杜谦
- 作品数：21 被引量：35H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项教育部“新世纪优秀人才支持计划”陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 2010-2012年陕西地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查被引量：12
- 2013年
- 【目的】调查陕西地区猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的分子流行病学变化趋势,为进一步预防和治疗猪圆环病毒病提供参考。【方法】于2010-2012年采集陕西西安、咸阳、宝鸡、榆林和延安等地区发病猪群中的141份样品。首先,采用PCR检测样品中PCV2感染情况;然后,通过基因型特异的PCR,检测PCV2阳性样品中PCV2a和PCV2b亚型的感染情况;最后,扩增、克隆和测序PCV2 ORF2基因编码序列,并通过生物信息学软件统计分析所获得基因序列的进化情况。【结果】141份样品中,117份检测为PCV2阳性,阳性率达82.9%,其中的33份病死猪样品中有32份检测为PCV2阳性。基因型特异的PCR检测结果显示,117份PCV2阳性样品中单感染PCV2b的为59份,单感染PCV2a的为11份,另外47份样品为PCV2a和PCV2b混合感染。对32份病死猪PCV2阳性样品的PCV2 ORF2基因序列进行比对分析,结果表明,12份为PCV2b-1A/1B亚型,16份为PCV2b-1C亚型,4份为PCV2a亚型。对各亚型ORF2氨基酸序列的分析结果表明,氨基酸的变异位点主要存在于8-47,59-101,134-169,180-210这4个区域。【结论】陕西地区猪群PCV2感染严重,并且PCV2b-1A/1B和PCV2b-1C亚型是主要流行毒株,氨基酸变异位点主要存在于Cap蛋白潜在表位区。
- 邵萌吕亚辉杜谦时乐黄勇童德文
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2流行株
- 一种GAS样基序突变的PCV2毒株及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种GAS样基序突变的PCV2毒株及其制备方法和应用。对PCV2DNA中的GAS样基序进行突变，使得突变的PCV2DNA在病毒复制中不能与STAT5蛋白结合，并通过病毒拯救获得复制能力远低于野生型PCV2毒株...
- 黄勇童德文韩聪杜谦朱磊
- 永生化山羊滋养层细胞系的建立及其生物学特性分析
- 滋养层细胞在胚胎着床和胎盘形成过程中发挥重要作用,很多致病因素能够引起滋养层细胞的功能紊乱导致胚胎着床失败或流产,获得一株能够稳定传代的山羊滋养层细胞用于体外研究具有十分重要的意义。本研究分离、纯化原代山羊滋养层细胞,转...
- 董峰黄勇赵晓民杜谦童德文
- 关键词：滋养层细胞生物学特性人端粒酶逆转录酶基因
- 文献传递
- 一种GAS样基序突变的PCV2毒株及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种GAS样基序突变的PCV2毒株及其制备方法和应用。对PCV2DNA中的GAS样基序进行突变，使得突变的PCV2DNA在病毒复制中不能与STAT5蛋白结合，并通过病毒拯救获得复制能力远低于野生型PCV2毒株...
- 黄勇童德文韩聪杜谦朱磊
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒YL株VP2基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：6
- 2010年
- 克隆、序列分析及原核表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。根据GenBank已登录的IB-DV VP2基因序列,设计合成一对VP2基因特异性引物,应用RT-PCR技术从陕西省某鸡场分离的IBDV毒株中克隆VP2基因并进行序列分析。再将VP2基因亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-VP2,经鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE检测。成功克隆IBDVYL毒株VP2全基因序列,核苷酸和氨基酸序列分析表明,YL株为IBDV超强毒株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,在宿主菌BL21中成功表达约为53 ku的VP2蛋白。IBDV VP2基因克隆表达成功,为IBDV的分子生物学特性研究提供资料,其表达产物为进一步制备抗IBDV单克隆抗体奠定了基础。
- 黄春旭许信刚童德文王志昇杜谦唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2基因基因克隆原核表达
- 猪传染性胃肠炎病毒感染诱发ROS的积累、p38和p53信号的活化
- 讨猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)体外感染PK-15细胞是否对ROS、MAPK及p53信号转导通路产生影响,凋亡相关基因的表达变化是否为p53所调控.本研究应用间接免疫荧光试验,western Blot分析,荧光素酶活性试...
- 丁利黄勇李兆才戴美玲于高水杜谦童德文
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒体外感染活性氧物质
- Omp25蛋白的真核表达及其对巨噬细胞的作用被引量：1
- 2014年
- 本试验旨在构建表达猪布鲁菌(Brucella suis)外膜蛋白Omp25蛋白的真核重组表达质粒,并探讨Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞生长活性及细胞因子分泌的影响。以猪布鲁菌基因组DNA为模板,设计带有6×His标签的引物克隆Omp25基因,扩增产物克隆入pCI-neo真核表达载体,双酶切及测序鉴定正确后转染猪肺泡巨噬细胞3D4/21,检测其对巨噬细胞生长活性和分泌细胞因子的影响。RT-PCR和Western blotting检测结果证实Omp25蛋白获得正确表达。显微镜观察细胞形态表明,Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞的形态无明显影响。MTT结果表明,Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞的生长活性有轻度但不显著的抑制作用。ELISA检测TNF-α和IL-12蛋白表达水平表明,Omp25蛋白可以显著抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12。本试验成功构建了表达猪布鲁菌外膜蛋白Omp25蛋白的真核重组表达质粒,该蛋白对猪肺泡巨噬细胞的细胞形态没有明显影响,对其生长活性有轻度但不显著的抑制作用,可以显著抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12。
- 吕亚辉邵萌杜谦陈恒黄勇童德文
- 关键词：真核表达
- 生物素标记重组猪圆环病毒2d基因型毒株感染性克隆的构建与鉴定
- 2022年
- 本试验旨在获得临床上逐渐增多的猪圆环病毒2d基因型毒株(PCV2d),并对其引入生物素标记。首先从陕西咸阳某临床发病猪场采集了2头发病仔猪和15头未发病仔猪的组织样本,对其进行猪圆环病毒2型(PCV2)检测,并对阳性样本进行测序及序列比对,将获得的PCV2d基因型毒株基因组orf 2中226~246 bp序列替换为生物素受体肽(BAP)编码序列并克隆入质粒载体,同时稳定构建表达原核生物素连接酶(BirA)的PK15细胞系,将替换有BAP的PCV2d基因组酶切并环化后转染稳定表达BirA的PK15细胞,连续盲传5代后鉴定获得的重组病毒。结果显示,检测的组织样本中共有5头仔猪的样本为PCV2阳性,其中1份样本为PCV2d基因型,4份样本为PCV2b基因型;在获得BAP序列替换的PCV2d,构建重组质粒T-PCV2d-BAP和稳定表达BirA的PK15细胞系后,将环化的PCV2d-BAP转染稳定表达BirA的PK15细胞并盲传5代,经PCR和Western blot检测均为PCV2阳性,且能被链酶亲和素识别。本试验成功获得的生物素标记重组PCV2d基因型毒株为后续探究PCV2d基因型毒株免疫逃避机制提供一个非常有效的工具。
- 林小枫刘梅雪袁玮艺张琼歌朱磊杜谦
- 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆
- 山羊滋养层细胞永生化及苦马豆素诱导其凋亡的信号通路研究
- [目的]苦马豆素(SW)是疯草的主要有毒成分,中毒家畜临床表现为母畜不孕、流产和死胎等,给我国草原畜牧业造成巨大的经济损失.关于SW引起妊娠山羊流产的早期研究发现,SW能干扰胎盘的正常发育并影响绒毛膜上皮细胞的功能.本论...
- 董峰黄勇赵晓民杜谦童德文
- PCV2 Cap蛋白激活NF-κB、PI3K/Akt和MAPKs信号途径调控巨噬细胞IL-10生成
- [目的]猪圆环病毒2 型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,其广泛流行给世界养猪业带来了巨大的损失.PCV2 感染能导致病猪脾脏、淋巴结、肺脏及血液中IL-10表达上调.此外,PCV2 感染体外...
- 杜谦黄勇童德文
