李宏丹
- 作品数：14 被引量：44H指数：5
- 供职机构：辽宁医学院更多>>
- 发文基金：辽宁省博士科研启动基金辽宁省教育厅高校重点实验室项目辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布.应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化,免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50μg/L)可以促进FAKY397位点的磷酸化,对FAK的表达没有影响.应用PI3K抑制物LY294002处理后,FAKY397的磷酸化水平显著降低.HGF处理后,FAK主要位于细胞边缘,呈簇状分布,应用PI3K抑制物,FAK在细胞内弥散分布.HGF处理后,Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加,而经LY294002处理后,Src激酶与SrcY416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中,HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.
- 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳
- 关键词：肝细胞癌肝细胞生长因子黏着斑激酶PI3K
- IPCs微囊化和体外生长分泌功能的研究
- 目的：研究胰岛素产生细胞IPCs微囊化和体外生长分泌功能规律，探索其作为胰岛B细胞替代物的新资源。
方法：取小鼠股骨和胫骨，冲出骨髓，以2×106/ml接种到25cm2培养瓶内，于37℃、5％C02培养箱中培养...
- 穆长征蔡红玉陶仕英李宏丹
- 关键词：体外培养胰岛B细胞
- 文献传递
- 1型糖尿病的干细胞治疗研究进展被引量：5
- 2007年
- 1型糖尿病是由于产生胰岛素的β细胞特征性的被破坏造成的自身免疫疾病。理想的治疗方法就是通过外源的或内源的移植使胰腺细胞再生。干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞,它们都有各自的特点。最近的数据显示这些干细胞能够在体外特定的培养条件下分化成为胰岛素产生细胞。虽然在很多的案例中,来源于干细胞的胰岛素产生细胞在实验中可以逆转糖尿病模型动物的高血糖,但是,要想达到明确的应用于临床,仍然存在几个问题:主要有与胰岛β细胞相似细胞系的获得、移植后的免疫相容性问题和肿瘤的形成。本文综述了从胚胎干细胞和成体干细胞获得胰岛素产生细胞的不同方法、分化后的细胞移植治疗情况以及干细胞治疗1型糖尿病存在的主要问题和可能解决的办法。
- 李宏丹魏嘉穆长征
- 关键词：干细胞诱导分化胰岛素分泌细胞1型糖尿病生物治疗
- 人GRP78蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-GRP78,诱导表达、纯化后检测GRP78蛋白的抗原活性。方法:利用PCR方法从本实验室已构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)上扩增GRP78基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组载体pGEX-4T-1-GRP78。转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,再将所表达的融合蛋白进行纯化。经SDS-PAGE分析后,将所得产物用Thrombin切割;进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价。结果:酶切和测序结果均证实GRP78原核表达载体构建正确,可诱导表达;ELISA检测显示纯化后的人GRP78抗原具有免疫原性。结论:成功构建了人GRP78基因的原核表达载体,获得了纯化的GRP78蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以GRP78为基础的肝细胞癌的血清学检测提供了抗原。
- 宋慧娟李宏丹魏嘉苏荣健
- 关键词：GRP78原核表达蛋白纯化肝细胞癌
- 葡萄糖调节蛋白78反义核酸对HEK293细胞粘附和迁移的影响被引量：2
- 2009年
- 为了研究葡萄糖调节蛋白78(Grp78)对细胞迁移和粘附的影响,应用Grp78反义寡核苷酸(Grp78AS-ODN)处理人胚肾细胞HEK293,对细胞的迁移和粘附特性进行分析。结果发现应用Grp78反义核酸处理细胞可以抑制HEK293细胞的迁移,促进细胞与底物间的粘附。进一步研究发现,应用Grp78反义核酸处理细胞可以促进粘着斑的形成,并引起小GTPaseRhoA在细胞膜和细胞浆中的重新分布。上述结果表明,特异性下调Grp78的表达可以抑制细胞迁移,促进细胞与底物间的粘附。
- 苏荣健李宏丹宋慧娟魏嘉
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78HEK293细胞粘附
- 特异性下调葡萄糖调节蛋白78对肝细胞癌粘附特性和细胞外基质降解的影响被引量：2
- 2009年
- 我们以前的研究表明特异性下调葡萄糖调节蛋白78(Grp78)可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移。为了进一步研究该抑制作用的分子机制,我们应用小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调肝细胞癌细胞系BEL7402中Grp78的表达,并对细胞的粘附、伸展和细胞外基质降解情况进行研究,结果发现特异性下调Grp78可以促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展。我们的研究还显示特异性下调Grp78的表达可以抑制基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达及分泌,这些说明特异性下调Grp78可以抑制细胞外基质的降解。对机制的研究发现特异性下调Grp78表达可以抑制c-jun的磷酸化。这些结果表明特异性下调Grp78可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移,这种抑制作用可能是通过促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展和细胞外基质的降解实现的。
- 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78肝细胞癌细胞粘附细胞外基质降解
- 特异性下调葡萄糖调节蛋白78降低人涎腺腺样囊性癌侵袭和转移的能力被引量：1
- 2010年
- 目的探讨特异性下调葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对涎腺腺样囊性癌(ACC)侵袭和转移能力的影响;方法应用siRNA干扰技术,特异性下调ACC-2细胞内GRP78的表达,通过划痕实验、Transwell实验、四甲基偶氮唑盐(MTT)实验和细胞骨架染色,观察下调GRP78表达后细胞的变化,并应用免疫印迹法检测下调GRP78表达对基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1和TIMP-2的影响。结果划痕实验显示,下调GRP78的表达能够抑制划痕愈合;Transwell实验发现,下调GRP78在ACC-2的表达明显降低穿过的细胞数;下调GRP78表达后细胞骨架染色发现,骨架纤维明显增粗;MTT实验显示,下调GRP78后细胞的增殖能力降低1/3;免疫印迹法检测结果发现,下调GRP78表达后ACC-2细胞的MMP-2、MMP-9的表达降低,TIMP-1、TIMP-2的表达增高。结论特异性下调GRP78的表达能够降低ACC的侵袭和转移能力,这与GRP78参与调节MMP和TIMP的表达有关。
- 王宏李宏丹苏荣健黄克强
- 关键词：涎腺腺样囊性癌葡萄糖调节蛋白78金属蛋白酶组织抑制剂小干扰RNA免疫印迹法
- 尼克酰胺与胰腺损伤提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞的比较被引量：7
- 2010年
- 目的探讨诱导小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为胰岛素产生细胞较好的方法。方法大鼠胰腺提取物和尼克酰胺分别诱导小鼠的BMSCs分化,经免疫组织化学、双硫腙染色、放射免疫学方法和RT-PCR技术(Ins-1、Ins-2、Glut-2、GK)鉴定两种诱导方法诱导细胞的分化程度。结果两种方法诱导后的细胞均可以表达胰岛素。双硫腙染色和胰岛素免疫组织化学的染色结果发现,两种分化后的细胞无明显差异。放射免疫学检测胰岛素及C肽片段:两种分化后的细胞表达的胰岛素随25mmol/L葡萄糖刺激时间的延长产生的胰岛素分泌曲线有明显差别,尼克酰胺分化的小鼠BMSCs产生的胰岛素产生细胞(IPCs)与正常小鼠胰岛细胞的曲线一致性欠佳,而大鼠胰腺损伤提取物分化的小鼠骨髓间充质干细胞产生的胰岛素产生细胞的分泌曲线一致性很好。尼克酰胺分化后的细胞不能产生C肽片段,而大鼠胰腺损伤提取物能够表达C肽片段。RT-PCR结果显示,尼克酰胺与大鼠胰腺提取物均可以表达胰岛细胞相关的几个mRNA(Ins-1、Ins-2、Glut-2、GK)。结论大鼠胰腺提取物与尼克酰胺相比,可能是一种较好的诱导BMSCs分化成熟产生胰岛素的诱导剂。
- 穆长征李宏丹蔡红玉
- 关键词：骨髓间充质干细胞胰岛素产生细胞尼克酰胺放射免疫学小鼠
- 肝细胞生长因子对肝细胞癌侵袭和转移的影响被引量：7
- 2008年
- 目的:研究HGF对肝细胞癌SMMC-7721的上皮-间叶转化的作用,并对其机制进行探讨.方法:HGF处理SMMC-7721后,应用细胞培养、Transwell、划痕实验、WB技术研究HGF对肝癌细胞SMMC-7721上皮-间叶转化的作用.并应用PI3kinase抑制物LY29400210μmol/L预处理细胞,观察SMMC-7721的变化,研究PI3kinase对于HGF作用机制的影响.结果:Transwell和划痕实验显示HGF处理的细胞侵袭和转移能力增强,蛋白印迹结果显示HGF处理的细胞的N-cad、MMP-2、MMP-9和Vimentin的表达增加,E-cad的表达减少.LY294002预处理后,细胞不再受HGF的影响,细胞的形态没有明显变化,Transwell和划痕实验结果与未经处理的SMMC-7721相同.蛋白印迹结果显示:细胞的N-cad、MMP-2、MMP-9、Vimentin和E-cad的表达变化不明显.结论:HGF能够促进SMMC-7721的上皮间叶转化,这种作用通过PI3Kinase实现.
- 王庆军孙抒李宏丹魏嘉苏荣健
- 关键词：肝细胞生长因子肝细胞癌EMTPI3K
- 结直肠癌中黏着斑激酶、整合素、c-Jun氨基末端激酶的表达及相关性研究
- 2012年
- 目的检测黏着斑激酶(FAK)、整合素Src、c-Jun氨基末端激酶(JNK)在结直肠癌组织中的表达,并探讨其与结直肠癌临床病理指标的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测68例结直肠癌组织与癌旁组织中FAK、Src、JNK的表达,结合结直肠癌临床病理指标分析相关性。结果 68例结直肠癌标本中,FAK、Src、JNK的表达水平均与癌旁组织差异显著(P值分别为0.012,0.002,0.012)。3者的表达水平与肿瘤分化程度呈负相关(P值分别为<0.001,0.002,0.004;r值分别为-0.346,-0.356,-0.340),FAK表达与淋巴结转移及UICC分期相关(P值分别为0.006和0.013),但与患者性别、年龄、肿瘤的大小及位置无显著相关。FAK蛋白的表达与Src及JNK蛋白的表达呈正相关(r=0.357,P=0.001;r=0.318,P=0.047)。结论 FAK、Src、JNK在结直肠癌组织中均呈高表达,与肿瘤分化程度呈负相关,且Src、JNK的表达与FAK呈正相关,提示FAK/Src/JNK信号通路在结直肠癌的发生、发展中起重要作用。
- 张丹华苏荣健包翠芬李宏丹李新董明周建平
- 关键词：黏着斑激酶SRCC-JUN氨基末端激酶结直肠癌
