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一种定点突变改造的大鼠二肽基肽酶III: 本发明涉及一种定点突变改造的大鼠二肽基肽酶III。本发明所述的定点突变改造的大鼠二肽基肽酶III，其特征在于：它是由氨基酸序列为SEQ？ID？NO.1的来源于Rattus？norvegicus的二肽基肽酶III中制造多个...; 刘大岭姚冬生王旭曼谢春芳

基于生物催化与分子结构评价的A. tabescens β-甘露聚糖酶MAN47胰蛋白酶抗性的分子理性设计: ＜正＞为了避免分子定向进化非理性设计所带来的海量筛选,理性设计是酶蛋白质改造的有效方法,但其需要在了解蛋白分子结构与其功能之间的关系基础上,才能有目标的选取突变位点,对酶蛋白进行改造。突变位点的选择,通常需要分子结构与功...; 胡凤娟王旭曼苏建华黎玉凤刘大岭姚冬生; 文献传递

具蛋白酶抗性的Armillariella tabescens β-甘露聚糖酶MAN47的分子定向改造被引量：6: 2011年; 利用定点突变的方法提高Armillariella tabescensβ-甘露聚糖酶MAN47的胰蛋白酶抗性。首先根据其氨基酸序列,找到胰蛋白酶的水解位点—赖氨酸(Lys,K)和精氨酸(Arg,R),再利用生物信息学软件获得酶分子结构中K和R与周围溶剂的接触程度,选定暴露程度最大的K280为候选突变位点,进行模拟突变,并分析突变前后的氢键键长和整体结构的变化。根据氢键键长的变化,确定突变体为K280N。对K280N设计突变引物,用重叠延伸PCR技术对MAN47野生型man基因进行突变,PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体PYCα连接,在大肠杆菌DH5α中扩增后转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,经人工肠液(pH 6.8 10mg/ml胰蛋白酶溶液)筛选,得到抗胰蛋白酶的最佳突变株。结果表明突变酶在用人工肠液处理180min后,其半衰期为173min,而野生型酶为99min,其他酶学性质与野生型酶基本一致。; 胡凤娟王旭曼刘大岭姚冬生; 关键词：定点突变 Β-甘露聚糖酶重叠延伸PCR 同源建模分子计算

用有机相提高共价固定化胰蛋白酶活力被引量：1: 2012年; 蛋白质共价固定时,容易发生由于共价化学反应而引起蛋白质构象的不可逆变化而造成蛋白活性丧失的现象,该问题在诸如药物修饰、蛋白质芯片、酶生物电极等制备中十分重要.本研究以壳聚糖为载体,以胰蛋白酶为研究对象,比较了水相与多种有机相条件下的共价固定化酶的动力学特性.结果发现,固定化酶特征常数Km值:所有的有机相条件下共价固定的胰蛋白酶均优于传统的水相中共价固定的该酶,且更接近于游离酶的Km值(水相中固定的胰蛋白酶其Km是1,4-二氧六环中固定的胰蛋白酶的3.69倍),提示有机相中固定的胰蛋白酶比水相中固定的该酶更接近于酶的天然构象;与水相中共价固定的胰蛋白酶相比,所有有机相中共价固定的胰蛋白酶均获得了更高的转换数Kcat(乙酸乙酯中固定的胰蛋白酶其转换数Kcat是水相中固定的该酶的58.64倍),即有机相中共价固定的胰蛋白酶均显示出比传统的水相中共价固定的该酶更高的催化效率.本研究表明,利用酶蛋白在有机相中变得刚硬的特性,在有机相中对某些酶进行共价固定化修饰有利于维持酶蛋白天然构象,一定程度上能够克服传统水相中进行共价固定化过程中造成的酶变性失活现象.; 王旭曼苏建华朱雄军谢春芳刘大岭; 关键词：有机相

一种定点突变改造的大鼠二肽基肽酶III: 本发明涉及一种定点突变改造的大鼠二肽基肽酶III。本发明所述的定点突变改造的大鼠二肽基肽酶III，其特征在于：它是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的来源于Rattus norvegicus的二肽基肽酶III中制造多个...; 刘大岭姚冬生王旭曼谢春芳; 文献传递

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王旭曼