王岷
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程更多>>
- 重组复合干扰素摇瓶发酵条件的研究
- 2007年
- 目的对表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coli DH5α的摇瓶发酵条件进行研究。方法利用单因素比较实验及正交试验等方法考查工程菌摇瓶发酵条件,探讨发酵条件对工程菌的生长和con-IFN表达的影响。结果优化后条件为培养基含玉米粉6%、牛肉膏5.5%、谷氨酸钠0.5%,发酵液初始pH 7.2,30℃培养7 h后升温至42℃诱导表达6 h,转速220r/min,装样量10%,接种量2%。结论优化后平均蛋白质表达量达到36.39%,和LB培养基相比,目的蛋白质表达量提高了4.8%,为工程菌的大规模发酵提供参考。
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- 关键词：摇瓶培养基因工程菌发酵
- 复合干扰素在大肠杆菌中的高效表达与传代稳定性被引量：2
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌中高效、稳定地表达复合干扰素(con-IFN)。方法:根据大肠杆菌密码子的偏爱性,合成了复合干扰素基因、克隆至表达载体pBV220和转化大肠杆菌DH5α。筛选高表达菌株并传代105次。表达产物经过复性和离子交换;凝胶过滤层析纯化;用细胞病变抑制法测定其活性,并结合lowry法蛋白定量计算其比活性。结果:SDS-PAGE分析显示:重组蛋白在工程菌中表达量为41%,且稳定表达105代。重组蛋白纯化后纯度达到98%,工程菌表达的复合干扰素相对分子质量、末端氨基酸序列及等电点性质与预期结果一致,比活与其商品化产品干复津相当。结论:复合干扰素在大肠杆菌中获得高效、稳定的表达。
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- 关键词：大肠杆菌稳定性
- 重组复合干扰素基因工程菌发酵培养条件的研究被引量：2
- 2006年
- 目的:研究表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coliDH5α(pBV220/con-IFN)的发酵条件。方法:在摇瓶实验中,采用正交设计法和均匀设计法确定较佳培养基组分;使用20 L发酵罐进行补料分批发酵实验,研究影响菌体生长和con-IFN表达的因素(如溶氧、补料、温度和诱导时间)。结果:发酵培养基配方为蛋白胨10 g/L,酵母膏7.5 g/L,甘油0.5%,Na2HPO4.12H2O 20.13 g/L,KH2PO410.37 g/L,NaCl 9.31 g/L。确定了高密度发酵工艺,即优化的发酵培养基,初始pH7.2,接种量5%,溶氧15%,先经35℃培养4 h,后降温至30℃培养2 h,再以42℃诱导7 h,诱导的同时补料酵母膏0.5%。在此条件下,发酵液可得15.2 g/L湿菌体,con-IFN的表达量占菌体总蛋白的49.60%,每毫升发酵液的抗病毒活性为9.69×108IU。结论:获得了较满意的优化培养基配方和发酵条件,为下游纯化和进一步大规模生产奠定了基础。
- 王岷赵伟高向东张陆勇姚文兵
- 关键词：发酵条件工程菌
