毛联钢
- 作品数：29 被引量：75H指数：6
- 供职机构：宁波市第二医院更多>>
- 发文基金：宁波市自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金王宝恩肝纤维化研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ATP-TCA肿瘤药敏检测法在乳腺癌化疗中的应用被引量：5
- 2009年
- 目的评估ATP-TCA肿瘤药敏检测法指导制定化疗方案的可行性。方法应用ATP-TCA肿瘤药敏检测法检测64份乳腺癌手术标本对9种常用药物的敏感性,检测8株乳腺癌细胞系对8种常用药物的敏感性。结果乳腺癌对抗癌药物的敏感程度存在着异质性。联合用药的敏感率高于单药。检测结果与临床疗效相符。结论ATP-TCA肿瘤药敏检测法可用于临床制定个体化的化疗方案。
- 李克强杨峂毛联钢李旭军
- 关键词：乳腺肿瘤
- RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d’origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA。Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响。结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70%。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P<0.05)。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28±1.34)、(8.93±1.20)μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07)μg/ml,均明显低于对照组(P<0.01)。结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性。
- 毛联钢李克强卓文莹戴晓宇余永明冯伟云乐东海
- 关键词：HT-29细胞RNAI耐药
- 自杀基因ePNP的克隆及在人肝癌细胞HepG_2的表达
- 2010年
- 目的构建含大肠杆菌的嘌呤核苷酸磷酸化酶(ePNP)DNA的重组逆转录病毒载体,观察ePNP基因在人肝癌细胞株HepG2的表达。方法用PCR法获得ePNP亚克隆,构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,鉴定测序。脂质体法将逆转录病毒载体pDsRed-ePNP转染AmphoPackTM-293包装细胞,获得高滴度病毒并感染HepG2细胞。流式细胞术和荧光显微镜检测红色荧光蛋白(RFP)的表达。RT-PCR法检测ePNPmRNA的表达。ATP-生物荧光体外检测实验(ATP-TCA法)检测不同浓度Fludarabine对HepG2、HepG2/pDsRed和HepG2/ePNP细胞的杀伤作用。结果克隆的ePNP基因与文献报道一致,成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP。病毒包装后滴度为5E+4TU/mL。表达RFP的HepG2/ePNP阳性细胞率为97.1%。HepG2/ePNP细胞稳定表达ePNP。低浓度Fludarabine对HepG2/ePNP细胞毒效应明显。结论成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,并且获得稳定表达ePNP基因的HepG2/ePNP人肝癌细胞株。
- 戴晓宇李克强乐东海毛联钢冯伟云
- 关键词：肝肿瘤人肝癌细胞株HEPG2自杀基因逆转录病毒载体
- 重组人绒毛膜促性腺激素-β亚基的纯化及生物活性测定被引量：1
- 2005年
- 目的构建人绒毛膜促性腺激素(HCGβ)原核表达载体PG5-HCGβ,使HCGβ在大肠杆菌中获得高效表达。建立一条简单、快速、高效的纯化复性路线,获得具有生物活性的高纯度rHCGβ。方法以本室克隆的PCRII/HCGβ为模板,构建PG5-HCGβ,转化大肠杆菌BL21表达HCGβ。表达蛋白顺次用凝胶过滤和离子交换层析两步分离纯化。结果酶切及序列结果显示,PG5-HCGβ构建正确,HCGβ表达约占菌体总蛋白的20%。经过凝胶过滤和离子交换层析两步分离纯化,获得rHCGβ纯度达95%以上。复性的rHCGβ具有促进小鼠子宫生长的生物学活性。结论构建的PG5-HCGβ表达载体在大肠杆菌中获得高效表达,纯化复性的rHCGβ蛋白具有较高的生物学活性,为今后的rHCGβ生产打下了良好的基础。
- 徐冉行刘东海冯伟云张顺毛联钢
- 关键词：原核表达纯化生物活性
- 靶向干扰CDK2AP1对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响
- 2014年
- 目的探讨靶向干扰细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白-1(CDK2AP1)对乳腺癌MCF-7胞体外迁移和侵袭的影响。方法构建重组慢病毒pGCLV-CDK2AP1-shRNA及重组空病毒pGCLV-GFP,分别稳定转染乳腺癌细胞系MCF-7,获得乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi-NC和MCF-7/RNAi-CDK2AP1。采用定量PCR法检测两组MCF-7细胞株的CDK2AP1mRNA表达,xCELLigence/RT-CIM实时细胞电子分析系统检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi-NC和MCF-7/RNAi-CDK2AP1,相比MCF-7/RNAi-NC细胞组,MCF-7/RNAi-CDK2AP1细胞组的CDK2AP1mRNA表达受到明显抑制,其细胞迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05)。结论乳腺癌细胞MCF-7中CDK2AP1低表达能有效抑制细胞的体外迁移和侵袭能力。
- 魏任雄李克强毛联钢李旭军冯伟云
- 关键词：乳腺癌细胞迁移细胞侵袭
- 一种带有吸引功能的腹腔镜抓钳
- 本实用新型公开了一种带有吸引功能的腹腔镜抓钳，属于医疗器械技术领域。带有吸引功能的腹腔镜抓钳包括手柄、连杆、夹爪、冲洗器和转动控制机构，转动控制机构包括转动件、控制头和控制线，连杆分为第一杆和第二杆，第一杆和第二杆通过转...
- 姜海涛陈云杰苏辉任峰王天飞毛联钢
- 文献传递
- 人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADM细胞迁移能力的对比研究
- 2013年
- 目的探讨乳腺癌细胞化疗继发耐药后细胞迁移能力的变化,并筛选出相关基因。方法以MCF-7细胞株为亲本细胞。采用阿霉素(ADM)低浓度持续加量诱导法建立对ADM耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7/ADM。应用ATP-TCA药物敏感检测法和xCELLligence/RT-CES实时细胞电子分析系统检测人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADM对多种化疗药物的耐药情况及细胞增殖能力。应用Transwell实验和xCELLligence/RT-CIM实时细胞电子分析系统检测人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADM的细胞迁移能力。应用比较基因组芯片筛选出人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADM DNA拷贝数4倍差异的基因。结果撤药培养150d后,MCF-7/ADM细胞较亲本细胞MCF-7的ADM耐药指数为72.9,对其他化疗药物无明显的交叉耐药性。MCF-7/ADM细胞迁移能力较MCF-7明显降低(P<0.05)。MCF-7/ADM有12种基因DNA拷贝数是MCF-7的4倍,MCF-7有6种基因DNA拷贝数是MCF-7/ADM的4倍。结论乳腺癌细胞化疗继发耐药伴随细胞迁移能力明显降低,其相关基因的DNA拷贝数亦有明显差异。
- 陈平李克强毛联钢乐东海冯伟云
- 关键词：乳腺癌阿霉素化疗耐药细胞迁移
- 烧伤病房铜绿假单胞菌耐药谱检测及分子流行病学研究被引量：7
- 2010年
- 目的了解分离自烧伤病房铜绿假单胞菌耐药表型及分子流行病学特性。方法对分离自烧伤病房的32株铜绿假单胞菌采用K-B法测定抗菌药物的敏感性;利用碱裂解法提取质粒获得质粒DNA图谱;利用脉冲场电泳分析菌株的亲缘性。结果 32株铜绿假单胞菌中有17株对>8种抗菌药物耐药率,占53.1%,8株(25.0%)铜绿假单胞菌对检测抗菌药物全部耐药;29株(90.6%)含有质粒,分属于4种质粒表型,主要有2种质粒表型的铜绿假单胞菌;脉冲场电泳聚类分析显示铜绿假单胞菌感染主要由3个克隆株引起。结论分离自烧伤病房的铜绿假单胞菌耐药严重,医院感染铜绿假单胞菌可导致克隆传播,甚至暴发流行。
- 冯伟云胡锡浩许小敏毛联钢
- 关键词：铜绿假单胞菌质粒图谱脉冲场电泳
- 孤立性肺部结节肺泡灌洗液端粒酶活性测定对肺癌早期诊断的研究被引量：1
- 2005年
- 目的通过检测支气管灌洗液中端粒酶的活性,探讨灌洗液端粒酶活性在早期肺癌诊断中的应用价值。方法裂解支气管肺泡灌洗液中的脱落细胞,TRAP法检测38例(25例肺癌,13例良性结节)肺泡灌洗液标本中端粒酶活性。结果25例肺癌中端粒酶活性阳性率为72.0%(18/25),13例良性结节端粒酶阳性率7.7%(1/13),肺癌检出的敏感性为72.0%,特异性为92.3%。结论肺泡灌洗液端粒酶活性测定对肺癌检测有较好的敏感性,有助于肺癌的早期诊断。
- 刘东海王丰民冯伟云张顺毛联钢
- 关键词：孤立性结节端粒酶肺癌
- 非霍奇金淋巴瘤患者乳腺癌耐药蛋白的表达及其与药物敏感性的关系
- 2010年
- 目的 探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者乳腺癌耐药蛋白（BCRP）的表达及其与药物敏感性的关系.方法 采用RT-PCR法检测比例NHL和5例慢性淋巴结炎患者新鲜淋巴组织标本中BCRP及多药耐药基因（MDR1）的表达水平;并对所有患者进行随访.结果 5例慢性淋巴结炎患者BCRP和MDR1表达均阴性;66例NHL患者BCRP阳性率45.5%,MDR1阳性率59.1%;T细胞淋巴瘤患者BCRP阳性率高于B细胞淋巴瘤者,NHL Ⅲ～Ⅳ期患者BCRP阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期者（均P〈0.05）;BCRP阳性患者的复发率高于阴性者,而缓解率和5年生存率均低于阴性者（均P〈0.05）;BCRP和MDR1阳性、BCRP阳性和MDR1阴性、BCRP阴性和MDR1阳性、BCRP和MDR1阴性患者的化疗疗效均不同（均P〈0.05）.结论 本组NHL患者BCRP和MDR1表达率较高,可能为化疗敏感性差的重要原因.
- 钱素英毛联钢童向民吴宁宁方治陈亚敏李克强夏兆雄
- 关键词：非霍奇金淋巴瘤乳腺癌耐药蛋白多药耐药基因
