柯山
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 沉默树突状细胞恒定链以增强其抗肿瘤作用的体外实验研究
- 2007年
- 目的 初步观察用小分子干扰RNA（siRNA）沉默树突状细胞（DCs）恒定链（Ii）后，DCs疫苗的体外抗肿瘤效果。方法 从小鼠骨髓分离骨髓前体细胞，细胞经100ng／ml GM—CSF和100ng／ml IL-4诱导培养6d后，转染针对DCs Ii链特异的Ii—siRNA，转染后加用50ng／ml TNF—α继续诱导细胞成熟48h，然后分别用Western blot检测沉默效果及CCK-8试剂盒检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力；此外，DCs共转染Ii—siRNA和小鼠胃癌前体细胞MFC的总RNA后，与同种异体淋巴细胞共培养，通过ELISA检测培养上清IFN-γ和IL-4的水平，并收集致敏淋巴细胞进行体外杀伤实验。结果 Ii—siRNA明显抑制DCs Ii的表达。沉默Ii链能够增强DCs的淋巴细胞增殖能力，并促使淋巴细胞向Th1的方向漂移[IFN-γ：（5107±351）pg／ml，IL-4：（65±13）pg／ml，P〈0．05]。淋巴细胞经共转染Ii—siRNA和MFC RNA的DCs激活后，明显而特异地杀伤靶肿瘤细胞（杀伤百分率：66．94％±2．75％，P〈0．05）。结论 通过siRNA沉默DCs的Ii链可能是一种行之有效的增强抗肿瘤免疫的方法。
- 柯山陈雪华蔡劬李建芳俞焙秦顾琴龙朱正纲刘炳亚
- 关键词：RNA干扰免疫细胞树突状细胞
- 同时激活CD4^+Th和CD8^+CTL细胞——诱导抗肿瘤免疫的一个理想策略被引量：1
- 2006年
- 细胞免疫在肿瘤的免疫应答中占主导地位,以往人们更多地关注CD8+CTL细胞反应,而忽视了CD4+Th细胞的作用。随着CD4+Th细胞对于诱导、维持和增殖CD8+T细胞作用的不断发现,许多学者希望通过同时激活CD4+Th和CD8+CTL细胞来增强抗肿瘤免疫效果。运用肿瘤全抗原、融合蛋白、融合细胞、靶向于树突状细胞恒定链以及TCR转染等手段,大量尝试显示初步结果令人满意。同时激活CD4+Th和CD8+CTL细胞可能成为诱导抗肿瘤免疫的一个理想策略。
- 柯山刘炳亚朱正纲
- 关键词：肿瘤免疫治疗T细胞
- 沉默树突状细胞恒定链对其分化成熟及功能的影响
- 目的:siRNA沉默树突状细胞（DC）的恒定链（Ii）, 观察其对DC分化成熟及抗原提呈功能的影响。方法:从小鼠骨髓分离骨髓前体细胞,细胞经100ng／ml GM—CSF和 100ng／ml IL-4诱导培养6天后,转染...
- 柯山陈雪华刘炳亚顾琴龙朱正纲
- 关键词：树突状细胞小鼠SIRNA肿瘤免疫
- 文献传递
- 小鼠骨髓来源树突状细胞质粒DNA电转条件的优化
- 目的:探索质粒DNA转染骨髓来源DCs的最佳转染条件。方法:在不同条件下(电压、脉冲时间、电转前DCs状态和电转液血清浓度等)转染DCs。用倒置显微镜和流式细胞仪检测DCs 转染率。部分细胞在不同条件下转染后48小时,通...
- 柯山陈雪华黎皓李建芳顾琴龙朱正纲刘炳亚
- 关键词：电穿孔转染小鼠骨髓细胞
- 文献传递
- 小鼠骨髓来源成熟状态树突状细胞的体外诱导培养及鉴定
- 目的:探讨短期内获得大量成熟状态小鼠树突状细胞(DC)的方法。方法:取小鼠的骨髓细胞分别加入重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)100ng／ml、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)100ng／ml于...
- 陈雪华柯山黎皓顾琴龙朱正纲刘炳亚
- 关键词：树突状细胞骨髓小鼠体外
- 文献传递
- TAGLN在胃癌组织中的表达及其与转移的关系被引量：2
- 2007年
- 目的观察TAGLN在胃癌中的表达及其与肿瘤细胞侵袭转移能力的关系。方法运用实时PCR、Western blotting及免疫组化方法,检测TAGLN在40例胃癌患者肿瘤组织和相应癌旁组织、7株胃癌细胞株及癌相关成纤维细胞(CAFs)中的表达;分析TAGLN的表达与胃癌临床病理学之间的关系。运用细胞侵袭和移动试剂盒检测高表达TAGLN的CAFs或沉默TAGLN表达后的CAFs对胃癌细胞株MKN45侵袭及移动能力的影响。结果在mRNA和蛋白表达水平方面,各胃癌细胞株间无显著性差异(P>0.05);与相应癌旁组织相比,胃癌组织TAGLN的表达明显上调(P<0.05);免疫组化染色显示,TAGLN蛋白表达于胃癌组织间质中的成纤维细胞、新生血管内皮细胞及肿瘤浸润的黏膜肌层中的肌细胞,且主要表达于细胞膜和细胞浆。淋巴结转移组胃癌组织TAGLN蛋白的表达为3.751±0.681,显著高于无淋巴结转移组的1.084±0.328(P<0.05)。细胞侵袭和移动试验结果显示,高表达TAGLN的CAFs能够促进胃癌细胞株MKN45的侵袭及移动能力;而经siRNA沉默TAGLN表达后的CAFs则明显降低胃癌细胞株MKN45的侵袭及移动能力。结论TAGLN基因在胃癌组织的基质中高表达,其表达上调对胃癌的侵袭和转移可能具有促进作用。
- 陈雪华柯山李建芳张晓青蔡劬瞿颖俞焙秦顾琴龙刘炳亚朱正纲
- 关键词：胃癌
- SerpinB5能促进胃癌细胞株的恶性倾向被引量：2
- 2007年
- 目的了解SerpinB5在胃癌细胞株中的表达水平,探讨SerpinB5在胃癌发生发展中的作用。方法实时定量PCR检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞株中SerpinB5的表达水平;化学合成小片断干扰RNA(siRNA)下调胃癌细胞株SerpinB5的表达;实时定量PCR及免疫印迹检测干扰前后SerpinB5mRNA及蛋白质表达的变化;MTT法、软琼脂克隆形成实验和体外Matrigel侵袭实验观察SerpinB5减敲后胃癌细胞株生物学行为的改变。结果SerpinB5在胃癌细胞株中的表达水平显著升高;经SerpinB5特异的siRNAmix作用后,SerpinB5mRNA及蛋白质表达明显下降;减敲SerpinB5后,胃癌细胞株HTB103的生长能力、克隆形成能力和侵袭能力均显著降低。结论SerpinB5的表达水平在胃癌细胞株中显著升高;SerpinB5在胃癌的发生发展中起促进作用。
- 雷科锋刘炳亚陈雪华蔡劬柯山刘文韬朱正纲
- 关键词：胃癌基因干扰
- MAGE-3逆抗原转染树突状细胞的抗胃癌免疫效率被引量：2
- 2007年
- 目的构建逆抗原表达载体,以获得理想的肿瘤疫苗。方法运用RT-PCR方法合成MAGE-3cDNA,分别将RANTES基因分泌段前导序列和受体Fc段克隆至MAGE-3cDNA两端(pS-MAGE-3-Fc)再转染入DC表达,将致敏的DC与外周血T细胞和胃癌细胞共培养,观察产生的免疫效应。结果转染pS-MAGE-3-Fc的DC诱导的刺激淋巴细胞增殖反应和CTL杀伤效应均显著高于转染pMAGE-3的转染组和对照组(P<0.05)。结论逆抗原策略是理想的肿瘤疫苗策略,能够显著提高肿瘤免疫效率。
- 黎皓陈雪华俞焙秦柯山郑重朱正纲顾琴龙刘炳亚
- 关键词：树突状细胞转染主要组织相容性复合体
- 脐血CD34^+细胞体外诱导分化为树突状细胞及其扩增
- 2007年
- 目的探索脐血CD34+细胞体外诱导分化为树突状细胞及其扩增、培养大量树突状细胞(DCs)的方法。方法Ficoll分离脐血单个核细胞,免疫微磁珠法分离纯化CD34+细胞,以rhIL-4、GM-CSF、rhSCF、rhFlt-3Ligand、TGF-β1及TNF-α体外诱导培养14d,进行形态学观察、表型检测及上清液IL-12测定。结果体外培养14d后,细胞呈现典型的成熟DCs形态学及表型特征:胞体表面粗糙,可见大量突起,高水平表达CD1a、CD11c、CD40、CD80、CD83、CD86和MHCⅡ类分子;同时,IL-12浓度随着培养时间的增加而升高,且在加入TNF-α刺激成熟后,IL-12浓度较未成熟时显著升高(P<0.05)。结论体外联合运用rhIL-4、GM-CSF、rhSCF、rhFlt-3Ligand、TGF-β1、TNF-α,能够成功诱导脐血CD34+细胞分化为大量活力好的DCs。
- 陈雪华黎皓俞焙秦郑重柯山朱正纲顾琴龙刘炳亚
- 关键词：树突状细胞脐血CD34扩增
- 沉默树突状细胞恒定链对其活力和分化成熟的影响被引量：1
- 2007年
- 目的观察siRNA沉默树突状细胞(DCs)的恒定链(Ii)转染后对DCs活力及分化成熟的影响。方法从小鼠骨髓分离骨髓前体细胞,细胞经100ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和100ng/mL白细胞介素-4(IL-4)诱导培养6d后,转染针对DCsIi链特异的小分子干扰RNA(IisiRNA),转染后加用(或不加)50ng/mL肿瘤坏死因子-α(TNF-α)继续诱导成熟48h,分别通过Western blotting检测沉默效果,光镜观察DCs的活力和形态,流式细胞仪检测细胞的凋亡和表面分子标志(MHCⅡ、CD86、CD40),ELISA检测细胞IL-12p70的释放。结果IisiRNA能够明显抑制DCsIi的表达,转染IisiRNA后对DCs的活力、形态、细胞表型以及细胞因子IL-12p70的分泌均没有影响。结论通过siRNA沉默DCs的Ii链不会影响DCs的活力及分化成熟,该策略能够用于进一步的DCs肿瘤疫苗的研究。
- 柯山陈雪华张轶李建芳俞焙秦顾琴龙朱正纲刘炳亚
- 关键词：RNA干扰肿瘤免疫
