王梦川
- 作品数：19 被引量：59H指数：5
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- beclin 1过表达对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长抑制作用观察被引量：3
- 2014年
- 目的:观察自噬调控基因beclin 1过表达对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)BT-549细胞的体外生长影响。方法:应用荧光显微镜观察细胞转染效率,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞beclin 1mRNA和蛋白表达水平,采用吖啶橙染色观察细胞自噬情况,采用MTT检测细胞的增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况。结果:细胞转染48h实验组和对照组的细胞转染效率均>45%,qRT-PCR提示实验组细胞beclin 1mRNA 2-ΔΔCt值为16.806±2.920,较空白组(0.853±0.025)显著升高,F=88.733,P<0.001;蛋白质印迹法提示实验组细胞beclin 1/GAPDH灰度值比为1.050±0.056,较空白组(0.640±0.006)显著升高,F=137.213,P<0.001;吖啶橙染色提示实验组细胞发生自噬的比例为33%,显著高于空白组(15%),χ2=8.985,P=0.011;MTT法提示实验组细胞增殖率在24h(0.152±0.019)、48h(0.254±0.029)、72h(0.322±0.027)和96h(0.357±0.035)均显著低于空白组24h(0.202±0.023)、48h(0.308±0.030)、72h(0.446±0.032)和96h(0.851±0.014),P值均<0.05;72h实验组细胞凋亡率为(6.560±0.593)%,显著高于空白组(2.533±0.216)%,F=107.085,P<0.001;实验组G0/G1期为(63.267±3.650)%,显著高于空白组(51.533±5.152)%,F=6.566,P=0.027。结论:自噬调节基因beclin 1过表达可显著抑制BT-549细胞的体外增殖水平。
- 吴爱国王梦川王日玮原红军纪术峰邵国利郑临海范旭龙焦庆丽
- 关键词：乳腺肿瘤自噬BECLIN
- 肿瘤来源外泌体在诱导肿瘤相关成纤维细胞生成中作用的研究进展
- 2022年
- 在肿瘤微环境(TME)中,肿瘤来源外泌体(TDE)可被成纤维细胞摄取,并诱导后者分化为肿瘤相关成纤维细胞(CAF),而CAF又可通过多种机制促进肿瘤的发展。了解TDE诱导CAF形成的作用机制,对基于TME理念的靶向治疗具有重要意义。目前,绝大多数研究均是采用超速离心或试剂盒提取等方法从人源性肿瘤细胞中提取TDE,将其与成纤维细胞进行共培养,再通过检测α-平滑肌肌动蛋白和成纤维细胞活化蛋白等特征蛋白的表达以鉴定CAF。进一步机制研究发现,TDE所携带的某些蛋白或miRNA可通过转化生长因子-β/SMAD、肿瘤坏死因子-α/核因子-κB、细胞外调节蛋白激酶1/2/血管细胞黏附蛋白-1和Ras超家族三磷酸鸟苷激酶-35/MMP1/MMP3等多条通路促进CAF的生成,其结果是促进肿瘤细胞的增殖和迁移、破坏细胞外基质成分、促进微血管生成,以及提高小鼠体内的成瘤能力。
- 杨浩(综述)赵侃侃王梦川
- 关键词：肿瘤肿瘤微环境肿瘤相关成纤维细胞
- 加速康复外科理念在结肠癌患者围手术期应用的随机对照临床研究被引量：5
- 2013年
- 目的探讨开腹结肠癌根治切除术采用加速康复外科治疗与传统围手术期处理方法的安全性及有效性。方法回顾分析2011年5月-2013年5月广东医学院附属三水医院普通外科收治的66例结肠癌根治切除手术患者临床资料，随机分为加速康复组（n=34）和传统方法组（n=32）。比较两组患者术后住院时间、恢复肠排气时间、停止静脉输液的时间、营养状态的变化、治疗费用以及术后并发症的发生情况。结果与传统方法组相比，加速康复外科组术后住院时间缩短、治疗费用降低，术后首次肠道排气时间提前，停止静脉输液时间提前，手术后体重未见明显下降。两组术后并发症的发病率差异无统计学意义。结论加速康复外科理念指导下的结肠癌根治切除术安全、有效，可明显减轻围手术期患者的应激反应，加速患者康复。
- 周丹唐廷勇范晓曦纪术峰王梦川吴爱国
- 关键词：加速康复外科围手术期医护
- 乳腺癌组织Beclin1和EMT相关分子标志物表达及其临床意义探讨被引量：10
- 2015年
- 目的探讨乳腺癌组织Beclin1和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子标志物(E-cadherin,N-cadherin)表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、免疫组织化学和蛋白质印迹法分别检测2012-12-01—2013-06-01南方医科大学珠江医院收治的67例乳腺癌和正常乳腺组织标本中Beclin1及E-cadherin、N-cadherin的mRNA和蛋白表达情况,分析Beclin1与EMT及临床病理学特征的关系。结果乳腺癌组织和正常乳腺组织中Beclin1mRNA的表达量分别为2.194±0.502和5.637±1.445,z=-6.806,P<0.001;E-cadherin mRNA的表达量分别为2.647±0.717和6.538±2.045,z=-5.088,P=0.009;N-cadherin mRNA的表达量分别为6.501±0.741和3.860±0.955,z=5.928,P<0.001。Beclin1蛋白定位于胞膜和胞质,以胞质为主;E-cadherin蛋白定位于胞膜和胞质,以胞膜为主;N-cadherin蛋白定位于胞膜和胞质,以胞质为主。乳腺癌组织和正常乳腺组织中Beclin1蛋白表达量分别为5.531±0.848和7.871±0.817,z=-5.431,P<0.001;E-cadherin蛋白的表达量分别为1.257±0.142和2.885±0.294,z=-4.904,P<0.001;N-cadherin蛋白表达量分别为0.802±0.072和0.419±0.049,z=4.453,P<0.001。Beclin1蛋白是EMT的保护因素,Beclin1蛋白与人类表皮生长因子受体(human epidermal growth factor 2,HER-2)、Ki-67和TNM分期呈负相关性,P值均<0.05;与年龄、组织分级、雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progestrone receptor,PR)无相关关系。结论无论mRNA水平还是蛋白质水平,乳腺癌组织中Beclin1和E-cadherin较正常乳腺组织表达均下调,N-cadherin较正常乳腺组织表达上调。Beclin1是EMT的保护因素,Beclin1与HER-2、Ki-67和TNM分期均存在负相关关系,可作为乳腺癌的预后指标,对进一步研究乳腺癌的远处转移机制提供理论参考。
- 焦庆丽吴爱国邵国利王梦川纪术峰郑临海范旭龙张健
- 关键词：BECLIN1上皮-间质转化
- miRNA-125b-1对乳腺癌SKBR-3细胞放射敏感性的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨miRNA-125b-1对乳腺癌SKBR-3细胞放射敏感性的影响,及其对靶基因HER-2蛋白表达的影响。方法合成miRNA-125b-1并通过lipofectamineTM2000转染SKBR-3细胞,分别用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot法检测HER-2mRNA和蛋白质表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖抑制率;经不同剂量X线照射后,平板克隆形成实验计算细胞存活率,用单击多靶数学模型进行曲线拟合作图,求曲线参数D0、Dq和N值,比较细胞放射敏感性的变化。RT-PCR和Western blot定量结果的组间比较采用单因素方差分析,细胞周期及细胞增殖实验结果的组间比较采用重复测量方差分析。结果 miRNA-125b-1转染后的SKBR-3细胞中HER-2mRNA(F=447.78,P=0.00)和蛋白质水平(F=10.07,P=0.01)显著下降;转染后的SKBR-3细胞出现了G2M期阻滞;miRNA-125b-1组细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组(F=163.28,P=0.00);曲线拟合后显示,转染后的细胞(D0=1.87,Dq=2.68,N=4.21)与对照组(D0=2.51,Dq=4.10,N=5.11)相比D0,Dq和N值均下降(SER=1.34,P<0.05),提示细胞放射敏感性增加。结论 miRNA-125b-1使乳腺癌SKBR-3细胞的放射敏感性增加,可为HER-2阳性的乳腺癌提供新的治疗方法。
- 胡斌吴爱国李学孝纪术峰王梦川吴凯邵国利
- 关键词：乳腺肿瘤放射疗法微小RNA人表皮生长因子受体2
- 转染beclin1基因诱导自噬对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长的影响被引量：14
- 2013年
- 目的探讨转染beclin1基因诱导三阴性乳腺癌BT-549细胞发生自噬及其对细胞生长的影响。方法将BT-549细胞分为4组,包括空白组、空载体组、脂质体组和目的基因组,并以MDA-MB-231细胞作为阳性对照组。采用Lipofectamine^(TM)2000携带含有beclin1基因的质粒转染BT-549细胞,分别于转染后24、36、48、60h用荧光显微镜观察转染效率;于转染后48h利用RT-PCR检测各组细胞beclin1 mRNA表达情况;转染后各组细胞分别在含10%胎牛血清1640培养基和无胎牛血清1640培养基内培养,并分别于24、48、72、96h和12、24、36、48h采用MTT法检测细胞的增殖率和存活率;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内培养24h后,采用流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期情况;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内生长36h后,经吖啶橙染色观察并比较发生自噬的细胞数。MTT数据按重复测量的方差分析进行统计,其余计量资料按单因素方差分析进行统计,计数资料按照R×C表资料的χ~2检验进行统计分析。结果 48h时携带目的基因的质粒经脂质体转染BT-549细胞的效率最高;目的基因组细胞beclin1 mRNR水平显著高于空白组、脂质体组、空载体组和阳性对照组(P<0.01);在含10%胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞的增殖率显著低于空白组(F=112.1,P=0.00),而在无胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞36h和48h的存活率显著高于空白组(F=37.5,P=0.00);目的基因组细胞的凋亡比例增加(F=3914.4,P=0.00),且细胞处于G0/G1期的比例升高(F=258.8,P=0.00);目的基因组细胞发生自噬的数量显著增加(χ~2=7.7,P=0.00)。结论向三阴性乳腺癌BT-549细胞转染beclin1基因,可提高细胞的自噬水平。该作用可抑制细胞在正常培养环境下的增殖,但对低营养环境下的细胞存活具有保护作用。
- 王梦川吴爱国王日玮原红军李学孝胡斌邵国利纪术峰吴凯范旭龙郑临海
- 关键词：BECLIN自噬
- Beclin 1增强三阴性乳腺癌BT-549细胞对紫杉醇的敏感性被引量：4
- 2014年
- 目的:研究Beclin 1对于三阴性乳腺癌BT-549细胞对紫杉醇的敏感性的影响。方法:应用慢病毒介导Beclin 1表达载体转染BT-549细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞;MTT法检测各组细胞的增殖抑制率;流式细胞术和Hoechst33342染色法检测细胞凋亡情况;吖啶橙染色法检测细胞内酸性囊泡形成情况。结果:成功构建稳定表达Beclin 1的BT-549细胞;紫杉醇作用24 h,Beclin 1组的IC50为(416.85±16.97)μg/L,显著低于空载体组(1725.43±99.70)μg/L和未转染组(2130.10±190.74)μg/L(F=154.847;P<0.00);作用48 h,Beclin 1组IC50为(74.48±10.18)μg/L,显著低于空载体组(280.18±14.78)μg/L和未转染组(614.80±9.29)μg/L(F=1638.484;P<0.00);50μg/L紫杉醇处理48 h,Beclin1组BT-549细胞凋亡率为(46.40±1.00)%,显著高于空载体组(37.81±1.85)%和未转染组(35.55±3.36)%(F=14.661;P<0.005),Beclin 1组细胞细胞核凋亡特征改变较其他两组更明显;紫杉醇处理后,Beclin 1组细胞酸性囊泡形成显著多于其他两组。结论:Beclin 1显著增强三阴性乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。
- 范旭龙吴爱国郑临海焦庆丽邵国利王梦川纪术峰
- 关键词：三阴性乳腺癌BECLIN紫杉醇自噬凋亡
- Beclin1基因增强三阴性乳腺癌细胞BT-549对多柔比星的敏感性被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨Beclin1基因对三阴性乳腺癌细胞BT-549增殖及多柔比星作用于癌细胞的影响。方法:脂质体法分别将质粒pDsRed-C1、pDsRed-C1-Beclin1转染于人三阴性乳腺癌BT-549细胞株。转染后一组用多柔比星处理,另一组不做处理。MTT法分析Beclin1过表达对BT-549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:多柔比星处理前后,Beclin1组细胞增殖均慢于阴性对照组和空白组细胞(各P<0.01);细胞凋亡的变化:多柔比星处理前转染pDsRed-C1-Beclin1的BT-549细胞凋亡率为(8.81±1.45)%,高于转染pDsRed-C1细胞组和空白组(P<0.05),多柔比星处理后,Beclin1组细胞的凋亡率为(14.3±1.09)%,亦高于阴性对照组和空白组(P=0.00)。结论:Beclin1基因过表达抑制BT-549细胞的增殖,增强癌细胞对多柔比星的敏感性。
- 王日玮吴爱国王梦川原红军
- 关键词：多柔比星
- 相关成纤维细胞自噬调控对乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化影响被引量：8
- 2017年
- 目的研究报道,乳腺癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)在乳腺癌的侵袭、转移中起到促进作用,而机制未明。本研究探讨乳腺癌CAFs自噬调控对MCF-7细胞EMT进程的影响。方法采用胶原酶消化法对CAFs及配对人乳腺癌正常成纤维细胞(NBFs)进行原代培养,采用免疫荧光和蛋白质印迹法进行鉴定;建立CAFs和NBFs与MCF-7条件培养基(CM)共培养及Transwell小室共培养模型,共分为3组进行实验,空白组即MCF-7单独培养组(CON),对照组即正常乳腺癌成纤维细胞与MCF-7共培组(NBFs),实验组即乳腺癌相关成纤维细胞与MCF-7共培养组(CAFs)。Transwell侵袭及迁移实验检测各组MCF-7细胞侵袭和迁移能力。蛋白印迹法检测各组MCF-7细胞EMT上皮标志分子E-cadherin蛋白和间质标志分子N-cadherin和Vimentin蛋白表达情况;蛋白质印迹法检测CAFs与NBFs自噬相关蛋白LC3B、Beclin1和p62表达差异;自噬抑制剂3MA处理CAFs后蛋白质印迹法检测CAFs上述自噬相关蛋白表达差异;予以自噬抑制剂3MA预处理CAFs后,收集CM与MCF-7共培养,分3组进行实验,空白组即MCF-7单独培养组(CON);对照组即MCF-7与CAFs-CM共培养组(CAFs-CM);实验组即MCF-7与3MA-CAFs-CM共培养组(3MA-CAFs-CM)。蛋白质印迹法检测各组MCF-7细胞EMT上皮标志分子E-cadherin蛋白和间质标志分子N-cadherin和Vimentin蛋白表达情况。结果通过酶消化法原代培养可获取α-SMA(+)、Vimentin(+)E-cadherin(-)具有CAFs典型特征的肌成纤维细胞;Transwell侵袭、迁移实验证实CAFs可促进MCF-7细胞侵袭、迁移;蛋白质印迹法检测显示,CAFs组MCF-7E-cadherin蛋白表达量为0.432±0.012,比NBFs组的0.585±0.02及空白组的0.659±0.016表达水平低,F=120.098,P<0.05。而CAFs组间质蛋白标志物Vimentin蛋白表达量为0.309±0.065,比NBFs组的0.103±0.011及空白组的0.062±0.009表达低,F=42.395,P均<0.05。CAFs组N-cadherin蛋白表达量为1.439±0.07比BNFs组的1.3347±0.028及空白
- 张健吴爱国王梦川邵国利纪术峰焦庆丽冯少博陈丹珣
- 关键词：乳腺癌自噬EMTMCF-7
- Beclin 1基因过表达对人乳腺癌细胞BT-549裸鼠皮下成瘤生长影响研究被引量：4
- 2017年
- 目的人乳腺癌BT549细胞缺失自噬基因Beclin 1是一种抑癌基因,过表达Beclin 1诱导自噬可抑制肿瘤的形成和发展。本研究预通过重组慢病毒载体转染Beclin 1基因,以观察过表达Beclin 1对裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤生长情况的影响。方法以重组慢病毒载体pLenO-GTP-Beclin 1感染BT549细胞为实验组(6只),以对照慢病毒颗粒(pLenO-GTP-Vecto)感染BT549细胞为阴性对照组(6只),不做处理BT549细胞(缺失Beclin 1基因)为空白对照组(6只)。3组转染细胞分别接种至裸鼠皮下,构建人乳腺癌BT549细胞裸鼠皮下成瘤模型。观察记录裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线。裸鼠饲养28d后脱臼法处理,剥离瘤体,测定肿瘤体积和质量。用RT-PCR法、蛋白质印迹法及免疫组化法检测皮下成瘤中Beclin 1基因表达情况。结果慢病毒载体构建成功,裸鼠接种各组细胞后在第7天均有肿瘤形成,实验组的瘤体平均体积为(79.66±42.52)mm3,肿瘤生长速度明显慢于阴性对照组的(358.62±58.83)mm3和空白对照组的(400.40±121.45)mm3,差异有统计学意义,F=27.34,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均重量分别为(0.16±0.06)、(0.81±0.32)和(0.93±0.37)g,差异有统计学意义,F=12.749,P<0.05。RT-PCR法检测显示,实验组Beclin 1 mRNA的相对表达量为31.11±12.77,明显高于阴性对照组的0.66±0.02和空白组的1.00±0.07,差异有统计学意义,F=16.86,P<0.05;实验组Beclin 1蛋白表达量为0.212±0.078,明显高于阴性对照组的0.044±0.006和空白对照组的0.043±0.009,差异有统计学意义,F=27.418,P<0.05。实验组中Beclin 1蛋白的阳性表达率为46.7%,明显高于阴性对照组的10.0%和空白对照组的16.7%,差异有统计学意义,χ2=12.34,P<0.01。结论 Beclin 1基因过表达能够明显抑制裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤的生长,Beclin 1的表达量与肿瘤成长呈负相关。
- 冯少博吴爱国王梦川纪术峰邵国利张健陈丹珣雷姗姗赵侃侃王子祥
- 关键词：乳腺癌BECLIN
