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以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的人呼吸道合胞病毒F蛋白DNA疫苗滴鼻免疫抗体分析被引量：4: 2011年; 【目的】以减毒鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium aroA strain SL7207,SL7207)为载体携带可表达呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial vrius,RSV)密码子优化的融合蛋白(Fusion glycoprotein,F)的真核表达质粒,探讨不同黏膜免疫途径及密码子优化对免疫效果的影响。【方法】通过对RSV野生型F基因(Fwt)进行密码子优化,获得密码子优化的F基因(Fsyn),并构建可表达Fsyn的真核表达质粒pcDNA3.1/Fsyn,转化SL7207得到SL7207/pcDNA3.1/Fsyn。分别经滴鼻和灌胃途径,免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA方法比较免疫效果。【结果】与灌胃组相比,滴鼻组诱导小鼠产生了更高水平的血清IgG和黏膜SIgA,获得了更好的免疫效果(P<0.05)。与野生型相比,密码子优化的F蛋白具有更好的免疫原性(P<0.05)。【结论】经滴鼻途径免疫和密码子优化能够提高以SL7207为载体的RSV DNA疫苗免疫效果。; 程明何金生付远辉乔伟焦月盈; 关键词：人呼吸道合胞病毒黏膜免疫

基于T7启动子表达系统的牛副流感病毒3型微型基因组的构建与拯救: 2016年; 【目的】通过负链RNA病毒反向遗传学操作,构建并拯救以T7启动子表达系统为基础的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)微型基因组。【方法】分别构建表达该病毒NP、P和L蛋白的辅助质粒px8δT-PT1-b PIV3-NP、px8δT-PT1-b PIV3-P和px8δT-PT1-b PIV3-L以及含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)开放读码框(Open reading frame,ORF)、BPIV3前导序列(Leader region)、转录起始信号(Gene start signal,GS)、转录终止信号(Gene end signal,GE)和尾随序列(Trailer region)等顺式作用元件(Cis-acting elements)的微型基因组质粒p SC11-b PIV3-EGFP,鉴定正确后,采用2种不同方法拯救BPIV3微型基因组,并通过观察荧光表达情况判断是否拯救成功。【结果】成功构建了基于T7启动子表达系统的BPIV3微型基因组,并实现了拯救。【结论】该系统的成功构建,有助于今后对BPIV3开展基因修饰研究。; 姜男郑妍鹏蒋桂云张伟焦月盈付远辉彭向雷何金生; 关键词：反向遗传学拯救

一种呼吸道合胞病毒样颗粒及其制备方法和应用: 本发明涉及呼吸道合胞病毒样颗粒，建立了一种新的制备呼吸道合胞病毒样颗粒的方法，并用于动物免疫。本发明按照哺乳动物细胞密码子偏性，对M、F、G基因进行密码子优化，分别克隆到穿梭载体中，获得重组腺病毒质粒，转染，获得重组腺病...; 何金生付远辉焦月盈洪涛; 文献传递

人呼吸道合胞病毒样颗粒单次滴鼻途径免疫小鼠诱导的免疫保护作用研究: 人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus，RSV)是引起婴幼儿、老年人和免疫力低下人群下呼吸道感染最重要的病毒病原，尚无有效的防治方法。自20世纪60年代开展福尔马林灭活病毒(...; 焦月盈; 关键词：重组腺病毒免疫保护

携带Aβ37-42肽段的重组乙肝病毒表面抗原病毒样颗粒的制备: 2014年; 目的采用杆状病毒表达系统制备携带Aβ37-42肽段的重组乙肝病毒表面抗原(HBsAg)病毒样颗粒(VLPs)。方法将Aβ42分子的C末端6个氨基酸进行3个串联后,插入到HBsAg的113 aa与114 aa之间,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建表达HBsAg Aβ37-42的重组杆状病毒载体,转染Sf9细胞,Western blot鉴定目的蛋白表达情况,用氯化铯(CsCl)密度梯度超速离心纯化,电镜观察VLPs的形态。结果制备并纯化出HBsAg VLPs和携带Aβ37-42肽段的HBsAg VLPs(HBsAgAβ37-42 VLPs)。结论制备携带Aβ抗原表位的重组HBsAg作为一种阿尔茨海默病(AD)疫苗具有一定的可行性,值得进一步探讨。; 蒋桂云陈念华付远辉焦月盈徐青何金生; 关键词：阿尔茨海默病乙肝病毒表面抗原杆状病毒表达系统病毒样颗粒

表达人呼吸道合胞病毒结构蛋白的重组腺病毒及杆状病毒的构建与鉴定: 目的:人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,RSV)广泛分布于世界各地,是导致婴幼儿、老年人和免疫缺陷病人严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。RSV属于副粘病毒科肺病毒属,...; 焦月盈; 关键词：人呼吸道合胞病毒杆状病毒结构蛋白病毒鉴定; 文献传递

基于T7启动子表达系统的呼吸道合胞病毒微型基因组的拯救被引量：2: 2013年; 目的:以T7启动子表达系统为基础,通过RNA病毒反向遗传学操作,拯救人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)微型基因组。方法:构建可分别表达RSV四种核壳体蛋白的辅助质粒px8δT-PT1-N,px8δT-PT1-P,px8δT-PT1-M2-1和px8δT-PT1-L以及含增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,EGFP)开放读码框(open reading frame,ORF),RSV病毒前导序列(leader region/genomic promotor),转录起始信号(gene start,GS)、转录终止信号(gene end,GE)和尾随序列(trailer region/antigenomic promoter)等顺式作用元件(cis-acting elements)的微型基因组重组质粒pSC11-E,在上述的5个质粒中,均引入T7 RNA多聚酶(T7 RNA polymerase,T7 RNP)启动子,经鉴定正确后,先以pSC11-E转染RSV感染的可组成型表达T7多聚酶的BSR T7/5细胞进行拯救,确定微型基因组编码质粒设计的合理性,而后通过5个质粒共转染BSR T7/5细胞,并通过荧光显微镜观察荧光的表达情况判断拯救成功与否。结果:成功构建了基于T7启动子表达系统的RSV微型基因组5质粒拯救系统,并实现了拯救。结论:该系统的成功构建,有助于今后对RSV病毒开展基因修饰研究。; 袁锐付远辉何金生焦月盈蒋桂云张梅彭向雷阚学通; 关键词：呼吸道合胞病毒反向遗传学

人呼吸道合胞病毒感染的A549细胞中长链非编码RNA表达谱研究被引量：2: 2021年; 目的:探讨人呼吸道合胞体病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)感染A549细胞的长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNA)表达谱的差异,更好地了解宿主与RSV之间的相互作用的可能分子机制。方法:1 MOI RSV感染A549细胞,24h后提取RNA,利用Agilent的lncRNA表达谱芯片,筛查了RSV感染和未感染的A549细胞中的lncRNA差异表达谱,并进行实时定量PCR验证,通过GO和KEGG对差异mRNA和lncRNA进行生物信息学分析。结果:RSV感染的A549细胞与未感染的A549细胞相比,共有1463个lncRNA和1552个mRNAs显著上调,有944个lncRNA和1489个mRNAs下调,差异表达lncRNA及其预测靶基因主要富集于免疫应答过程。通过定量PCR证实所选lncRNA的表达谱结果。结论:RSV感染A549细胞后,lncRNA表达谱发生明显变化,对深入研究lncRNA如何参与RSV与宿主之间的相互作用奠定了基础。; 刘美琴高博焦月盈李玮虞结梅彭向雷郑妍鹏付远辉何金生; 关键词：A549细胞长链非编码RNA 表达谱

一种呼吸道合胞病毒样颗粒及其制备方法和应用: 本发明涉及呼吸道合胞病毒样颗粒，建立了一种新的制备呼吸道合胞病毒样颗粒的方法，并用于动物免疫。本发明按照哺乳动物细胞密码子偏性，对M、F、G基因进行密码子优化，分别克隆到穿梭载体中，获得重组腺病毒质粒，转染，获得重组腺病...; 何金生付远辉焦月盈洪涛; 文献传递

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焦月盈