李朝
- 作品数：13 被引量：39H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- TNF-α拮抗肽拮抗机制的计算机模拟研究
- 2004年
- 为了了解从肽库中筛选到的TNF-α拮抗肽的作用机制,用分子模拟程序模建了4条肽序列(TBP1、2、3、6)的结构,然后利用分子对接程序建立了它们与TNF-α作用的理论模型。在得到的模型中,拮抗肽TBP2、3与TNF-α相互作用的区域位于TNF-α分子中形成三聚体的区域,提示这些肽是通过影响TNF-α三聚体的形成而发挥作用的。
- 李朝岳俊杰程度胜黄培堂
- 关键词：拮抗肽拮抗机制计算机模拟研究肽库TBP分子对接
- 酵母双杂交系统筛选与组蛋白去乙酰化酶1相互作用的蛋白质
- 2009年
- 目的:获得组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的cDNA并构建为酵母双杂交系统中的饵基因,筛选出与其相互作用的蛋白质。方法:利用RT-PCR方法从人HeLa细胞中克隆出1446bp的cDNA片段,重组入载体pGBKT7得到pGBKT7-HDAC1,转化至酵母菌AH109,检测其对酵母细胞无毒性也无自激活报告基因活性,然后将其与已转入HeLa细胞基因组cDNA文库的酵母菌融合,进行筛选和验证工作。结果:筛选出3个阳性克隆,经免疫共沉淀试验进一步验证,发现仅有1个蛋白能与HDAC1发生相互作用,测序结果表明该蛋白为FHL2。结论:应用酵母双杂交方法筛选出HDAC1的相互作用蛋白FHL2,为进一步研究HDAC1的作用提供了新线索。
- 封雪李朝周晓巍李宪臻
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶1FHL2酵母双杂交免疫共沉淀
- 一种活性肽
- 本发明公开了一种活性肽,特别涉及一种具有促进血小板生成功能的活性肽。解决了目前公知的活性肽中存在的活性偏低的不足。本发明采用多肽固相合成法设计合成了活性肽单体的序列为IEGPTLRQWLAARAC,酰胺化肽链结构为IEG...
- 程度胜李朝黄培堂周艳荣陈添弥
- 文献传递
- 利用大肠杆菌鞭毛展示的随机肽库筛选TNF-α拮抗肽被引量：1
- 2002年
- TNF α是一种在机体抗感染、抗肿瘤过程中发挥重要作用的细胞因子 ,其对机体具有保护和损伤两方面的作用 ,为了探讨新的抑制TNF α所致炎症损伤等反应的手段 ,构建了细菌鞭毛递呈的随机肽库 ,利用构建得到的肽库 ,进行TNF α特异性结合肽的筛选工作。经过 5轮筛选及DNA测序 ,共得到 6条小肽编码序列。其中 2条序列中含有一V N WG的相同序列框架。进行 6条序列与TNF α结合力的确证后 ,选择了其中的 4条肽序列进行人工化学合成、纯化及鉴定。利用L92 9细胞及MTT法对 4条小肽进行活性测定 ,检测其对TNF α的抑制活性。结果表明 ,在TNF α对L92 9细胞毒性为 30 %左右时 ,含同源序列框架的 2条肽可抑制 90 %左右的TNF
- 李朝周艳荣程度胜黄培堂
- 关键词：随机肽库
- TPO模拟肽与人IgG1Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达及活性鉴定被引量：5
- 2004年
- 构建TPO模拟肽与人IgG1Fc融合蛋白的酵母表达体系。利用PCR技术 ,从重组质粒pET2 8a TMPFc中 ,扩增TPO模拟肽与人IgG1Fc的DNA片段 ,连入pPICZαA酵母表达载体 ,电激法转化毕赤酵母。用MDH和MMH筛选具有正确表型的重组转化子 ,PCR、蛋白质印迹鉴定融合基因。MTT法鉴定TMPFc对Ba F3 mpl细胞生长的促进作用。构建的重组毕赤酵母实现了TMPFc的分泌表达 ,表达量占外分泌蛋白质的 6 5 %。表达蛋白质的相对分子量约6 4kD ,对Ba F3 mpl生长具有促进作用。TMPFc酵母表达体系表达出可观的二价模拟肽 ,为二价TMP活性的定量研究奠定基础。
- 叶祥忠郭强李朝刘凤云程度胜
- 关键词：毕赤酵母融合蛋白
- TPO模拟肽与人IgG1 Fc片段的融合表达及其生物学特性研究被引量：6
- 2002年
- 依据本室获得的人TPO模拟肽序列 ,合成了该模拟肽的DNA序列 ,分别连接至 4种不同长度的人IgG1Fc基因片段的 5′端 ,并克隆至质粒表达载体pET2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,筛选获得了 4种重组工程菌 ,其中3种分别高效表达了 3种不同长度的融合蛋白 ,而第 4种工程菌未表达。表达的 3种融合蛋白的分子量分别约为2 8kD、12kD和 12kD ,表达量约占菌体蛋白总量的 30 %左右 ,纯化获得了 3种TPO模拟肽融合蛋白。 3种融合蛋白均有较好的体外活性 ,维持TPO依赖细胞Ba F3-mp1生长的EC5 0分别为 :13、10、10nmol L。用血小板减少症小鼠动物模型 ,测定了它们的体内活性 ,3种融合蛋白均有升高血小板和缩短血小板恢复时间的功能 ,分别比TPO模拟肽活性提高了 18、8、8倍 ;而对白细胞及红细胞无显著影响。分别用 3种融合蛋白免疫BALB c小鼠 ,均未刺激小鼠产生抗TPO模拟肽抗体 ,并显示了较好的应用潜力。
- 李越希李朝陶开华贾向红程度胜黄培堂
- 关键词：生物学特性
- 一种活性肽
- 本发明公开了一种活性肽，特别涉及一种具有促进血小板生成功能的活性肽。解决了目前公知的活性肽中存在的活性偏低的不足。本发明采用多肽固相合成法设计合成了活性肽单体的序列为IEGPTLRQWLAARAC，酰胺化肽链结构为IEG...
- 程度胜李朝黄培堂周艳荣陈添弥
- 文献传递
- 应用H1-U6双启动子RNAi载体筛选人泛素结合酶hUBE2W的RNAi有效靶点被引量：6
- 2008年
- hUBE2W是新近鉴定出的一种I型泛素结合酶,可能在肿瘤发生和DNA损伤修复过程中起重要作用。RNA干涉是指通过形成局部双链RNA进而特异性地降解细胞内同源基因mRNA的机制,目前已成为基因功能研究的有力工具。通过构建H1-U6双启动子RNAi载体,可以在体内直接转录出针对hUbe2w基因的两段互补小RNA,更接近于生理状态下小干涉RNA的作用。利用RT-PCR方法从293FT细胞总RNA中扩增出hUbe2w基因,分别将其连接至质粒pGL3-Control、pCMV-myc和pDsRed-express-C1中,以便在mRNA水平和蛋白水平检测RNA干涉效果。RNA干涉载体分别与上述报告载体共转染293FT细胞,测定萤光素酶活性和hUBE2W蛋白表达水平,结果显示靶点125和259能够在mRNA水平和蛋白质水平显著降低hUbe2w的表达。
- 张莹莹李朝杨志新许龙朱恒奇周晓巍黄培堂
- 关键词：泛素结合酶RNA干涉
- 新一代抗生素:抗菌肽的相关研究进展被引量：20
- 2004年
- 抗菌肽是一类在自然界广泛分布 ,具有抗微生物作用及其他多种功能的小分子多肽。因具有与传统抗生素不同的杀菌机制而有望成为对抗耐药菌株的新一代抗菌药物 ,在医药、食品、养殖业等领域有很好的应用潜力。报道了抗菌肽的发现、分类、生物效应、作用机制以及结构改造和药物开发应用等方面的相关研究进展。
- 李朝黄培堂
- 关键词：抗生素抗菌肽生物效应
- 促血小板生成素模拟肽的化学合成的活性研究
- 该课题是在国外报道的一种低分子量的血小板生成素(TPO)模拟肽PI的基础进行的,该肽的二聚体活性能显著提高.为使这种模拟肽更易于进行分子间氧化形成二聚体,作者对其进行改构,设计出模拟肽序列P2以及在P2两端分别进行酰胺和...
- 李朝
- 关键词：促血小板生成模拟肽MTT法偶联
