甄宏
- 作品数：28 被引量：128H指数：9
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 调节性T细胞在小鼠巨细胞病毒感染胚胎成纤维细胞机制中的免疫调控作用
- 2007年
- 目的体外研究调节性T细胞(Treg)在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)感染小鼠巨细胞病毒(MCMV)机制中的免疫调节作用。方法采用尼龙毛柱和MACSTreg磁珠法获得纯化的Treg和去除Treg的T细胞(TdepTreg),建立TdepTreg和添加Treg的T细胞与感染MCMV的MEF(MEFMCMV)体外共培养细胞模型。用蚀斑法检测共培养细胞上清中感染性病毒量;流式细胞术检测共培养体系中Tc1(CD3+CD8+IFN-γ+),Tc2(CD3+CD8+IL-4+),Th1(CD3+CD8-IFN-γ+),Th2(CD3+CD8-IL-4+)细胞比率变化;双抗体夹心ELISA法检测共培养细胞上清中转化生长因子-β(TGF-β)和IL-10蛋白表达水平。结果TdepTreg与MEFMCMV共培养3d后上清中感染性病毒量较感染对照组显著降低,同时效应性T细胞各亚群比率较非感染对照组显著增加。向TdepTreg-MEFMCMV体系中添加Treg可增加共培养体系中感染性病毒量,同时Tc1、Tc2和Th1细胞比率显著减少,且均与Treg比率存在剂量相关性;而Th2比率仅在Treg比率增至20%时显著低于感染对照组。添加Treg的共培养体系中IL-10和TGF-β蛋白表达水平随Treg比率增加而增高,与Treg存在正性相关。结论Treg可通过IL-10、TGF-β等途径抑制效应性T细胞的免疫保护作用,并且由于Treg抑制作用的不均衡性,导致Th1/Th2和Tc1/Tc2平衡失调,创造了一个利于CMV增殖的免疫环境。
- 李亚男方峰舒赛男甄宏周玉峰董永綏李革
- 关键词：巨细胞病毒调节性T细胞转化生长因子-Β白介素-10
- 大蒜新素抑制人巨细胞病毒即刻早期基因表达在抗人巨细胞病毒机制中的作用被引量：10
- 2006年
- 目的研究大蒜新素抑制人巨细胞病毒(HCMV)复制的作用环节和机制。方法采用时间依赖的药物添加和移除实验分析大蒜新素在HCMV病毒复制周期中的作用环节。用Southern blot检测大蒜新素处理后感染细胞中HCMV DNA负荷量变化。用Northern blot和Western blot检测大蒜新素对HCMV即刻早期(ie)基因转录和翻译的影响,并与相应浓度更昔洛韦(GCV)的作用效应作比较。结果时间依赖的药物添加和移除实验发现大蒜新素只有在HCMV感染复制周期的早期存在时才能发挥对病毒增殖的抑制作用。大蒜新素对ie 1 mRNA的抑制率达30．4％-46．6％。在感染后24 h 病毒表达IE蛋白的高峰期时,大蒜新素对IE72表达的抑制率为42．6％-64．9％,对IE86表达的抑制率为50．7%- 70．6％。到感染后72 h时(子代病毒表达IE蛋白的时期),大蒜新素对IE蛋白仍然有抑制作用,对IE72的抑制率为 36.4％-49．3％,对IE86的抑制作用更为明显,抑制率达77．9％-87．7％,接近于对IE72抑制率的2倍。而GCV对一个 HCMV复制周期内的ie 1 mRNA和IE蛋白表达均无抑制作用。Southern blot结果显示,在感染后72 h(HCMV完成一个复制周期的时间点),大蒜新素和GCV均能减少HCMV DNA负荷量,两药相当剂量的抑制效应比较,差异无统计学意义(P> 0．05)。结论大蒜新素抑制HCMV ie基因的转录和翻译,进而抑制病毒的复制增殖,是其抗HCMV的重要作用机制。
- 甄宏方峰舒赛男周玉峰董永绥聂兴草李革
- 关键词：大蒜新素更昔洛韦二烯丙基三硫化物巨细胞病毒即刻早期基因
- 小鼠巨细胞病毒感染神经干细胞的体外研究被引量：9
- 2006年
- 目的研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSC)增殖和分化的影响,为研究先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常的机制奠定理论基础。方法体外分离、培养和鉴定BABL/c胎鼠NSC,用含LacZ报告基因的重组小鼠巨细胞病毒RM461感染NSC,X-gal染色监测感染过程,透射电镜观察超微结构改变,PCR检测受染细胞及培养上清中病毒DNA及观察培养上清接种到小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的细胞病变效应,了解RM461对NSC的感染情况。通过绘制生长曲线、流式细胞术检测分化细胞比率,研究RM461对NSC增殖和分化的影响。结果RM461感染NSC48h后细胞出现肿胀、体积增大、神经球边缘的细胞发生脱落和死亡,细胞形态的改变随感染复数(MOI)的增加而更加明显;X-gal染色,24h受染细胞即可出现阳性改变,48h达高峰;RM461感染72h时,受染细胞及培养上清中病毒DNA呈阳性,培养上清接种到MEF后可出现明显的细胞病变效应,电镜下受染细胞胞浆中存在病毒颗粒,细胞器肿胀明显;RM461可明显抑制NSC的增殖和分化,当MOI为1时,分化培养2d,感染组胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇酶(NSE)阳性细胞的比例分别为(37.4±1.6)%和(8.9±0.8)%,远较未感染组[分别为(50.3±1.8)%和(23.4±1.3)%]低(P<0.01),且GFAP和NSE阳性细胞比率随MOI的增加降低更加明显。结论RM461可感染体外培养的NSC,并能形成产毒性感染;RM461可明显抑制NSC细胞的增殖和分化并导致干细胞死亡,这可能与先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常有关。
- 周玉峰方峰甄宏付劲蓉易文龙李革董永绥
- 关键词：巨细胞病毒神经干细胞脑发育异常先天性感染
- T细胞免疫对小鼠星形胶质细胞巨细胞病毒感染的保护作用
- 2006年
- 目的:研究T细胞免疫对小鼠星形胶质细胞巨细胞病毒(CMV)感染时的免疫保护作用。方法:建立小鼠T细胞与感染巨细胞病毒的同系小鼠星形胶质细胞体外共培养的细胞模型。通过显微镜观察和绿色荧光染料CFSE标记后流式细胞术检测方法来判断T细胞克隆增殖情况;以ELISA检测共培养上清中IFNγ和TNFα的含量;通过观察星形胶质细胞感染CMV后特异性的细胞病变和PCR方法检测星形胶质细胞内CMVDNA的负荷量来了解T细胞针对CMV的免疫保护作用。结果:在共培养3d后,可见到少量的T细胞克隆形成,CFSE标记的方法显示发生过增殖的T细胞占T细胞总数的(6.68±0.61)%,与未加CMV刺激的对照组有显著性差异(P<0.01)。共培养上清中的IFNγ浓度为(22.9±3.4)ng/L,而对照组为<8ng/L(P<0.05)。但在试剂盒检测范围内各组均未检出TNFα。共培养的T细胞能够减少31.25%～75%的细胞病变产生,减少～75%的CMVDNA负荷量。共培养3d的培养细胞上清也具有免疫保护作用。而将具有免疫保护作用的T细胞与感染CMV的星形胶质细胞继续培养3d,发现T细胞的增殖明显减少(1.83±0.25)%,培养上清中未检出IFNγ,CMVDNA的负荷量无减少,提示T细胞的免疫功能受到抑制。结论:小鼠星形胶质细胞在感染CMV后能够刺激T细胞增殖活化;T细胞免疫能够发挥一定程度的保护作用,这种保护作用有部分是由分泌性的细胞因子介导的;T细胞活化后功能很快受到抑制,其中的机制有待进一步研究。
- 甄宏方峰周玉峰李革董永绥
- 关键词：巨细胞病毒感染T淋巴细胞细胞免疫星形胶质细胞
- 大蒜新素对巨细胞病毒感染细胞周期蛋白基因表达谱的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus,HCMV)对感染细胞周期蛋白基因表达谱的影响及大蒜新素的干预效应。方法 利用基因芯片技术对比分析大剂量大蒜新素处理正常细胞和感染细胞 (MOI=2 .5 ) 72h以及同期培养的感染和正常细胞周期相关蛋白基因 (2 39条 )表达谱的变化。结果 感染细胞有 2 4条 (10 .0 4 % )基因发生有意义的差异性表达 ;其中 9条表达增加 ,15条表达降低。大蒜新素对 11条HCMV感染所致表达改变的基因无影响 ;使HCMV感染下调作用消除的基因有 11条 ;使HCMV感染上调作用消除的基因有 2条。另外 ,药物对感染细胞和正常细胞基因表达均有影响的有 2条 ;仅引起正常细胞基因表达改变的有 3条。结论 HCMV感染使部分细胞周期相关蛋白基因差异性表达可能是HCMV导致宿主细胞周期紊乱的原因之一。大蒜新素至少可使HCMV所致 13条基因差异性表达作用消除 ,提示药物干预了病毒对细胞周期的影响。
- 聂兴草方峰董永绥刘志峰甄宏李革
- 关键词：大蒜新素巨细胞病毒感染表达谱基因芯片
- 大蒜新素对人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞Caspase-3表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的观察大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELs)Caspase-3表达的影响,从细胞凋亡角度探讨大蒜新素抗HCMV效应的部分作用机制。方法用HCMV AD169毒株感染HELs,建立高感染复数(MO I)和低MO I感染细胞模型;设药物高、中、低剂量分别为9,6和3μg.mL-1,采用蛋白印迹法检测病毒感染和(或)药物处理后72 h细胞Caspase-3的表达水平。结果正常细胞仅见Caspase-3 P32表达;HCMV感染细胞P32表达显著增加,还出现活性片段P17条带,且高MO I组P17表达明显高于低MO I组;大蒜新素处理低MO I感染细胞P17表达呈上升趋势,P17/P32比值也明显增加;大蒜新素处理高MO I感染细胞P17表达下调,P17/P32比值也显著下降。结论HCMV无论高或低MO I感染均可诱导细胞凋亡增多,且高MO I诱导作用更强。大蒜新素一方面使低MO I感染细胞凋亡增多,另一方面抑制高MO I感染细胞的凋亡。前者可能有利于细胞清除病毒,后者则可减少细胞损伤而发挥保护作用。大蒜新素对HCMV感染细胞凋亡的调控呈双向性。
- 孙涛涛方峰甄宏舒赛男刘瑾周玉峰李革
- 关键词：大蒜新素人巨细胞病毒CASPASE-3
- 双黄连、鱼腥草注射液抗鼠肝炎病毒3型的体外实验研究被引量：10
- 2006年
- 目的:探讨双黄连、鱼腥草在细胞水平对鼠肝炎病毒3型(murine hepatitis virus,MHV-3)是否具有抑制作用。方法:细胞培养、蚀斑试验测定病毒滴度;MTT法进行药物毒性试验;蚀斑抑制试验检测双黄连、鱼腥草的抗MHV-3活性。结果:双黄连半数中毒质量浓度(TC50)为6 100μg.m l-1,抗MHV-3病毒的半数抑制质量浓度(IC50)为304.9μg.m l-1;鱼腥草的分别为500、22.06μg.m l-1。治疗指数(TI)双黄连为20.07,鱼腥草为22.67。两种中药成分对MHV-3病毒的抑制作用均存在明显的量效反应关系(P<0.01)。结论:双黄连、鱼腥草在细胞水平有显著的抗MHV-3作用。
- 易文龙方峰宁琴严伟明甄宏舒赛男周玉峰李革
- 关键词：双黄连鱼腥草
- 知母宁的体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用被引量：6
- 2005年
- 目的检测知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)作用。方法以Vero细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,采用中性红染色法测定不同药物加入方式下知母宁的体外抗HSVⅡ有效率,并检测其抑制病毒作用的时效关系及对病毒感染性的影响。结果知母宁表现出对HSVⅡ333的综合抑制作用和抑制病毒吸附后的后续复制增殖作用,其抗病毒有效率(ER%)最高达80%,这两种作用的半数有效浓度(EC50)均约为0.8mg/ml。知母宁浓度≥2.08mg/ml时能显著抑制HSVⅡ,ER%最高达95%。知母宁还有较弱的预防病毒吸附作用。知母宁抗病毒作用的时效关系研究表明,随药物作用时间延长,低浓度药物抗病毒有效率呈减小趋势,在高浓度时(≥2.08mg/ml)其病毒抑制强度基本维持稳定。随药物作用时间延长,知母宁可明显削弱病毒的感染性,知母宁组病毒的-lgTCID50值较病毒对照组的下降值呈增大趋势,其下降百分比维持稳定,约为40%。结论知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型效果好,且其抗病毒作用具有多个作用点。
- 李沙甄宏蒋杰向继洲
- 关键词：知母宁抗病毒作用
- 鼠巨细胞病毒感染小鼠星形胶质细胞对共培养T细胞功能及调节性T细胞分化的影响
- [目的]
①在体外细胞水平研究巨细胞病毒感染星形胶质细胞对T细胞免疫的影响;②探明巨细胞病毒感染对星形胶质细胞-T淋巴细胞共培养系统中调节性T细胞亚群分化扩增的影响及其可能机制;③研究大蒜新素对巨细胞病毒感染引...
- 甄宏
- 关键词：小鼠巨细胞病毒星形胶质细胞大蒜新素即刻早期基因
- 大蒜新素对MCMV感染小鼠转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响被引量：23
- 2004年
- 目的探讨大蒜新素(即大蒜素注射液)对鼠巨细胞病毒(murinecytomegalovirus,MCMV)感染小鼠脾转录因子Tbet和GATA3基因表达的影响。方法20只BALBc小鼠被随机分成大蒜新素治疗组(10只)和安慰剂组(10只)。均在MCMVSmith株接种24h后分别用大蒜新素一般剂量(每天25mgkg)和等量生理盐水腹腔注射,每天1次,连续2周。另设正常对照组(10只)不接种病毒,仅用等量生理盐水治疗。用PFUml测定小鼠脾组织病毒滴度;用RTPCR方法检测小鼠脾转录因子TbetGATA3mRNA表达强度;用双抗体夹心ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清细胞因子IFNγ和IL10表达水平。结果MCMV感染小鼠14d,TbetmRNA和IFNγ的表达基本下降至基线水平,而GATA3mRNA和IL10的表达显著增强;大蒜新素能诱导MCMV感染模型鼠转录因子TbetmRNA和IFNγ的表达显著增加(P<0.01),而转录因子GATA3mRNA和IL10的表达显著下降(P<0.01);同时显著降低小鼠脾组织匀浆中病毒滴度(P<0.01)。结论MCMV感染可导致TH1TH2类细胞因子表达失衡,主要表现为IFNγ表达明显降低和IL10表达明显增高;大蒜新素通过上调转录因子TbetmRNA的表达促进IFNγ的分泌,并下调转录因子GATA3mRNA的表达抑制IL10的分泌。
- 徐翼方峰董永绥向稚丹甄宏李革
- 关键词：大蒜新素GATA-3小鼠基因表达
