缪时英
- 作品数：81 被引量：94H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自然科学总论文化科学更多>>
- TRIM69可抑制紫外线和依托泊苷刺激时HeLa和HEK293T细胞系内活化型caspase7和剪切型PARP的表达被引量：2
- 2016年
- 目的验证TRIM69蛋白是否能够抑制He La和HEK293T细胞系内活化型caspase7(cleaved caspase7)和剪切型PARP(cleaved PARP)的蛋白水平。方法构建含人源TRIM69的真核表达质粒,转染He La细胞和HEK293T细胞,筛选稳定表达TRIM69的细胞系,通过紫外线照射和凋亡诱导剂依托泊苷(etoposide)刺激处理,Western blot检测细胞内TRIM69蛋白、活化型caspase7和剪切型PARP蛋白水平的变化。结果紫外线照射和依托泊苷刺激后,与对照组相比,TRIM69过表达的细胞内活化型caspase7和剪切型PARP的蛋白水平均下降(P<0.05)。结论TRIM69蛋白的表达可抑制紫外线或依托泊苷刺激时He La和HEK293T细胞内凋亡相关蛋白活化型caspase7和剪切型PARP的蛋白水平。
- 姚荣彦韩永卿缪时英王琳芳宋伟
- 关键词：E3泛素连接酶DNA损伤PARP
- 一种用于研究精子发生的动物模型
- 本发明为一种以小鼠睾丸显微注射技术为基础的研究精子发生的新的动物模型，涉及该动物模型的建立和应用领域。本发明结合精原干细胞移植技术、RNA干扰技术和抗体注射技术，建立并完善了以小鼠睾丸显微注射技术为基础的研究精子发生的新...
- 狄茜王琳芳缪时英宗书东
- 文献传递
- RNA靶向的CRISPR/CasRx系统在小鼠精原细胞系GC1-spg中的应用
- 2021年
- 目的探究CRISPR/CasRx介导的RNA水平的基因敲降在小鼠精原细胞系GC1-spg的应用。方法利用同源重组的方法构建EF1a core promoter.CasRx.SV40.U6.DRs表达质粒(CasRx-gRNA)和EF1a.EGFP、EF1a.mCherry、EF1a.tdToamto 3种荧光蛋白表达质粒。在人胚肾细胞系HEK-293T内瞬时转染3种荧光蛋白表达质粒和CasRx-gRNA表达质粒,通过荧光强度、Western blot检测外源基因(荧光蛋白、EGFP和mCherry)的敲降情况。在HEK-293T细胞内转染CasRx-gRNA,通过q-PCR检测内源基因mRNA和lncRNA干扰后的表达水平。在小鼠精原细胞系GC1内瞬时转染外源基因egfp、mCherry和CasRx-gRNA表达质粒并通过以上方法检测外源基因(荧光蛋白)沉默效率。结果成功构建了CasRx-gRNA和3种荧光蛋白表达质粒。在HEK-293T细胞内CRISPR/CasRx介导的RNA干扰外源基因(egfp、mCherry)和内源基因(mRNA、lncRNA)后,表达水平均显著下调(P<0.01)。在小鼠精原细胞系GC1内验证CRISPR/CasRx系统,可有效和特异敲降外源基因egfp、mCherry。结论CRISPR/CasRx系统能够在GC1-spg细胞中发挥有效和特异的敲降作用,为雄性生殖发育的研究提供新的基因沉默工具。
- 李梦真柳俊邹定峰缪时英王琳芳宋伟李凯
- 关键词：RNA
- 应用mRNA差异显示技术研究精子发生中阶段特异性基因表达
- 2000年
- 为进行精子发生过程中具有阶段特异性表达特征的基因研究，本文应用mRNA差异显示与曲细精管透光分期技术相结合的方法，对大鼠IX～XII期和XIII～Ⅰ期曲细精管的基因表达指纹图谱进行了比较。通过27组不同引物组合的差异PCR反应，共得到56个具有阶段特异性表达特征的cDNA片段。通过对它们中的12个进行序列测定和序列同源性分析，其中8个为代表未知基因的新的EST，另有一个与小鼠quaking基因具有高度的同源性，提示这一基因同样存在于大鼠曲轴精管中并呈阶段特异性表达。将所得序列送至GenBank，均获得新的序列编号。
- 赵明刘辉贤刘德瑜缪时英王琳芳
- 关键词：精子发生MRNA
- 全文增补中
- 精子膜蛋白YWK-Ⅱ与穆勒管抑制物质的结合及结合区域的确定
- 2001年
- 目的验证精子膜蛋白YWK-Ⅱ与穆勒管抑制物质（MIS）的结合作用, 并确定在MIS上的结合区域。方法将YWK-Ⅱ蛋白胞外区一段63个氨基酸的片段在大肠杆菌中表达并纯化，运用Pull-down实验研究纯化的蛋白质与MIS的作用，并采用酵母双杂交系统确定YWK-Ⅱ蛋白在MIS上的结合区域。结果重组YWK-Ⅱ蛋白能与大鼠睾丸提取液中的MIS结合，结合部位位于MIS 的N肽段中一段较保守区域内。结论精子膜上的YWK-Ⅱ蛋白可能是卵巢分泌的MIS的受体。
- 田新勇缪时英王琳芳
- 关键词：精子膜蛋白
- 人睾丸特异基因HSD－3.8编码蛋白的生物学功能
- 本发明涉及一个人睾丸特异表达的基因编码蛋白质的生物学功能，该基因/蛋白质命名为HSD－3.8(GenBank注册号AF311312)。内容包括：以HSD－3.8蛋白中与生育相关的片段HSD－0.7作为“诱饵”蛋白，利用酵...
- 刘宁林雯缪时英王琳芳张晓东宗书东
- 文献传递
- 串联亲和纯化技术筛选Bat3的相互作用蛋白质被引量：1
- 2014年
- 目的寻找与Bat3结合的蛋白质。方法采用串联亲和纯化技术,在Bat3编码序列羧基端融合Strep2和FLAG 2个分子标签,以此为诱饵筛选与其特异结合的蛋白质,最后进行质谱鉴定。结果筛选到1种蛋白质分子,命名为Ubl4A,免疫共沉淀结果显示Ubl4A可与Bat3相互结合。结论成功建立了串联亲和纯化技术平台,分离出可与Bat3相互作用的蛋白质Ubl4A。
- 吴为李琴山宋伟缪时英王琳芳
- 关键词：凋亡串联亲和纯化
- 基于转录组测序鉴定自噬在小鼠精子发生过程中的动态变化
- 2019年
- 目的基于NCBI数据库中的小鼠精子发生3个时期(精原细胞、粗线期精母细胞、圆形精子)的转录组测序(RNA-Seq)数据,系统地揭示自噬通路及自噬相关基因在精子发生过程中的动态变化规律。方法从GEO数据库中下载精子发生3个时期的RNA-Seq数据(GSE100964),对相邻阶段的差异表达基因分别进行代谢通路富集分析。从Autophagy Database里面取出783个自噬相关基因,对其中在精子发生3个时期的平均表达值大于1的636个自噬相关基因的表达量进行热图展示。结果发现精原细胞和粗线期精母细胞之间的差异表达基因可以显著富集到自噬通路和自噬相关的通路,而粗线期精母细胞和圆形精子之间的差异表达基因不能富集到自噬相关通路。此外,还发现636个自噬相关基因在精子发生过程中有3种主要表达模式。结论自噬在精子发生减数分裂起始前后的RNA水平发生了显著的变化,且自噬相关基因在精子发生过程中呈阶段特异表达。
- 王晗李怡然李凯卢艳邹定峰欧金环缪时英王琳芳宋伟
- 关键词：精子发生自噬转录组测序
- 一种抗RNF138单克隆抗体的制备方法及其应用
- 本发明公开了一种抗RNF138单克隆抗体的制备方法及其应用。本发明公开了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的生物保藏编号为CGMCC NO.19676。本发明公开了一种源自RNF138的抗原，所述抗原具有如SEQ ID ...
- 宋伟赵宏路亚岚黄容徐隆昌李凯卢艳缪时英王琳芳
- 文献传递
- 人睾丸特异基因HSD-1及其编码蛋白质的功能研究
- ＜正＞ HSD-1是以不孕妇女血清筛选人睾丸cDNA表达文库而获得的一个基因,它全长2482bp,编码523个氨基酸,GenBank接收号为U12978。荧光原位杂交结果显示该基因定位于9号染色体。经克隆测序结合基因组信...
- 唐晓玲尹雪茜张建超缪时英宗书东王琳芳
- 文献传递
