是在去除了自身信号肽的亮白曲霉和米曲霉的β‑半乳糖苷酶的氨基酸序列的基础上，通过双位点的定点饱和突变所获得的，在低聚糖生成量保持不...
- 张伟张宇宏刘波孙宁张佳琳
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- T4溶菌酶在多型汉逊酵母中的表达及抑菌活性测定
- 2011年
- 溶菌酶是一类对多种细菌都具有明显杀菌效果的蛋白质.本研究将T4溶菌酶基因构建到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,以汉逊酵母A16来源的rDNA序列作为同源重组序列,在毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(pGAP)的调控下,使T4溶菌酶在汉逊酵母A16中以组成型方式稳定高效表达.在37℃,pH6.0,摇瓶发酵培养72h后,表达量达到0.49g/L.结果表明,汉逊酵母能够识别源自毕赤酵母的甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子和醇氧化酶终止子序列,而且rDNA作为同源重组序列可以产生多拷贝的汉逊酵母重组子.对重组蛋白进行了N端测序、质谱及SDS-PAGE检测,发现重组蛋白N端与T4溶菌酶N端氨基酸序列一致,分子量大小约为18.7kD,与预计分子量大小相符.重组T4溶菌酶对革兰氏阳性和阴性细菌都具有抑菌活性和溶壁活性.非变性SDS-PAGE(无DTT)检测发现,重组T4溶菌酶形成了分子内二硫键和少量分子间二硫键,这种不正确的二硫键可能导致重组T4溶菌酶损失部分抗菌活性.
- 王楠王跃驹李刚强孙宁刘德虎
- 关键词：T4溶菌酶抗菌活性汉逊酵母RDNA
- 一种具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶组合突变体及其制备方法和应用
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