孟丽
- 作品数：8 被引量：185H指数：7
- 供职机构：北京林业大学园林学院国家花卉工程技术研究中心更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划国家自然科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 抑制性差减杂交(SSH)技术在分离植物差异表达基因中的应用被引量：30
- 2006年
- 抑制性差减杂交技术(SSH)是基于抑制PCR作用的cDNA差减杂交,是在转录水平上研究差异基因表达的技术。该技术在一个循环过程中完成差异表达基因丰度的均等化及目标群体和对照群体中相同基因的去除,从而实现差异表达基因的高度富集。一个典型的SSH过程,可在一个差减杂交过程中将稀有基因序列富集上千倍。本文通过详细分析该技术在植物差异表达基因分离中的应用发现:SSH技术主要用于分离组织特异性表达和诱导型表达的基因。首先,SSH技术广泛应用在分离植物发育过程中不同发育阶段和不同组织器官中的组织特异性表达的基因,为揭示植物生长发育过程的分子机理提供了有效手段;另外,在不同植物中,该技术被大量应用于分离各种生物及非生物胁迫条件下诱导表达的抗性相关基因,可以揭示植物抗逆的分子机理。目前,SSH技术已开始应用于分离与次生代谢产物合成相关的基因。SSH技术是分离植物差异表达基因,揭示植物复杂生命现象分子机理的有效方法,将在植物差异表达基因研究中得到更广泛的应用。
- 黄鑫戴思兰孟丽郑国生
- 关键词：植物差异表达基因
- 蓝色花形成关键基因的分离及其表达分析
- 具有新异花色的花卉往往具有可观的经济价值。利用基因工程技术培育新异的花色品种，是世界花卉育种的研究热点之一。世界销售量最大的切花中都缺少蓝色系，与蓝色月季和蓝色康乃馨的研究进展相比，蓝色菊花的研究刚刚起步。近十几年来对花...
- 孟丽
- 关键词：菊花瓜叶菊蓝色花花色素苷
- 一种有效的花瓣总RNA的提取方法被引量：61
- 2006年
- 利用CTAB法以富含花青素类物质的紫蓝色花瓣为材料提取总RNA，经紫外光谱分析A260/A280比值为1．9—2．0，A260/A230比值约为2．0；电泳检测到了28S、18S和5SrRNA清晰的条带；通过RT—PCR扩增出了目的基因的cDNA片段，说明分离的总RNA能去除色素干扰，纯度和反转录活性较高符合RNA相关实验的要求，是一种经济、有效的花瓣总RNA的提取方法。
- 孟丽周琳张明姝戴思兰
- 关键词：花瓣RNA提取CTABRT-PCR
- F3′5′H基因与蓝色花的形成被引量：39
- 2004年
- 类黄酮-3’,5’-羟基化酶(F3'5'H)是合成蓝色花色素的关键酶,近十多年一直都是蓝色花分子育种领域的研究热点之一。目前已从13种植物中分离到了F3'5'H基因。本文通过对F3'5'H基因已知氨基酸序列进行分析,列出了F3'5'H的功能基序;构建的系统进化树系图体现了各科属间的亲缘关系与进化差异;研究结果表明:不同物种F3'5'H基因的时空表达特性不同,与表达部位的发育进程和着色模式有关;作者还从底物特异性和遗传转化两个方面分析了该基因功能研究的进展。
- 孟丽戴思兰
- 关键词：蓝色花分子育种氨基酸序列
- 菊花CmDFR与CmANS基因启动子序列克隆与瞬时表达分析被引量：8
- 2012年
- DFR和ANS是花青素合成途径下游两个关键的结构基因,其不仅决定花青素苷最终结构及其呈色,还在花器官中特异性表达,研究其启动子区域对花色改良的分子育种具有重要参考价值。利用接头染色体步移法(genome walking),从菊花的叶片基因组DNA中克隆到了2个DFR基因同源序列CmDFR的启动子片段,1个ANS基因同源序列CmANS的启动子片段。生物信息学软件分析结果显示,这3个启动子片段除了含有多个TATA-box、CAAT-box等基本的启动子元件,还含有很多与MYB转录因子相结合的元件,以及G-box等参与光响应的顺式作用元件。利用双酶切方法,将克隆到的启动子片段替换载体pBI121上的35S启动子,将新构建的植物表达载体转入农杆菌中,采用叶盘法侵染菊花叶片和花瓣进行瞬时表达研究。结果表明,这3个启动子片段均具有驱动下游报告基因表达的功能。因此,可以开发成菊花分子育种的有效基因构件。
- 唐杏姣韩科厅胡可孟丽戴思兰
- 关键词：菊花启动子染色体步移
- 花色研究基因新资源:瓜叶菊蓝色花形成相关基因PCFH被引量：3
- 2005年
- 花色素苷代谢途径中关键酶基因的研究一直是花色分子育种工作的主要研究对象,其中F3'5'H基因是蓝色花卉育种的研究热点。本研究利用PCR-RACE技术从瓜叶菊中克隆到了F3'5'H同源基因PCFH(GenBank登录号:AY791885),为新异花色的分子育种工作提供了新的基因资源。
- 孟丽戴思兰
- 关键词：瓜叶菊相关基因RACE技术花色素苷花卉育种
- 瓜叶菊花青素合成关键结构基因的分离及表达分析被引量：39
- 2009年
- 通过RT-PCR的方法分离了花青素合成途径上的关键结构基因片段:CHS、CHI、F3H、F3′H和DFR。在白色系、红色系、紫色系和蓝色系瓜叶菊舌状花中,采用半定量RT-PCR的方法分析CHS、CHI、F3H、F3′H、DFR、F3′5′H、3MaT这7个结构基因在花不同发育阶段的表达模式。结果表明:在白色花中不存在CHS的表达;在红色花中检测到F3′H基因的高丰度表达,但没有检测到F3′5′H的转录本;在蓝色花中没有F3′H表达的信号,但在花序开放的第Ⅰ阶段有较强的F3′5′H的表达信号;而在紫色花中可同时检测到F3′H和F3′5′H的转录本。此外,瓜叶菊花青素合成相关结构基因在花序开放初期高丰度表达,随后逐渐降低,在第Ⅳ阶段表达量再次升高,而在花序开放末期表达量极低或没有表达信号。
- 胡可孟丽韩科厅孙翊戴思兰
- 关键词：瓜叶菊花色花青素基因分离
- 瓜叶菊F3'5'H基因cDNA的克隆、序列分析及其原核表达被引量：12
- 2005年
- 蓝色花的形成主要由于是花瓣中3',5'-羟羟基花青素(飞燕草色素及其衍生物)的相对含量较高,类黄酮-3',5'-羟基化酶(F3'5'H)是合成这类色素的关键酶。不同物种F3'5'H同源基因的分离与特征解析能够为蓝色花的分子育种工作提供更多的理论依据。瓜叶菊花色多变,舌状花有白色、红色和蓝紫色等。根据已知F3'5'H保守的氨基酸序列设计了3条简并引物,通过RT-PCR从蓝色的瓜叶菊舌状花中扩增出了保守序列;利用RACE方法得到了两端序列。设计全长引物RT-PCR分离出了瓜叶菊F3'5'H同源基因(PCFH)。cDNA全长1660bp,编码505个氨基酸。序列分析表明PCFH编码的氨基酸序列中包含有已确定的保守基序,包括血红素结合区、I螺旋区和膜插入点的信号序列等。与其它物种的F3'5'H基因的序列相似性也较高。与翠菊、拟南芥和矮牵牛的序列相似系数分别为76%、59%和50%。序列相似性表明PCFH基因与茄子、矮牵牛和草原龙胆等同属于CYP75亚家族。利用pET28a载体PCFH在大肠杆菌BL21中实现了表达,IPTG诱导的差异蛋白大约为57kD,PCFH编码的多肽分子量相近,这将为进一步研究PCFH的酶学特性奠定了基础。
- 孟丽戴思兰
- 关键词：瓜叶菊原核表达蓝色花
