章德广
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市科委科研计划项目上海市科学技术委员会科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 初免-加强免疫策略显著增强肺炎链球菌PsaA核酸疫苗的免疫原性
- 目的研究肺炎链球菌核酸疫苗初免-蛋白加强免疫策略能否增强肺链球菌核酸疫苗在动物体内的免疫原性。方法从肺炎链球菌基因组中克隆出psaA基因,将其分别插入到pVAX1真核表达载体和pET28a原核表达载体中,分别构建出表达P...
- 章德广王正敏徐江红郭建李忠明范小勇
- 文献传递
- 初免加强免疫增强肺炎链球菌表面黏附素(psaA)核酸疫苗免疫原性研究
- 肺炎链球菌是导致细菌性肺炎、菌血症、脑膜炎等侵袭性疾病的重要原因,同时也是导致急性中耳炎和鼻窦炎的主要病原菌。由于抗生素的广泛运用,已导致多种耐药菌的产生。已经用于临床的预防疫苗主要为23价多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗...
- 章德广
- 关键词：肺炎链球菌核酸疫苗免疫原性
- 肺炎链球菌自溶素基因的克隆、表达及蛋白纯化被引量：3
- 2009年
- 目的克隆肺炎链球菌自溶素(LytA)基因并在大肠埃希菌中表达及蛋白纯化。方法用PCR方法从肺炎链球菌基因组中克隆肺炎链球菌自溶素基因,然后将其插入原核表达载体pET32a(+),构建pET32a(+)-LytA重组质粒,经IPTG诱导使该基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,亲和层析法纯化目的蛋白,将获得的蛋白用Western blot鉴定。结果扩增出的DNA序列与GenBank中的LytA基因序列一致,成功构建了pET32a(+)-LytA重组质粒并在大肠埃希菌中高效表达,所表达的蛋白经Western blot证实为肺炎链球菌自溶素融合蛋白。结论成功克隆了肺炎链球菌自溶素基因,并将其在大肠埃希菌中表达、纯化,为新型肺炎链球菌疫苗的研制奠定了基础。
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- 关键词：肺炎链球菌
- 肺炎链球菌自溶素核酸疫苗的制备及其免疫原性研究被引量：2
- 2009年
- 目的构建肺炎链球菌自溶素(pneumococcal autolysin,LytA)核酸疫苗,并研究其免疫原性。方法采用聚合酶链反应方法从肺炎链球菌基因组中克隆肺炎链球菌自溶素基因,然后将该基因插入到pVAX1真核表达载体中,构建表达LytA的重组质粒,制备成超螺旋比例大于90%的核酸疫苗。实验组:BALB/c小鼠5只,对其分3次肌内注射核酸疫苗(100μg);对照组:BALB/c小鼠5只,肌内注射pVAX1空载体(100μg)3次。分别采集小鼠血清,采用间接酶联免疫吸附方法测定血清LytA特异性抗体水平。结果扩增出的LytA基因(957 bp)与基因库中LytA的编码序列(957 bp)一致。成功构建了LytA核酸疫苗。实验组小鼠的血清Ly-tA抗体水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功克隆了LytA基因,制备了LytA核酸疫苗,后者可在小鼠体内诱导较强的特异性体液免疫反应。
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- 关键词：中耳炎链球菌肺炎疫苗
- 小鼠肺炎链球菌psaA核酸疫苗的制备及其初免-蛋白加强免疫策略的研究被引量：1
- 2009年
- 目的制备肺炎链球菌核酸疫苗，初步探讨初免一蛋白加强免疫策略能否增强疫苗在动物体内的免疫原性。方法从肺炎链球菌基因组中克隆出肺炎球菌表面黏附素A（pneumococcalsurfaceadhesinA，PsaA）基因，将其分别插入到真核表达载体pVAX1和原核表达载体pET28a中，分别构建出表达PsaA的核酸疫苗及其基因工程表达菌株。pVAX1-psaA核酸疫苗体外转染293T细胞，并通过反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）加以鉴定。实验组5只BALB／c小鼠经核酸疫苗免疫3次后，PsaA纯化蛋白加强免疫1次，对照组5只小鼠经pVAXl空载体免疫3次后，生理盐水加强免疫1次，分别采集血清测定两组抗PsaA抗体水平。结果成功克隆出psaA基因并实现其亚克隆；所构建的psaA核酸疫苗序列正确，同时实现了PsaA蛋白的一步亲和纯化；psaA核酸疫苗可在293T真核细胞中成功表达；核酸疫苗初免后蛋白加强组的抗PsaA抗体滴度高于对照组（t=87．518，P〈0．05）。结论成功构建出psaA核酸疫苗，采用核酸疫苗初免一蛋白加强免疫策略能增强肺炎链球菌psaA核酸疫苗的免疫原性。
- 章德广王正敏徐江红陈兵戴文佳范小勇
- 关键词：中耳炎链球菌疫苗
- 肺炎链球菌表面黏附素A的原核表达和抗原性分析被引量：3
- 2009年
- 目的应用基因工程技术制备肺炎链球菌表面黏附素A(pneumococcal surface adhesin A,PsaA),并分析其抗原性。方法根据基因库中报道的psaA基因序列,从肺炎链球菌基因组中扩增出psaA基因,连接到原核表达载体pET28a中,构建出重组质粒pET28a-psaA,转化大肠杆菌BL21(DE3),采用镍柱亲和层析法纯化PsaA蛋白,Western-blot分析其抗原性。结果克隆出的psaA基因同基因库中报道的psaA基因序列一致。成功构建出重组质粒pET28a-psaA,基因测序证实重组质粒构建正确。成功表达和纯化出PsaA蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示蛋白分子量为37-kDa,最终得到纯度较高的蛋白,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析显示在37-kDa处见到目的蛋白条带。结论利用基因工程技术可以克隆出psaA基因,并成功表达和纯化出PsaA蛋白,其抗原性良好。
- 章德广王正敏徐江红陈兵戴文佳李忠明
- 关键词：中耳炎疫苗
