matK基因是陆地植物核心条码候选片段之一,文章通过克隆获得22个核桃品种matK基因近3'端长度为726 bp EST序列,运用序列分析技术探索matK在核桃种间关系研究中的价值。结果表明,在所测的matK基因的核苷酸序列中发生变异的核桃品种均属早实核桃类群,而晚实核桃类群无变异发生;推导氨基酸序列分析显示薄壳香由于发生突变,提前终止翻译而只编码173个氨基酸,而其他品种均编码234个氨基酸;采用近邻接树法和最大简约法构建的系统进化树显示,22个品种核桃分为5个组,其中扎343与其他21个品种有明显差异,8个新选育的品种中金薄丰1号较为突出;而辽核1号与西扶1号亲缘关系最近。对matK基因深入研究将为核桃种质资源保护、杂交育种及开发运用提供分子生物学依据。
为了从核桃芽体内提取高质量的RNA,以便进行核桃成花基因克隆研究,针对核桃芽体内富含多酚等次生代谢物的特点,在总结他人研究基础上对SDS法和CTAB法及试剂盒提取法进行了改良和比较。凝胶电泳检测表明:Spectrum Plant Total RNA试剂盒提取法及以pH 9.0硼砂为缓冲液的改良CTAB法和SDS法所提取RNA的28SrRNA和18SrRNA条带清晰,且28SrRNA的亮度约是18SrRNA的2倍,说明所提RNA完整性较好;紫外光谱分析显示,3种方法的OD260/OD280分别为1.99、1.96、1.77,OD260/OD230均>2.0,RNA产率依次为360、180、75μg/(g.FW)。综合检测结果认为:改良CTAB法和改良SDS法所提RNA的完整性和纯度均能满足基因克隆等的研究,是一种适合核桃芽体内RNA提取的经济而有效的方法。
