徐林
- 作品数：114 被引量：279H指数：9
- 供职机构：遵义医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”贵州省优秀科技教育人才省长资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- miRNA-126基因敲减小鼠脾脏中免疫细胞的组成变化被引量：4
- 2016年
- 目的:观察miRNA-126基因敲减(Knock down,KD)小鼠脾脏中免疫细胞组成比例变化并探讨其意义。方法:Realtime PCR探针法检测miR-126KD小鼠脾脏中miR-126表达水平,计算脾脏总细胞数;HE染色观察脾脏组织的病理学变化;流式细胞术(FACS)分别检测脾脏中DCs细胞、巨噬细胞、γδT细胞、NKT细胞,CD3^+T细胞和其亚群以及CD19^+B细胞的比例并计算细胞绝对数;免疫印迹法(Western blot,WB)检测脾脏组织中磷酸化NF-κB和磷酸化Akt的表达水平。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD脾组织中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),细胞总数明显增加(P<0.05),且发生明显病理学改变;固有免疫细胞中NK细胞的比例和细胞绝对数显著增加(P<0.05),但巨噬细胞的比例显著降低(P<0.05);适应性免疫细胞中CD3^+T细胞和CD4^+T细胞的比例和绝对细胞数都显著增加(P<0.05),而CD19^+B细胞仅绝对数显著增加(P<0.05);最后miRNA-126KD小鼠脾脏组织的磷酸化NF-κB和磷酸化Akt水平明显增加(P<0.05)。结论:miRNA-126敲减小鼠脾脏中各免疫细胞亚群的组成发生明显改变,可能与NF-κB和Akt信号通路传递变化有关,为后续探讨miR-126在机体免疫应答中的作用提供了前期实验基础。
- 雷良玉胡燕郭萌萌卢佳郑文徐华林陈超徐林
- 关键词：免疫细胞
- miR-7基因敲减对LPS诱导巨噬细胞炎症反应的影响被引量：5
- 2019年
- 观察miR-7基因敲减(knockdown, KD)对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的影响,并初步探讨其机制。分别用0、50、100、200 ng/mL LPS刺激野生型(wild type, WT)小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,经实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, Real-time PCR)检测发现,随着LPS刺激浓度的增加,巨噬细胞中miR-7的表达水平逐渐升高,且在100 ng/mL LPS浓度刺激下miR-7表达最显著(P<0.01)。用100 ng/mL LPS处理miR-7 KD小鼠和WT小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,镜检观察到巨噬细胞形态均由圆形变为长梭形,并伸出长长的伪足。应用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD80和CD86分子的表达情况,结果显示,LPS作用后,miR-7 KD小鼠骨髓来源巨噬细胞表面CD80和CD86的比例较WT小鼠显著上调(P<0.05)。Real-time PCR和ELISA结果显示,miR-7 KD小鼠巨噬细胞在LPS刺激后,炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-ɑ的表达显著增加(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,LPS刺激后,与对照组相比,miR-7 KD小鼠巨噬细胞中NF-κB p65和p-NF-κB p65的蛋白水平显著升高(P<0.01)。以上数据显示,miR-7基因KD可显著增强LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,可能与NF-κB信号通路的传递增强有关,提示miR-7在巨噬细胞炎症过程中发挥重要的调控作用。
- 陈慧子郭萌萌郭萌萌岳东旭赵娟娟陈超岳东旭
- 关键词：巨噬细胞炎症
- MicroRNA-126调控CD4^+Foxp3^+T细胞的外周诱导及功能被引量：2
- 2016年
- 目的探讨Micro RNA-126对CD4^+Foxp3^+Tregs的外周诱导调控及功能的影响。方法分选Balb/c小鼠脾脏CD4^+CD25-初始T细胞,在anti-CD3/CD28的激活下,用TGF-β进行诱导培养,在第3、5天FACS检测CD4^+Foxp3^+Tregs的比例,Real-time PCR检测mi R-126的表达;采用mi R-126抑制剂抑制mi R-126后,FACS检测CD4^+Foxp3^+Tregs的比例,Real-time PCR检测mi R-126的表达;进而采用mi R-126 ASO下调CD4^+Foxp3^+Tregs中mi R-126的表达,Real-time PCR检测IL-10和TGF-β的表达,CFSE标记技术分析CD4^+Foxp3^+Tregs免疫抑制功能。结果 mi R-126在活化的Tregs中的表达高于在活化的CD4^+CD25-T细胞中的表达(P<0.05);TGF-β在体外诱导生成Foxp3^+CD4^+T细胞的比例组间差异具有统计学意义(P<0.05),同时在Tregs的诱导过程中,mi R-126的表达上调(P<0.05);CD4^+CD25-T细胞体外瞬时转染mi R-126抑制剂,与对照组比较,Foxp3^+CD4^+T细胞的比例组间差异具有统计学意义(P<0.05),mi R-126抑制剂能有效下调mi R-126的表达(P<0.05);与对照组相比,mi R-126 ASO转染组Tregs中Foxp3、CTLA-4和GITR的表达均降低(P<0.05),且TGF-β和IL-10的m RNA相对表达均降低(P<0.05);CFSE标记细胞增殖实验显示,mi R-126 ASO Tregs组CD4^+CD25-T细胞增殖与Tcon组、Control Tregs组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论下调mi R-126的表达能显著削弱CD4^+Foxp3^+Tregs的外周诱导和免疫抑制功能。
- 秦安东刘娟罗军敏徐林
- 关键词：调节性T细胞MIR-126FOXP3TGF-Β
- DNA甲基化与衰老的相关研究进展被引量：4
- 2018年
- 衰老是人类生活中一个自然而渐进的过程。在大多数生物体中,衰老速度与平均寿命成反比,它受遗传、环境、生活方式和疾病等影响。衰老被认为与细胞中各种分子的改变有关,这种改变在人的一生中积累。而DNA甲基化是老化过程中研究最深入和表征最完善的表观遗传修饰之一。DNA甲基化模式的变化被认为是衰老的主要标志之一。自1983年起,用于检测DNA甲基化的技术得到大幅度提升,且其在医学和生物学中的作用取得重大进展。因此,了解衰老过程中发生的DNA甲基化变化是一个主要的研究领域,这将有助于寻找衰老的标识基因和开发新的治疗方法来延缓衰老。
- 徐林葛正龙
- 关键词：衰老DNA甲基化叶酸氧化应激
- 微小RNA-126基因在CD4＋T细胞介导小鼠自身免疫性肠炎中的作用被引量：1
- 2017年
- 目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;FACS检测CD4^+T细胞的比例变化及其表面活化分子CD62L、CD44的表达;MACS分选出WT和miR-126KD小鼠脾脏中CD4^+CD62L+T细胞,CFSE染色标记后,分别经尾静脉转输给WT小鼠,再诱导自身免疫性结肠炎模型;HE染色观察结肠组织病理变化;FACS检测CFSE阳性CD4^+T细胞表面活化分子CD62L、CD44的表达变化。结果与对照组相比,miR-126KD小鼠肠组织绒毛缺失不完整,黏膜上皮出现较大溃疡,炎性细胞浸润增加;FACS结果显示,miR-126KD组小鼠CD4^+T细胞比例和总数显著上调(P<0.01);且高表达CD44,低表达CD62L;过继转输实验结果显示,miR-126KD小鼠CD4^+T细胞转输组结肠组织损伤加重;同时,CFSE+细胞高表达CD44,低表达CD62L。结论 miR-126基因敲减加重葡聚糖硫酸钠所致肠炎的病变程度。
- 褚风云胡燕郭萌萌陈超赵娟娟刘云秦娜琳郑静徐林
- 关键词：CD4+T细胞IBD肠炎模型
- 微小RNA-7对人肺癌95D细胞体外增殖的作用被引量：20
- 2010年
- 目的:探讨微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)对人肺癌95D细胞体外增殖的作用。方法:采用体外转染法将miR-7瞬时转染95D细胞后,应用Real-time PCR特异探针法检测95D细胞中miR-7的表达情况,应用MTT法检测95D细胞的生长情况,FCM法分析细胞周期变化,并用Western印迹法检测95D细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的变化。结果:与对照组相比,miR-7转染组95D细胞的miR-7表达水平显著增加(P<0.05),细胞生长明显受抑(P<0.05),且主要阻滞在G1期(P<0.05),而EGFR表达显著下调。结论:miR-7可以抑制人肺癌95D细胞的体外增殖,可能作为后续肺癌生物治疗的新靶点。
- 徐林任涛周涯秦安东郑静
- 关键词：人肺癌体外增殖WESTERN印迹法体外转染瞬时转染EGFR表达
- 微小RNA-7敲减对小鼠脾脏中T淋巴细胞体外功能的影响被引量：4
- 2016年
- 观察微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(Knock down,KD)对小鼠脾脏T淋巴细胞体外功能的影响并探讨其意义。常规分离野生型(wild type,WT)小鼠脾脏T淋巴细胞,经CD3和CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测不同时间点(0h;24h;48h)细胞中miR-7的表达变化;进一步用Con A、CD3和CD28抗体刺激miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞,CCK8检测细胞增殖率;Real-time PCR检测miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10表达的变化;FACS检测CD4+T和CD8+T细胞的数量变化及CD4+T细胞膜分子CD44、CD62L和IL-4、IFN-γ的表达变化。结果显示,WT小鼠脾脏T淋巴细胞活化后,miR-7的表达水平显著上调(P<0.05);与WT小鼠相比,在Con A、CD3和CD28抗体作用下miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞增殖明显增加(P<0.05);miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α和IFN-γ水平均明显上调(P<0.05),而IL-10表达显著下调(P<0.05);FACS检测结果显示CD4+T细胞比例明显上调(P<0.05),而CD8+T细胞的比例变化不显著(P>0.05);CD4+T细胞膜分子CD62L水平显著下降,CD69及IL-4、IFN-γ的表达水平均显著上调(P<0.05)。结果表明,miR-7敲减以后可显著影响小鼠脾脏T淋巴细胞的功能,本实验为后续深入探讨其在T淋巴细胞功能调控中的作用提供实验依据。
- 郑文赵娟娟朱顺飞徐华林雷良玉卢佳贾力褚风云王海嵘徐林
- 关键词：CD4+T细胞
- CD4＋CD25＋Treg细胞和Th17细胞及白细胞介6与HBV相关慢加急性肝衰竭预后关系的Meta分析被引量：14
- 2014年
- 目的 探讨CD4＋CD25＋调节性T淋巴细胞（Tregs）、辅助性T17细胞（Th17）、白细胞介素6 （IL-6）在HBV相关慢加急性肝衰竭（ACLF）疾病进展及预后中的价值. 方法 检索CNKI、万方、维普、PubMed、Embase、SCI数据库中Treg细胞与ACLF相关研究文献,按照纳入及排除标准筛选文献,选择NOS标准评价文献质量,按照PICOS原则提取资料,采用RevMan 5.1软件进行Meta分析. 结果 共纳入9个病例对照研究,Meta分析显示：ACLF患者外周血CD4＋CD25＋Treg细胞频率高于慢性乙型肝炎（CHB）组患者[MD=0.59,95％可信区间（CI）为（1.68 ～ 2.85）]及健康对照组（HC） [MD=1.12,95％ CI为（1.42 ～ 3.66）],但差异无统计学意义（P值均＞0.05）;而ACLF患者外周血Th17细胞频率高于CHB患者[MD=1.73,95％ CI为（0.21 ～ 3.26）]及HC[MD=1.62,95％ CI为（0.52 ～ 2.72）],差异有统计学意义（P值均＜0.05）.ACLF患者外周血IL-6含量高于CHB患者[MD=11.69,95％ CI为（1.98 ～ 21.40）]及HC[MD=13.17,95％ CI为（1.38 ～ 24.95）],差异有统计学意义（P值均＜0.05）. 结论 CD4＋CD25＋Treg细胞可能为影响ACLF疾病进展及预后的重要保护因素;而Th17细胞及IL-6为影响ACLF疾病进展及预后的危险因素.
- 吕红潘宗琴胡世芸陈宇庄勤建姚新生徐林肖政邱隆敏
- 关键词：辅助性T细胞17META分析
- microRNA-7对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞组成的影响被引量：6
- 2015年
- 目的:研究miR-7(MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法:利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋巴结细胞总数,以及HE染色的病理学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中αβT淋巴细胞亚群(CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞)以及CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化相关分子CD69、CD62L和功能相关因子IFN-γ表达的情况。结果:与野生型(Wild type,WT)小鼠相比,miR-7KD小鼠肠系膜淋巴结大小、重量指数和淋巴结细胞总数均显著增高(P<0.05),且HE染色显示MLNs有病理性改变;肠系膜淋巴结中αβCD3+T细胞比例增加显著,其中以CD4+T细胞比例变化最为明显(P<0.05),而CD19+B淋巴细胞比例明显下调(P<0.05),但各亚群细胞总数均明显增加(P<0.05);最后,CD4+T细胞和CD8+T细胞中的CD62L+细胞的比例均显著下调(P<0.05),而CD69+细胞和IFN-γ+细胞比例均显著上调(P<0.05)。结论:miR-7敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中αβT淋巴细胞的组成比例,提示其对肠系膜淋巴结中淋巴细胞的组成和功能具有重要的调控作用。
- 赵娟娟朱顺飞徐华林胡燕郭萌萌陶弋婧周涯秦娜琳郑静徐林
- 关键词：肠系膜淋巴结ΑΒT细胞
- microRNA-7基因敲减对小鼠CD4^+SP细胞胸腺发育的影响被引量：6
- 2015年
- 目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FACS检测胸腺CD4+单阳性(Single positive,SP)细胞的比例并计算细胞总数,同时检测CD4+SP细胞CD44及CD62L表达变化;核抗原Ki-67染色法检测CD4+SP细胞的增殖情况;FACS检测CD4+SP细胞的凋亡变化;Western blot技术检测胸腺中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2表达水平变化。结果:与WT小鼠相比,miR-7KD小鼠胸腺体积、重量以及细胞总数均显著减少,且形态学结构发生改变(P<0.05);FACS结果显示,miR-7KD小鼠胸腺CD4+SP细胞比例明显降低,且细胞总数减少(P<0.05)。此外,CD4+SP细胞的CD44表达水平显著增加,而CD62L表达水平明显减少(P<0.05);同时,CD4+SP细胞增殖及凋亡比例均显著增加(P<0.01);最后,miR-7KD小鼠胸腺中ERK1/2以及磷酸化ERK1/2的表达均明显下调(P<0.05)。结论:miR-7基因敲减后可显著影响CD4+SP细胞的胸腺发育,这可能与细胞活化水平及ERK1/2信号通路改变有关。
- 陶弋婧朱顺飞陈超赵娟娟郭萌萌张忆雄秦娜林徐林
- 关键词：胸腺
