杨少斌
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：天津医科大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- EHD2介导EGFR内吞的分子机制研究
- 目的:表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）是一种存在于细胞膜表面的受体蛋白,当与EGF等配体结合后,EGFR介导细胞内多种信号通路活化或EGFR自身的内吞降解,...
- 杨少斌
- 关键词：EGFR内吞ATP酶微丝
- 文献传递
- 细胞培养液pH对慢病毒包装及感染效率的影响
- 2015年
- 为解决实验室中包装慢病毒转染效率低、感染效率低的问题,从培养液p H角度对病毒包装及感染进行优化。首先构建慢病毒载体cop GFP质粒,采用磷酸钙法和Lipofectamine2000法,转染不同p H培养液培养的293T细胞。在荧光显微镜下比较转染效率,发现磷酸钙法p H（6.5～7.5）转染效率高,培养液p H（6～8）对Lipofectamine2000法转染几乎无影响。使用标准p H（7.2～7.4）培养液包装慢病毒,收取病毒上清液后调节至不同p H,加或不加Polybrene感染293T细胞,发现p H在8～9附近感染效率高,调节慢病毒p H至弱碱性与Polybrene同时使用有助于提高感染效率。
- 潘利杨少斌姜成文许世磊胡明秋
- 关键词：慢病毒转染
- 斑马鱼TATA结合蛋白的生物信息学分析被引量：6
- 2015年
- 斑马鱼TATA结合蛋白(TBP)是转录过程中的重要起始因子。利用生物信息学方法对斑马鱼TBP的理化性质、物种间同源性、保守结构域、跨膜区、亲水性/疏水性、蛋白质二级结构、蛋白质三级结构、蛋白质相互作用进行预测分析。分析表明,斑马鱼TBP全长302个氨基酸,等电点9.8,属于TATA结合蛋白超家族,不含跨膜区,属于亲水蛋白;二级结构以无规则卷曲为主,含5个α螺旋区和8个β折叠区,三维建模空间结构可信度98.9%,进一步分析建模结果可靠;与斑马鱼TBP相互作用的蛋白质均为转录因子或TFⅡD复合物组分。分析结果对于深入研究斑马鱼TBP在基因转录中的作用具有一定的理论指导意义。
- 杨少斌冯婧文赵文铖王兆松许世磊
- 关键词：斑马鱼生物信息学
- 不同固定剂及渗透方法对免疫荧光技术中EGFR内吞转运观察效果的影响被引量：6
- 2015年
- 目的:探索适合表皮生长因子受体(EGFR)内吞转运免疫荧光观察的固定和渗透方法。方法:采用OLYMPUS BX61荧光显微镜及成像系统,对不同固定剂(4%多聚甲醛,甲醇,4%多聚甲醛+甲醇,丙酮,丙酮与甲醇体积比1∶1的混合液)配合不同渗透方法(0.04%saponin,0.1%Triton X-100)得到的EGF刺激后0 min和15 min两个时间点的EGFR免疫荧光图像进行对比分析。结果:0 min时EGFR主要定位于细胞质膜,4%多聚甲醛+甲醇的固定方法,配合使用0.04%saponin,可以观察到细胞膜上明显、清晰、连续的EGFR信号。针对EGF刺激15 min后内吞进入细胞的EGFR,不同固定方法对观察效果没有明显影响。但与配合使用0.04%saponin相比,0.1%Triton X-100进行渗透能充分暴露EGFR在细胞核内的信号。结论:温和的固定和渗透方法可获得较好的EGFR膜定位信号。针对内吞转运中的EGFR需要较强的渗透剂,以确定EGFR在细胞内准确的定位。
- 冯婧文杨少斌王兆松赵文铖肖春花
- 关键词：固定剂荧光显微镜表皮生长因子受体
- miR-448通过抑制上皮间质转化抑制肺癌细胞增殖和运动能力
- 2015年
- 探讨mi R-448对肺癌细胞增殖和运动的影响及其分子机制。采用实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction)检测原发肺癌组织和癌旁正常组织mi R-448表达水平。转染mi R-448 mimic和inhibitor至肺癌A549细胞系,通过MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)、平板克隆形成和Transwell实验观察mi R-448表达对A549增殖和运动能力的影响;利用Western blot检测EMT(epithelial-mesenchymal transition)标志物蛋白表达水平,通过实时荧光定量PCR检测EMT相关转录因子m RNA表达水平。实时荧光定量PCR显示较癌旁正常组织相比,mi R-448在原发肺癌组织中表达降低。MTT和平板克隆形成实验显示,过表达mi R-448抑制A549细胞增殖和运动能力;降表达mi R-448增强A549细胞增殖和运动能力。Western blot显示降表达mi R-448能下调上皮标志物E-cadherin,上调间质标志物Vimentin表达水平。实时荧光定量PCR显示降表达mi R-448能上调EMT相关转录因子Twist1和ZEB1 m RNA表达水平。mi R-448可通过抑制EMT抑制肺癌进展。
- 董秋萍徐玥杨少斌冯婧文齐晓敏赵文铖王兆松许世磊
- 关键词：EMT肺癌增殖
- 顺铂诱导耐药蛋白BCRP与EHD2表达上调并在细胞表面的富集被引量：1
- 2013年
- 目的:建立顺铂耐受的人肺腺癌A549/DDP细胞株,研究EHD2(EH domain-containing protein-2)与肿瘤细胞药物耐受的潜在关系。方法:以DDP为诱导剂,采用低浓度逐步增量诱导方法建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,采用MTT法测定药物敏感性,免疫印迹法检测耐药蛋白BCRP及EHD2蛋白的表达水平,免疫荧光方法检测BCRP及EHD2的细胞定位。结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为7.6;免疫印迹结果显示BCRP在耐药细胞系A549/DDP中的表达明显高于其亲本细胞A549,EHD2蛋白在耐药细胞系的表达略有增高;免疫荧光成像显示EHD2蛋白在细胞膜表面富集,并与BCRP耐药蛋白共定位。结论:BCRP和EHD2在获得性耐药细胞中富集,并于细胞膜表面共定位,提示内吞蛋白EHD2可能调控耐药蛋白BCRP的膜稳定性,从而介导肿瘤细胞耐药。
- 李盼潘利付欣杨少斌冯婧文胡明秋应国光
- 关键词：BCRP肿瘤耐药
