王慧
- 作品数：167 被引量：150H指数：5
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 抗B型肉毒神经毒素中和性单克隆抗体、其制备方法及用途
- 本发明公开了抗B型肉毒神经毒素中和性单克隆抗体，还公开了该抗体的人源化改构体。上述抗体通过以下方法制备：首先通过分子生物学或其它方法制备抗体的CDR区或可变区或IgG部分或全基因，在原核细胞如大肠杆菌等，真核细胞如酵母菌...
- 王慧史晶荫俊侯晓军蔡昆包士中王琴
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌毒力因子Z1444的原核表达及其丝/苏氨酸激酶活性验证
- 2014年
- 目的:在大肠杆菌中表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)毒力岛上的毒力因子Z1444并纯化,对其丝/苏氨酸激酶活性进行初步检测。方法:根据GenBank中Z1444基因序列及pET-28a(+)载体的多克隆位点设计引物,以EHECO157∶H7全菌裂解液为模板,经PCR钓取1047 bp的目的片段,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-Z1444,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达并经SDS-PAGE鉴定,利用体外反应体系鉴定重组蛋白的丝/苏氨酸激酶活性。结果:双酶切和测序鉴定表明,pET-28a(+)-Z1444原核表达质粒构建正确;诱导表达后经纯化,获得纯度在90%以上的可溶性重组Z1444,相对分子量约为38×103;体外酶活实验验证了Z1444的丝/苏氨酸激酶活性。结论:Z1444在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,为后续功能验证奠定了基础。
- 李崭李涛陈芳红刘雄周育森王慧
- 关键词：肠出血性大肠杆菌
- KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学
- 2013年
- 目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。
- 刘雄张凤娇李享陈芳红房华丽王琴李涛王慧
- 关键词：细菌耐药KPC-2型碳青霉烯酶Β内酰胺类抗生素
- A型肉毒毒素保护性抗原在酵母细胞中的表达与抗原性分析
- 2004年
- 目的 :在酵母系统中实现A型肉毒毒素 (BoNTa)Hc基因的可溶性分泌表达。方法 :将Hc基因克隆入表达载体pPIC9K ,用SacⅠ将重组质粒线性化 ,电转化巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115细胞 ,筛选G4 18抗性阳性整合子 ,进行Mut+ 表型株甲醇快速利用诱导。结果 :经过体外高拷贝整合子的筛选和诱导表达条件的优化 ,毒素Hc在pH 6 .5培养基BMMY中实现稳定的分泌表达 ,最终筛选到蛋白表达量占上清蛋白 10 %的分泌高表达株。免疫印迹和酶联免疫检测结果显示 ,重组BoNTaHc可以识别特异抗肉毒马血清并具良好的特异结合活性 ,可以诱导小鼠产生特异性抗体。结论 :酵母系统来源的具有良好免疫原性的重组BoNTa保护性抗原可以作为有效的候选重组疫苗分子。
- 王慧荫俊
- 关键词：A型肉毒毒素保护性抗原分泌表达酵母
- A型肉毒毒素表位多肽免疫和人源噬菌体单链抗体文库的构建被引量：1
- 2004年
- 采用表位合成多肽免疫获得编码人源抗体的基因材料,抗体轻重链可变区基因通过剪接重叠延伸(SOE)技术进行组装后,亚克隆入噬菌体粒中构建免疫文库。以重组制备的A型肉毒毒素保护性抗原为配体筛选结合子,ELISA鉴定,获得具有较高抗原结合力的噬菌体克隆,进行基因测序和家族定位分析。结果显示,表位合成多肽免疫,成功构建了库容大于108的重组抗体文库。体外3轮免疫淘筛,筛选到人源A型肉毒抗毒素克隆,基因结构分析表明,其中ScFvB17全长750bp,可编码250个氨基酸残基:VH属于VH4家族,369bp,编码123个氨基酸残基;Vκ属于κ链Ⅱ家族,336bp,编码112个氨基酸残基。基因的同源分析表明,这是一株特异的单链抗体新基因。
- 王慧荫俊侯晓军邢洪光
- 关键词：表位A型肉毒毒素单链抗体噬菌体合成多肽剪接
- A型肉毒毒素保护性抗原的基因修饰及高效表达被引量：1
- 2004年
- 在A型肉毒毒素保护性抗原基因初步表达的基础上 ,为提高表达水平 ,依据EMBL的DNA数据库中A型肉毒毒素基因全序列 ,重新设计上游引物 ,通过修饰基因片段N端 ,保持氨基酸序列不变 ,从已获得的A型肉毒毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因中 ,扩增小的突变基因 ,克隆入pGEM T载体进行测序 ,并以pBV2 2 0为表达载体构建重组表达质粒 ,在大肠杆菌中实现高效表达。结果表明 ,重组表达产物占全菌蛋白的 4 0 % ,酶联检测重组表达产物具有特异结合活性。A型肉毒毒素保护性抗原基因的高效表达 。
- 王慧荫俊
- 关键词：A型肉毒毒素保护性抗原基因修饰
- 人CD14基因克隆及基因结构分析被引量：1
- 2005年
- 目的扩增人CD14基因序列,对克隆基因进行结构及生物信息学分析。方法利用反转录PCR技术从U937细胞总RNA中,扩增编码人CD14的基因序列,对基因结构及其编码的CD14成熟蛋白质进行了限制性酶切位点、蛋白质组成、相对分子质量及等电点、蛋白质稳定性、信号肽定位、蛋白质Prosite和2级结构等生物信息学分析。结果序列分析结果表明扩增的基因序列与文献报道完全一致,在此基础上获得了人CD14基因结构和生物信息学参数。结论成功获得人CD14基因综合参数,为进一步重组CD14表达、鉴定和结构功能研究提供了理论依据。
- 侯本祥王慧张琛荫俊
- 关键词：基因结构分析基因克隆U937细胞蛋白质稳定性CD14基因限制性酶切
- 人源抗A型肉毒神经毒素基因工程抗体及其制备方法与用途
- 本发明公开了人源抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体，该抗体具有序列表中序列35所示的氨基酸序列，本发明还公开了上述抗体的改构体，其重链的氨基酸序列如序列表中序列36所示，轻链的氨基酸序列如序列表中序列37所示。上述抗体通过以下...
- 王慧荫俊史晶侯晓军包士中王忠泽蔡昆
- 文献传递
- 骨形态发生蛋白在多器官组织分化发育中的作用及研究进展
- 2006年
- 骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)是一种多功能蛋白,是转化生长因子TGF-β超家族成员,参与骨器官发生、形成与再生的过程,同时对神经系统、造血系统的分化发育也有调控作用.目前,BMPs的研究已经涉及发育生物学、遗传学等多个领域,并在临床上具有广泛的应用前景.基于相关研究近状,对BMPs的分子结构特征及其在多器官组织分化发育中的作用进行分析,为进一步研究BMPs的体内活性及临床应用提供了理论借鉴和参考.
- 刘蕾王慧颜光涛史晶荫俊
- 关键词：骨形成蛋白分化
- 人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达被引量：4
- 2007年
- 目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。
- 蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊
- 关键词：原核表达
