杨萍
- 作品数：23 被引量：77H指数：5
- 供职机构：江苏大学附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA反向转染法提高原代悬浮细胞转染效率的应用被引量：9
- 2010年
- 杨萍严金川刘培晶
- 关键词：小干扰RNA原代细胞悬浮细胞
- CD137信号通过外泌体传递活化T细胞核因子c1介导小鼠血管平滑肌细胞钙化被引量：5
- 2018年
- 目的探讨外泌体在CD137信号诱导的小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化中的作用。方法组织贴壁法提取小鼠胸主动脉VSMC,将细胞分为2组,即对照组和CD137激动组,用试剂盒提取外泌体,并用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析法及Western blot鉴定和分析,荧光显微镜观察VSMC摄取外泌体。构建活化T细胞核因子c1(sh-NFATc1)慢病毒载体并感染VSMC。实验分为3组:对照组外泌体处理组、CD137激动组外泌体处理组、沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组。采用Western blot检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨形成蛋白2(BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runx-2)蛋白表达量。Von Kossa染色检测VSMC内钙盐沉积情况。结果Western blot结果显示,2组微囊泡均表达外泌体表面标记蛋白CD9、CD81;电镜下外泌体成圆形和杯托状,直径在30~100nm;CD137激动组外泌体中NFATc1蛋白表达显著增多。与对照组外泌体处理组比较,CD137激动组外泌体处理组钙化相关指标BMP-2、Runx-2蛋白表达显著增高,同时α-SMA表达显著下降;与CD137激动组外泌体处理组比较,沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组BMP-2、Runx-2蛋白表达显著减少,α-SMA表达显著增高。Von Kossa染色结果显示,CD137激动组外泌体处理组VSMC钙盐沉积多于对照组外泌体处理组,而沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组钙盐沉积比CD137激动组外泌体处理组显著降低。结论CD137信号通路通过外泌体转运NFATc1介导VSMC钙化。
- 王宁崔星钢杨萍许尧李波仲威邵晨王中群严金川
- 关键词：外泌体血管平滑肌细胞钙化
- OX40-OX40L在人单核细胞和冠脉斑块中的共同表达被引量：2
- 2010年
- 目的探讨细胞刺激分子OX40及其配体OX40L在人单核细胞及冠状动脉粥样硬化斑块(冠脉斑块)中的表达。方法采用荧光技术、流式细胞术检测OX40、OX40L在单核细胞表面的表达,免疫组化方法检测在冠脉斑块中的表达。结果 OX40、OX40L在人单核细胞能连续表达,且细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和INF-γ能明显刺激其表达;冠脉斑块中能共同表达OX40L(肩部和底部)和OX40(广泛),而动脉壁其它部分不表达。结论人单核细胞表面及冠脉斑块中能共同高表达OX40和OX40L。
- 严金川王翠平陈广华杨萍刘培晶杜荣增王标
- 关键词：OX40OX40配体动脉粥样硬化单核细胞
- 高效小鼠CD40siRNA基因片段的筛选及对淋巴细胞CD40基因表达的影响
- 2010年
- 目的:应用RNA干扰技术筛选高效小鼠CD40siRNA基因序列片段。方法:体外化学合成小鼠CD40基因为靶标的siRNA3对(siCD40-1、siCD40-2、siCD40-3),通过脂质体瞬时转染小鼠脾淋巴细胞(实验组),并分别以转染无关siRNA片段及未转染细胞作为对照(对照组)。分别采用流式细胞术、实时荧光定量PCR检测转染24 h细胞表面CD40抗原、CD40 mRNA表达,蛋白质印迹检测转染48 h蛋白表达的变化。结果:与对照组相比,实验组CD40抗原表达、CD40 mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.01);3对实验组siRNA能明显抑制CD40基因表达,抑制率分别为69%、78%和41%,差异有统计学意义(P<0.05)。而各对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:siRNA可抑制小鼠淋巴细胞表达CD40,并具有良好的特异性,其中siRNA-2为最高效干扰片段。
- 严金川杨萍龚杰王标徐良洁
- 关键词：淋巴细胞CD40
- CD40 siRNA阻断CD40-CD40L轴对HUVEC增殖及迁移的影响
- 2010年
- 目的探讨小干扰RNA(si RNA)阻断CD40-CD40配体轴对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及迁移的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞,以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法分别测定HUVEC增殖,采用琼脂糖凝胶刮取法,倒置显微镜观察HUVEC迁移。结果 CD40配体能明显促进HUVEC3H-TdR、3H-Leu的掺入并显著增加HUVEC迁移率,CD40si RNA能明显抑制上述效应,且呈浓度依赖效应,而最佳预处理细胞时间在48h。结论 CD40siRNA能明显抑制CD40-CD40L相互作用引起的HUVEC增殖和迁移。
- 严金川王标徐良洁杨萍王翠平
- 关键词：CD40配体内皮细胞小干扰RNA
- 慢性心力衰竭患者体内CD40L高表达的临床意义
- 严金川王翠萍杨萍陈广华刘培晶杜荣增赵建伟
- 缓和医疗在慢性心力衰竭治疗中的应用进展被引量：1
- 2020年
- 随着人口老龄化及心脏病救治成功率的提高,CHF的发病率逐年增高。老年CHF病人存在合并症多及多系统、多药治疗的特点,同时,病人存在运动、记忆力、听力、味觉等多种机体功能减退等症状,生活质量差。缓和医疗(palliative care,PC)也叫安宁疗护、舒缓医学,是向各年龄段生活在严重的、健康相关的痛苦之中的病人提供积极、全方位的医疗服务。强调自疾病诊断起,即与疾病治疗措施相结合,且伴随疾病治疗的全过程。目前,国际PC已作为独立学科纳入医疗卫生服务体系,贯穿疾病诊断后的整个过程,帮助解决传统疾病管理不能顾及的如心理、精神及社会等诸多问题。本文综述了PC在CHF治疗中的应用进展,以期提高CHF病人的生活质量,维护病人尊严。
- 杨萍严金川刘培晶刘君侯莉
- 关键词：伴随疾病疾病诊断安宁疗护多药治疗慢性心力衰竭
- 妊娠相关血浆蛋白-A与OX40配体共同高表达在急性冠状动脉综合征中的临床意义被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)水平与可溶性OX40配体(sOX40L)及单核细胞表达OX40L水平之间的相关性。方法:应用双抗夹心酶联免疫测定法(ELISA)分别对冠状动脉造影正常对照组(30例)、稳定型心绞痛(SA)组(60例)、不稳定型心绞痛(UA)组(50例)、急性心肌梗死(AMI)组(30例)患者血清PAPP-A及sOX40L水平进行检测,采用流式细胞术检测患者血单核细胞表达OX40L水平。结果:血清sOX40L、PAPP-A水平UA组[(15.7±4.9)μg/L,(25.4±6.8)mg/L]及AMI组[(17.1±5.3)μg/L,(26.3±5.6)mg/L]明显高于SA组[(3.4±1.4)μg/L,(9.6±2.1)mg/L]及对照组[(3.9±1.3)μg/L,(8.5±2.8)mg/L];循环血单核细胞表达OX40LUA组[(25.6±5.5)MFI]及AMI组[(29.4±6.3)MFI]明显较SA组[(10.6±2.8)MFI]及对照组[(11.1±3.5)MFI]高。ACS患者血清PAPP-A水平与sOX40L及单核细胞表达OX40L呈显著正相关(r1=0.54,r2=0.51;P<0.0001);ACS患者血清PAPP-A、sOX40L水平及单核细胞表达OX40L均与冠状动脉复杂狭窄程度呈正相关(r1=0.56,r2=0.55,r3=0.40;P<0.001)。结论:ACS患者血清PAPP-A水平与sOX40L及单核细胞表达OX40L相关,二者共同高表达提示冠状动脉斑块不稳定,可能是ACS活动性标志物。
- 刘培晶严金川王翠平陈广华杨萍汪毅任国庆
- 关键词：急性冠状动脉综合征妊娠相关血浆蛋白-AOX40配体
- CD40-RNAi阻断CD40-CD40L轴对ApoE^(-/-)小鼠血小板功能的影响
- 2011年
- 目的:观察CD40-RNAi抑制CD40-CD40L相互作用对ApoE-/-小鼠血小板功能的影响。方法:将ApoE-/-小鼠分为anti-CD40L抗体组、CD40-RNAi组及对照组,应用流式细胞术分别检测血小板膜上表达P-选择素(CD62P)水平及血小板-单核细胞聚集率。结果:ApoE-/-小鼠anti-CD40L抗体组(15.6±3.3,MFI)及CD40-RNAi组(10.7±2.7,MFI)血小板膜表达CD62P水平明显较对照组低(21.8±3.6,MFI);同时发现血小板-单核细胞聚集率anti-CD40L抗体组(11.2±2.3)%及CD40-RNAi组(6.2±2.7)%较对照组低(19.3±2.6)%。ApoE-/-小鼠CD40-RNAi干预前血小板表达CD40水平(67.3±11.3,MFI)明显高于干预后(6.5±1.9,MFI)。结论:CD40-RNAi通过阻断CD40-CD40L相互作用抑制血小板活化功能。
- 严金川杨萍徐良洁王标
- 关键词：动脉粥样硬化CD40血小板RNA干扰
- CD137-CD137配体信号通路通过P38调控小鼠血管平滑肌细胞钙化形成
- 2018年
- 目的 探讨CD137-CD137配体(CD137L)信号通路是否通过P38调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的形成.方法 C57雄性小鼠,8周龄,采用组织贴块法培养原代小鼠VSMC,取第3~8代细胞进行实验.将细胞分为4组,即对照组、CD137激动组(重组CD137L干预)、P38抑制组(CD137激动组干预基础上加P38抑制剂)和P38单独抑制组(P38抑制剂干预).采用10 mmol/L β-甘油磷酸钠+10-8mol/L地塞米松+10-7mol/L胰岛素诱导细胞钙化.免疫荧光法检测VSMC α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN)的表达,Western blot法检测磷酸化P38(p-P38)、OPN、Runt相关转录因子-2(RUNX-2)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测钙化相关蛋白RUNX-2、OPN mRNA表达,微板法检测碱性磷酸酶(ALP)活性和钙离子浓度.进一步将细胞分为5组,即对照组、CD137激动组(重组CD137L干预)、P38抑制组(CD137激动组干预的基础上加P38抑制剂)、CD137抑制组(CD137激动组基础上加CD137抑制剂)和P38激动组(CD137抑制组的基础上加P38激动剂),通过Von Kossa染色和茜素红染色观察各组细胞的钙化程度.结果(1)各组VSMC中α-SMA和OPN蛋白表达的免疫荧光检测结果:CD137激动组VSMC中α-SMA蛋白表达水平明显低于对照组(2.79±0.25比5.42±0.47,P<0.05),而OPN蛋白表达水平则明显高于对照组(4.91±0.23比1.63±0.26,P<0.05).P38抑制组VSMC中α-SMA蛋白表达水平虽高于CD137激动组(4.48±0.27比2.79±0.25,P<0.05),但仍明显低于对照组(4.48±0.27比5.42±0.47,P<0.05);OPN蛋白表达水平虽低于CD137激动组(2.66±0.15比4.91±0.23,P<0.05),但仍高于对照组(2.66±0.15比1.63±0.26,P<0.05).而P38单独抑制组α-SMA和OPN蛋白表达水平与对照组比较差异则均无统计学意义(P均>0.05).(2)各组VSMC中p-P38、OPN、RUNX-2蛋白表达的Western blot检测结果:CD137激动组VSMC中p-P38、OPN和RUNX-2蛋白表达水平均高于对照组(分别为4.15±0.24比3.48±0.26,2.43±0.21比1.53±0.08,和3.20±0.23比1.13±0
- 丁亮许尧杨萍陈蕊李波邵晨仲威王中群严金川
- 关键词：动脉粥样硬化CD137
