朱定尔
- 作品数：32 被引量：76H指数：5
- 供职机构：中南大学湘雅医学院分子生物学研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 重组人干细胞因子在大肠杆菌中的表达及活性鉴定被引量：6
- 1999年
- 采用ＰＣＲ方法从重组载体ｐＫＫＳＣＦ扩增出人干细胞因子（ＳＣＦ）基因ｃＤＮＡ片段，经亚克隆构建成表达载体ｐＥＴ１１ｄＳＣＦ，经限制性酶谱分析鉴定证实．继用ＩＰＴＧ诱导重组ｐＥＴ１１ｄＳＣＦ在大肠杆菌ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）中表达，经初步纯化获得重组人ＳＣＦ蛋白质，经检测具有生理活性，对脐带血ＣＦＵ－ＣＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖有明显刺激作用，为进一步的生物工程研究奠定了基础．
- 谭文斌成光杰李卫民李卫民朱定尔
- 关键词：干细胞因子基因表达生物工程
- 人类β-珠蛋白基因5’-1559bp上游转录调控区的重组及表达
- 2001年
- 目的 探寻人类 β -珠蛋白基因 5′ -帽位上游新转录调控元件 ;方法 利用重组DNA技术 ,构建及克隆 3个含有人类 β -基因不同 5’帽位上游片段的荧光素酶报告基因重组载体 (pGL2 -promoter/SB -βRHB734、pGL2 -promoter/SB - βRAB573、pGL2 -promoter/SB - βRHfB2 63) ,分别将其导入Hela细胞中 ,采用 β -半乳糖苷酶报告基因为转移效率内对照 ,空白的荧光素酶基因载体为基础对照 ,进行荧光素酶活性比较。结果 3个基因片段载体构建符合设计 ,其相对抑制活性分别为 59.74 %、80 .97%、79.4 2 % ;结论 初步提示人类 β -基因 5’帽位上游 - 2 132～ - 182 2bp片段及 - 182 2～ - 15559bp片段内可能存在有起负调控作用的顺式作用元件 (抑制子 ) ,而 - 2 2 77bp～ - 2 132bp片段间未检出抑制子或增强子活性存在。此初步结果尚需进一步研究证实和阐明其结构与功能的关系。
- 何淑雅杨友云朱定尔
- 关键词：珠蛋白基因报告基因抑制子
- K562细胞定向表达cDNA文库的快速构建被引量：3
- 1996年
- 采用一步法快速从培养的Ｋ５６２细胞中抽提、纯化ｍＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ分子后，通过在ｃＤＮＡ分子两端加ＥｃｏＲＩ适配子、Ｔ４多核苷酸激酶作用下磷酸化、ＮｏｔＩ内切酶消化、过ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱等步骤，与λＥｘＣｅｌｌ／ＮｏｔＩ／ＥｃｏＲＩ／ＣＩＰ载体连接，然后用包装蛋白在体外包装连接产物，感染Ｅ·ＣｏｌｉＮＭ５２２以构建ｃＤＮＡ文库。经检测：该文库含有１．０×１０６个重组子，ｃＤＮＡ分子长度在０．４～８．５ｋ６范围，扩增后的滴度达１．２×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ，完全达到筛选低表达基因的要求，为从Ｋ５６２细胞中克隆新的锌指蛋白ｃＤＮＡ基因奠定了基础。
- 刘智唐迎胜周钢曾海涛朱定尔
- 关键词：白血病K562细胞CDNA文库锌指蛋白
- β-珠蛋白基因的“个体”转录调控元件与功能基因组“体系”的可能关系
- 人类β珠蛋白基因簇的表达调控,其复杂水平为真核基因中少见.可望成为真核基因及其基因组的表达调控研究的典型.我们曾用RT-PCR、Northern印迹杂交、竞争性凝胶滞留分析(cGRA)、虫荧光素酶(Luc)报告基因载体表...
- 朱定尔聂怡玲李厚敏杨友云田菁燕杨宇
- 文献传递
- 高效单链DNA探针在β－珠蛋白基因表达调控研究中的应用
- 1995年
- 直接以克隆的逆病毒载体为模板，在反应管中加入适当比例的α－３２Ｐ－ｄＡＴＰ及其他三种ｄＮＴＰ，以单引物进行线性聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，标记与扩增同时进行，经过一轮ＰＣＲ（５０次循环），可得到高度特异及高效的单链ＤＮＡ探针。作者已将其成功地应用于人类β－珠蛋白基因表达调控的研究。
- 何淑雅杨友云朱定尔
- 关键词：珠蛋白基因表达核糖核酸
- 蛋白C基因新突变His134Asn所致Ⅰ型蛋白C缺乏症被引量：20
- 1998年
- 目的：研究一家族性血栓病相关病因的表型及基因型。方法：先证者、其母、二兄分别在３５，１９，３３岁起无明显诱因患反复性下肢深静脉血栓（ＤＶＴ）。对其四代１３个家庭成员的抗凝血酶Ⅲ、蛋白Ｃ（ＰＣ）、蛋白Ｓ（ＰＳ）、纤溶酶原的抗原和活性及活化的ＰＣ抗性等进行检测。结果：该家族５个成员患有Ⅰ型杂合子ＰＣ缺乏症（ＰＣ抗原和活性降低５０％左右）。ＰＣ基因各外显子及外显子、内含子连接区聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）未发现明显的异常带；亚克隆后测序发现ＰＣ的第Ⅵ外显子３４４４Ｃ→Ａ导致１３４Ｈｉｓ→Ａｓｎ变异，这是国外尚未报道的新突变，被命名为ＰＣ长沙。此突变使限制性内切酶ＨｐｈⅠ位点丧失，用ＰＣＲ／ＨｐｈⅠ进行家系分析，证实了６个家系成员（包括５个ＰＣ缺乏者）具有同样的突变。结论：Ｈｉｓ１３４Ａｓｎ是此家族ＰＣ缺乏所致ＤＶＴ的密切相关病理基因型。
- 郑艳珍朱定尔周伯通
- 关键词：静脉血栓深静脉基因突变
- β地中海贫血基因治疗的研究进展被引量：1
- 2001年
- 基因治疗是根治β地中海贫血研究的重点方向。位点控制区 (L CR)的发现以及新型基因转移系统不断开发研制 ,给导入正常β珠蛋白基因以实现基因治疗的设想带来了希望但同时也产生了新课题 ;与此同时 ,分别从DNA和 RNA水平对受损的β珠蛋白基因进行修正治疗的研究也在开展当中。随着珠蛋白基因表达调控机制研究不断深入 ,同时开发出安全高效的新型病毒载体 。
- 杨宇朱定尔
- 关键词：基因治疗
- 人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究被引量：4
- 2000年
- 人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体中 ,经序列分析证明无误 .为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域 ,用基因缺失技术从 - 1 62 ( Bst X )位点向上游分别延伸至 - 2 73( Pst )、- 339( Sma )、- 381 ( Sac )、- 44 0 ( Eco R )、- 570 ( H inc )、-853( Bgl )及 - 1 1 90 ( Xho )等位点 ,共获 7个不同长度的 h SCF基因 5′旁侧序列片段 ,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶 ( luc)报告基因载体 p GL2 - Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染 He La细胞 ,培养 48h后检测 Luc活性 .结果表明 :h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域对luc表达有明显的增强作用 ,而 - 339～ - 2 73区域则显示有抑制作用 .分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验 ,结果均出现一个或多个特异性滞留区带 ,说明这两个区域存在转录因子的结合位点 .实验结果表明 ,h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域富含 AT,是一典型基质结合区 ,而 - 339～ - 2 73区域为一新的沉默子 。
- 谭文斌聂怡玲郭小珊谭运年成光杰陈汉春朱定尔
- 关键词：人干细胞因子基因基因表达转录调控
- 病毒介导造血干细胞基因转移
- 1998年
- 造血干细胞（Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌ，ＨＳＣ）是体细胞基因治疗尝试的主要靶细胞之一。造血干细胞基因转移具极大的疾病治疗潜能，可应用于治疗造血细胞及非造血系统的遗传性和获得性疾病。由于造血系统的组织形式十分严密，在造血干细胞群体内以长期重建细胞（Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇｃｅｌ，ＬＴＲＣ）为靶细胞而进行的基因转移，能保证其被基因修饰的成熟终末细胞的连续补充。
- 陈汉春谢慎思朱定尔
- 关键词：病毒介导造血干细胞基因转移基因治疗
- β珠蛋白基因5′远端新沉默子克隆及定点诱变被引量：1
- 2000年
- 通过凝胶滞留分析和荧光素酶报告基因检测系统 ,鉴定出人类 β珠蛋白基因 5′旁侧远端帽位上游 - 2 1 32～ - 1 82 2 bp间存在一个活性沉默子片段 (31 0 bp) ,将其亚克隆至p UC- T载体中 ,然后采用人工设计的突变引物 ,将经 DNA足纹分析确定的两个结合位点的核心基序 (β珠蛋白基因帽位上游 - 2 0 1 7～ - 2 0 1 1 bp间的“CTTCCGC”序列和 - 2 0 0 6～ -1 997bp间的“CACTTTATTT”序列 )分别定点诱变为“CTTAAGC”和“CACTTAAGTT”两个突变序列 ,从而构建成两种突变型 31 0 bp片段 ,可用于对活性沉默子位点的结构与功能及β珠蛋白基因表达调控机制的深入研究 .
- 杨宇李厚敏杨友云朱定尔
- 关键词：沉默子定点诱变
