曾琦锴
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：华南理工大学更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响
- 木糖还原酶是重组酿酒酵母工程菌利用木糖生成乙醇代谢途径中的关键酶,该关键酶在利用木糖时依赖NADPH而不是NADH是导致酿酒酵母代谢木糖生成乙醇的最终产率低的主要原因之一。本研究利用质粒载体pET28b分别将突变后的基因...
- 曾琦锴杜红丽翟志臣林小琼林影
- 关键词：发酵微生物木糖还原酶基因表达
- 文献传递
- 木糖代谢关键酶的基因克隆及木糖还原酶的分子改造
- 木糖是木质纤维素类物质水解液中的主要糖分，其有效转化是实现木质纤维素类物质生物转化生产燃料乙醇及其它生物化工产品的关键步骤之一。酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）虽然在工业生产中已有上百年的乙醇...
- 曾琦锴
- 关键词：木糖还原酶基因克隆重组酿酒酵母位点突变木糖醇脱氢酶
- 文献传递
- 热带假丝酵母木糖还原酶在酿酒酵母细胞表面展示被引量：6
- 2008年
- 利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表面展示系统,将来源于热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖还原酶基因xyl1嵌入带有His-Tag的酿酒酵母α-凝集素展示载体pICAS-His,构建重组质粒pICAS- His-Ctxyl1,并转化到酿酒酵母宿主菌酿酒酵母MT8—1,通过流式细胞仪快速检测和筛选,得到重组菌株MT8- 1/pICAS-His—Ctxyl1。将重组酵母用于葡萄糖(15g/L)和木糖(5g/L)的混合糖发酵研究,结果表明,重组酿酒酵母MT8/1/pICAS-His—Ctxyl1细胞具有良好的生长和产酶特性,同时能转化木糖生产木糖醇,在培养基中2.5g/ L木糖转化生成2.5g/L木糖醇,转化率达98.7%。
- 陈璐菲杜红丽林影曾琦锴郑穗平
- 关键词：木糖还原酶木糖木糖醇
- Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响被引量：2
- 2008年
- 木糖还原酶是重组酿酒酵母工程菌利用木糖生成乙醇代谢途径中的关键酶,该关键酶在利用木糖时依赖NADPH而不是NADH是导致酿酒酵母代谢木糖生成乙醇的最终产率低的主要原因之一。为了改变树干毕赤氏酵母木糖还原酶的辅酶依赖性,对它的第21位赖基酸Lys进行了突变。利用质粒载体pET28b分别将突变后的基因K21A-XYL1、K21R-XYL1及野生基因WT-XYL1在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行表达,表达后的蛋白经His-Tag纯化柱纯化后测定酶学性质。结果表明:K21R突变子的辅酶依赖性没有改变,但K21A突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH。
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- 关键词：木糖还原酶定点突变
- 高校文科实验教学中心队伍建设探讨
- 实验教学是高校培养大学生实践能力的重要途径，建设一支高素质的队伍是实验教学中心顺利、高效开展实验教学工作的前提。在分析国内高校文科实验教学巾心队伍建设的现状和存在的问题的基础上，对如何更好地建设文科实验教学中心队伍进行了...
- PENG Xin-Yi彭新一ZENG Qi-Kai曾琦锴
- 关键词：师资队伍实验教学文科实验教学
- 树干毕赤酵母木糖还原酶Lysine270定点突变的理性设计被引量：1
- 2009年
- Lysine270是树干毕赤酵母木糖还原酶(PsXR)与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成结合口袋的关键氨基酸之一.为研究该位点对PsXR辅酶偏好性的影响,用其它19种氨基酸替代Lysine270,构建19种不同的木糖还原酶(XR)突变子,利用同源建模和分子对接的方法评价不同突变子与NAD+或NADP+之间的相互作用,并从中选择突变子K270R和K270N进行实验验证.突变基因及野生基因用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠杆菌内进行诱导表达,经纯化后进行酶学性质研究.结果发现:K270R突变使得XR与NADP+的结合能力降低,米氏常数Km由0.025mmol/L升高到0.050mmol/L;K270N突变使得XR与NADP+不能结合.实验结果亦证实,通过理性选择得到的K270N突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH.
- 曾琦锴林影翟志臣林小琼杜红丽
- 关键词：木糖还原酶定点突变生物信息学
- 木糖还原酶定点突变设计的生物信息学分析被引量：1
- 2008年
- 木糖代谢过程中,木糖还原酶(XR)和木糖醇脱氢酶(XDH)的氧化还原不平衡是利用纤维素生成酒精的关键问题之一.文中借助生物信息学手段(同源建模、酶和辅酶分子对接),通过分析数据库资源,找到了一些影响XR活性或辅酶依赖性的关键氨基酸.结果表明:树干毕赤氏酵母XR与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)之间形成氢键的氨基酸有Lys21、Val222、Glu223、Phe236和Thr273,与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)之间形成氢键的氨基酸有Val222、Glu223、Phe236、Glu237和Thr273;突变Lys21(完全保守)使树干毕赤氏酵母XR只与辅酶NAD结合,突变Glu237(不完全保守)使树干毕赤氏酵母XR只与辅酶NADP结合;热带假丝酵母XR与NADP之间形成氢键的氨基酸有Asn278和Arg282(两者都不完全保守),要改变其NADP依赖性,可以替代Asn278和/或Arg282.
- 杜红丽王靖方曾琦锴凌飞魏冬青林影王小宁
- 关键词：木糖还原酶定点突变同源建模分子对接辅酶生物信息学
- 热带假丝酵母木糖还原酶的酶学性质研究被引量：2
- 2006年
- 研究了从热带假丝酵母(Candida tropicalis)菌体中获得的木糖还原酶(XR)的酶学性质。实验结果证实,C.tropicalis的细胞浆粗提液经盐析、透析及阴离子交换柱层析后得到的酶液中木糖还原酶比酶活为9·3U/mg、最适酶反应pH为6·0、最适反应温度为35℃;以木糖为底物时,Km·Xyl为64·8mmol/L、Km·N·X为0·0622mmol/L;以阿拉伯糖为底物时,Km·Ara为172mmol/L、Km·N·A为0·0375mmol/L。Zn2+是木糖还原酶的激活剂,Fe3+为抑制剂。固定木糖为反应底物,分别以NADPH及NADH为辅酶测定酶活,实验结果显示该菌体中木糖还原酶的活性主要依赖于辅酶NADPH。
- 曾琦锴林影陈璐菲庞冲
- 关键词：酶学性质
