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睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因插入失活突变体构建及降解特性分析被引量：3: 2009年; 睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)是革兰氏阴性菌,能够以各种类固醇化合物作为唯一碳源和能源,生物信息学分析发现睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因编码蛋白属于LuxR-type转录调控蛋白.利用同源重组原理构建teiR基因插入失活突变体C.mut,初步研究了teiR基因在类固醇代谢途径中的作用,以及对睾丸酮丛毛单胞菌关键降解酶3a-HSD/CR的表达影响.结果发现,teiR基因插入失活突变体C.mut在LB培养基中的生长速率不受影响,突变体C.mut抑制了teiR基因和关键降解酶3a-HSD/CR的表达,同时突变体C.mut丧失了以睾丸酮作为碳源进行生长的能力.结果表明teiR基因调节睾丸酮丛毛单胞菌类固醇代谢,同时teiR基因表达对3a-HSD/CR基因的表达是必需的.; 陈建秋潘大仁艾育芳周以飞潘菲林彬辉; 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌同源重组类固醇

3α-HSD/CR和aiiA双基因融合表达载体的构建和表达: 睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)具有降解许多难降解化合物的能力，在污染物的生物修复上具有很高的应用价值。C.Testosteroni 具有降解甾核的关键酶3a-羟类固醇脱氢酶/碳酰基还原酶...; 林彬辉; 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌; 文献传递

AiiA融合蛋白包涵体变性和复性的研究被引量：10: 2008年; 通过IPTG诱导含有pGEXaiiA-B15质粒的工程菌使其大量表达AiiA融合蛋白.由于所表达的融合蛋白多为不可溶的包涵体,须经分离、变性溶解,再经过一个合适的复性过程才能实现变性蛋白的正确折叠,得到具有生物活性的蛋白.通过含N-十二烷基肌氨酸钠的缓冲液A溶液及尿素等变性剂使包涵体溶解,磷酸盐缓冲液透析复性.SDS-PAGE电泳表明包涵体已由不可溶转化成可溶的蛋白.抑菌试验证明复性后的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏软腐病菌引起的马铃薯软腐病有较明显的抑制作用.; 杨梅郭丽清关夏玉张峰林彬辉陈新华黄志鹏; 关键词：苏云金芽孢杆菌复性

睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因在类固醇代谢途径中的作用: 睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)是革兰阴性菌，能够以各种类固醇化合物作为唯一碳源和能源，通过包含许多复杂代谢途径完全消化这类底物。在自然条件下该菌降解活性低，为了更好利用该菌进行环境修复，...; 陈建秋艾育芳周以飞潘大仁潘菲林彬辉; 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌革兰阴性菌类固醇降解能力; 文献传递

苏云金芽孢杆菌aiiA基因的克隆与结构分析被引量：1: 2007年; 分别克隆了叶片、苔藓和土壤中分离的Bacillus thuringiensis的aiiA基因,并对其编码的蛋白AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2进行了理化特征分析、进化树分析和空间结构的研究.结果表明AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2分子质量均为28 ku;等电点分别为4.77、4.77、4.93;三者均为亲水性蛋白,具有很高的同源性.进化树分析结果表明叶片中分离的AiiA-P28与苔藓中分离的AiiA-B19进化距离较近,而土壤中分离的AiiA-S2则与它们的进化距离较远.三维结构分析表明,AiiA蛋白具有典型的αβ/βα折叠的空间结构.; 杨梅林彬辉关夏玉郭丽清姚帆黄天培黄志鹏关雄; 关键词：苏云金芽孢杆菌 AIIA基因空间结构

TeiR融合蛋白分离及多克隆抗体的制备: 2009年; 提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)基因组DNA,PCR扩增teiR基因,将扩增产物克隆到pET28a中,经酶切验证后获得teiR基因表达载体pET28a-teiR.将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,添加终浓度为1 mmol.L-1的IPTG进行诱导,提取细菌总蛋白进行蛋白的SDS-PAGE电泳.并根据融合蛋白特性,利用Ni-NTA Spin Column对TeiR融合蛋白进行分离纯化,经分离纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出单一条带.进一步以获得的TeiR融合蛋白为抗原,制备兔抗TeiR多克隆抗体,经ELISA测定该抗体的效价为1∶10000,该抗体与睾丸酮丛毛单胞菌天然TeiR蛋白反应良好,说明该抗体特异性良好.; 陈建秋艾育芳潘大仁周以飞潘菲林彬辉郭玉春; 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌多克隆抗体

3a-HSD/CR和aiiA双基因融合表达载体的构建和表达: 睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)具有降解许多难降解化合物的能力,在污染物的生物修复上具有很高的应用价值。C.testosteroni具有降解甾核的关键酶3a-羟类固醇脱氢酶/碳酰基还原酶(...; 林彬辉; 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌苏云金芽孢杆菌生物修复; 文献传递

AiiA蛋白的可溶性表达及其抗菌活性研究被引量：10: 2008年; AHLs是革兰氏阴性细菌在增殖过程中产生的一类信号分子,与其致病性密切相关。AiiA蛋白作为一种胞内解酯酶。能水解致病菌产生的AHLs分子,使内酯环开环后不能再激活某些胞外酶的表达,从而极大地减弱了细菌的致病性。本研究从苏云金芽孢杆菌LLB15中分离编码aiiA基因的质粒DNA,用PCR方法克隆AiiA基因,并利用pET载体构建6-His融合表达质粒pET29a-aiiA,转化E.coli BL21(DE3)菌株,并筛选得到E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA工程菌。在20℃的低温和0.8 mmol/L IPTG条件下,经25 h的诱导表达,获得了54.4μg/mL可溶性AiiA蛋白。通过镍柱亲和层析,在国内外首次纯化了带6-His标记的AiiA蛋白。水解活性和抗病性检测表明。该蛋白能水解AHLs分子。对胡萝卜欧文氏软腐病菌具有较强的抗病作用。; 杨梅张锋林彬辉苏新华郭丽清黄志鹏关雄; 关键词：AIIA基因植物病害防治

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林彬辉