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Annexin A1在小鼠胚泡植入不同时期子宫内膜组织中的表达及意义被引量：1: 2008年; 目的:探讨Annexin A1在小鼠胚泡植入期的作用。方法:双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析孕d3、d5、d7小鼠子宫内膜蛋白质组,用差异蛋白质组学显示pI约5.1、分子量约38kD的蛋白点在d3、d5上调,且在d5更明显。经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)和数据库搜索对此蛋白点进行鉴定;再用RT-PCR、原位杂交、Western blot和免疫组织化学技术进行验证分析。结果:该蛋白点鉴定为鼠源性Annexin A1;d5小鼠子宫内膜组织中Annexin A1的mRNA和蛋白质水平均增加。结论:Annexin A1可能参与胚泡着床这一重要生命活动过程。; 张群刘学庆陈雪梅王应雄赖雪梅何俊琳; 关键词：ANNEXIN 胚泡植入蛋白质组小鼠子宫内膜

肺炎链球菌转化模型的建立被引量：7: 2008年; 目的:建立一种更加稳定、高效的肺炎链球菌实验室转化模型,以便于对该菌的各种目的基因进行重组改造.方法:分别用改进方法和既往方法制备肺炎链球菌感受态细胞,转化外源DNA,获取发生了转化的菌株,通过抗生素培养基培养和PCR鉴定是否发生转化;并计数抗生素筛选平板上的转化菌落,比较两者的转化率,以确定更佳的转化模型.结果:肺炎链球菌334菌株、31203菌株用改进方法的转化率分别为(0.89±0.20)%,(0.71±0.10)%,高于既往方法的转化率[分别为(6.2±1.4)×10-3%,(5.7±1.1)×10-3%],构建了肺炎链球菌感受态缺陷菌株,建立了改进的肺炎链球菌实验室转化模型.结论:改进的转化模型实现了稳定的肺炎链球菌实验室转化,能方便研究者对该菌进行各种遗传操作,为深入研究其致病的分子机制提供了一个技术平台.; 赵清李南张雪梅胥文春朱兴华张群尹一兵; 关键词：肺炎链球菌细菌感受态

儿童血培养病原菌分布及耐药性分析被引量：9: 2015年; 目的：了解患儿近5年血培养病原菌分布及耐药情况。方法无菌采集患儿血液标本，37℃培养7 d ，采用血平板和巧克力平板转种病原菌，采用自动微生物鉴定仪对病原菌进行鉴定和药敏实验。结果2009～2013年共送检36636份血培养标本，检出病原菌2107株，阳性率为5．75％。其中，革兰阳性菌1413株（占67．06％）、革兰阴性菌626株（占29．71％）、真菌68株（占3．23％）。主要的分离菌为凝固酶阴性葡萄球菌（44．03％），其次是大肠埃希菌（9．33％）、金黄色葡萄球菌（6．46％）、肺炎克雷伯菌（5．74％）和肠球菌属（4．94％）。大部分革兰阴性菌对氨苄西林耐药，大部分革兰阳性菌对青霉素耐药。结论革兰阳性球菌是该院患儿血培养的主要病原菌。大部分病原菌对常用抗菌药物耐药率较高。; 伍云霞汤丽艳郑玉强张群; 关键词：儿童血培养病原菌耐药性

肺炎链球菌dnaJ基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究被引量：5: 2011年; 目的构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)dnaJ基因缺陷菌株,并对其毒力作初步研究。方法采用长臂同源多聚酶链式反应(long flanking homology polymerase chain reaction,LFH-PCR)技术将dnaJ基因替换为红霉素耐药基因(erm)后同源重组于肺炎链球菌,在含红霉素的血平板上筛选出dnaJ缺陷菌株。用PCR鉴定缺陷菌株,以细菌的吸光度值D(600 nm)观察体外缺陷菌株生长情况。将44只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为2组,分别用野生菌株和缺陷菌株处理,腹腔攻毒100μl高(2×108cfu)、低(2×106cfu)剂量的菌液,各处理组的不同剂量组均有11只小鼠。记录小鼠死亡时间,计算存活率。60只BALB/c小鼠采用随机数字表分为2组,分别鼻腔滴注含菌量为2×107 cfu的30μl D39菌液和△dnaJ菌液,感染后6、12、24、36、48 h处死每组中的5只小鼠,分别取鼻咽灌洗液、肺组织(匀浆)和心脏血培养,根据每组平均菌落计数结果绘制细菌在宿主体内的定植曲线。结果 PCR结果显示dnaJ基因完全被erm基因所替代,构建dnaJ缺陷菌成功;单个菌落培养基生长情况表明体外热休克状态抑制dnaJ缺陷菌生长;小鼠毒力实验显示腹腔感染缺陷菌株的小鼠存活率可达到100%,而感染野生菌株的小鼠全部死亡,两者比较有统计学差异(P<0.01)。小鼠鼻腔感染模型中,缺陷菌株在各时间点鼻咽灌洗液和肺部的细菌载量均显著低于野生菌株,而且入血后可在感染24 h内被宿主清除,上述差异有统计学意义(P<0.01)。结论采用LFH-PCR技术作基因突变完全替代dnaJ基因,方法简便快捷;dnaJ的缺陷影响细菌在体外应激条件下的生长,并显著降低细菌在宿主体内的毒力和定植。; 崔瑾张群董杰姜慧周爱娥董姗姗张雪梅尹一兵王虹; 关键词：肺炎链球菌 DNAJ 毒力

儿童化脓性关节炎病原菌分布及耐药性分析: 2024年; 目的:分析171例儿童化脓性关节炎病原菌的分布及耐药性,为临床诊治提供依据。方法:回顾重庆医科大学附属儿童医院2012年1月至2022年12月化脓性关节炎患者的细菌培养及药敏试验结果,分析其病原菌分布及耐药性特点。结果:171例患者共检出病原菌82株,其中革兰氏阳性菌(Gram-positive G+)74株,革兰氏阴性菌(Gram-negative G-)8株。居前3位的细菌为金黄色葡萄球菌(54株,65.9%)、化脓性链球菌(7株,8.5%)、肺炎链球菌(5株,6.1%)。<2岁的患者主要病原菌为金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌(15例,71.4%),2~5岁的患者主要病原菌为金黄色葡萄球菌(9例,81.8%),5岁以上的患者主要病原菌为金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌(40例,88.9%)。所有G+对万古霉素和利奈唑胺耐药率0%,金黄色葡萄球菌对苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、氟氯西林的耐药率<30%,化脓性链球菌对青霉素耐药率0%,肺炎链球菌对青霉素、头孢曲松耐药率20%。所有G-对头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星、环丙沙星、亚胺培南耐药率均为0%。结论:临床医师在治疗化脓性关节炎时可根据所在区域的主要病原菌及其耐药特点结合患者年龄分布特征选择适宜的抗菌药物。; 黎梓宇李各芳何波张群; 关键词：儿童化脓性关节炎病原菌耐药性分析

46株肺炎链球菌的血清型别和毒力因子基因的保守性分析被引量：3: 2013年; 目的研究临床分离的肺炎链球菌菌株的血清型和重要毒力因子碱基序列的保守情况，为临床肺炎链球菌疫苗的使用和蛋白质疫苗的研发提供参考依据。方法收集2010—2013年重庆医科大学附属儿童医院11岁以下儿童中分离的46株肺炎链球茵，用多重PCR进行血清型分型。同时PCR扩增肺炎链球菌的11个毒力基因ply、lytA、nanA,phtD、c如P、cps2A、bacterio—cin、psaA,piaA、pcsB和stkP，测序后分析碱基序列的突变情况。结果46株肺炎链球茵共检出13种血清型，其中19A（19．57％）为最常见的血清型，其次为23F和19F（各占15．22％）。临床菌株毒力基因ply、lytA、nanA、phtD、czpP、cps2A、bacteriocin,psaA,piaA、pcsB和stkP的碱基序列保守性分别为97．82％、96．31％、82．96％、87．50％、98．48％、83．68％、66．27％、99．46％、98．63％、88．72％和96．67％。结论在重庆地区儿童感染的肺炎链球菌中，血清型19A分布比例最高，本地区儿童接种肺炎链球菌疫苗时应首选含有19A血清型荚膜多糖抗原的PCVl3疫苗。毒力因子ply、stkP、piaA、lytA、cop和psaA基因在临床菌株中保守性较高，具有作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白质的潜力。; 刘孟涓张群王虹胥文春何於娟尹一兵张雪梅; 关键词：肺炎链球菌血清分型毒力因子

人Ⅰ型谷丙氨酸氨基转移酶的原核表达及抗血清的制备: 2009年; 目的:构建人谷丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫家兔,制备ALT1抗血清.方法:从HepG2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增alt1基因,并将其克隆入pMD19-T载体中测序,将测序正确的目的基因克隆至PET-32a(+)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western Blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA,Western Blot进行检测.结果:测序证实克隆的基因序列与GenBank中的ALT1序列相符;SDS-PAGE,Western blot结果证实获得Mr为75×103的ALT1融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1∶100000,Western Blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合.结论:获得了ALT1重组蛋白及特异性多克隆抗体.; 李有强张雪梅王虹李南张群胥文春; 关键词：丙氨酸转氨酶免疫血清

通过替代失活的方法分析核酸片段在肺炎链球菌毒力中的作用: 2011年; 目的鉴定基因spd—ABC、spd-1672、sp-1673和长间隔序列spd—J在肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae，S．pn）毒力中的作用。方法采用长臂同源聚合酶链反应（LFH—PCR）的方法分别构建这4个序列的红霉素抗性基因（erm）替代缺失突变体，通过PCR和测序鉴定是否构建成功；通过绘制生长曲线观察基因对细菌生长繁殖的影响，通过小鼠毒力实验观察基因对细菌致病性的影响。结果所构建缺陷菌目的基因由eFm基因完全替代；spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J3个片段缺陷菌的生长趋势与野生菌没有明显差异，生长大约5hA值均可达到峰值，而spd-1672缺陷菌出现明显的延迟现象，生长8h后其4值才达到最高值；野生菌与缺失spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J的缺陷菌感染小鼠各组半数死亡时间分别为19、22、24和24h，差异无统计学意义，而spd-1672缺陷菌感染小鼠的半数死亡时间在75h左右，显著长于野生菌感染小鼠组（P〈0．05）。结论在构建的4个单个基因缺失突变体中，spd-1672缺陷后．S．pn生长明显延迟，毒力显著下降，提示spd-1672是s-Pn的一个新的毒力因子。; 张彦青黄健张群钟文胥文春王虹张雪梅; 关键词：肺炎链球菌毒力

2018-2021年重庆儿童医院临床分离菌的分布特征和耐药性分析被引量：1: 2023年; 目的了解2018—2021年重庆儿童医院临床分离菌的分布特征及耐药性,为临床合理使用抗菌药物和医院感染的预防控制提供科学依据。方法采用纸片扩散法或全自动仪器法对临床分离菌株进行体外药敏试验,按照CLSI 2021年标准判读结果,用WHONET 5.6软件进行数据分析。结果2018—2021年共收集临床分离株57888株,其中革兰阴性菌占62.0%,革兰阳性菌占38.0%。分离病原菌主要来自于下呼吸道标本,各年龄组分离的主要病原菌分布不同,新生儿主要以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为主,婴幼儿期主要以肺炎链球菌和流感嗜血杆菌为主。新生儿组耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)的检出率(26.8%和11.5%)明显低于其他各组,而耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)和耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)的检出率(22.8%和15.6%)则明显高于其他各组;婴儿期耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CREC)的检出率最高(7.3%);青春期组鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药率(>45%)明显高于其他各组。结论儿童各个年龄组之间细菌的分布和对抗菌药物的耐药性有所不同,可以根据儿童年龄进行分组分析,以便更好指导临床合理用药和院感防控。; 刘燕张群; 关键词：儿童细菌耐药

肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备: 2011年; 目的构建肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达系统,制备其多克隆抗体.方法设计引物,利用PCR技术扩增肺炎链球菌D39菌株的spxA基因,并插入表达载体pET-28a（＋）内,测序鉴定.重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中,以IPTG诱导表达含6个组氨酸标签的SpxA重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.用ELISA及Western印迹方法分别检测多克隆抗体的效价及特异性.结果从大肠埃希菌中诱导出高表达的SpxA重组蛋白,纯化后免疫小鼠获得抗血清,ELISA测定其效价可达1：2 560 000以上,Western印迹结果显示其能特异性地作用于肺炎链球菌SpxA.结论成功构建了pET-28a（＋）-spxA原核表达质粒,获得了高纯度的目的蛋白和高滴度、高特异性的多克隆抗体.; 陈倩钟文张群黄远帅张雪梅; 关键词：肺炎链球菌多克隆抗体

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张群

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