罗一博
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 全细胞胞质内注射法生产猪重构胚的研究(简报)被引量：4
- 2008年
- 自从1997年克隆羊“Dolly”出生以来。体细胞核移植技术得到广泛应用,已经有十余种克隆哺乳动物出生，但克隆效率仍然很低。核移植方法的不够完善是其重要原因之一。传统的核移植方法——电融合法和胞质内注射法虽然都取得了成功。但还存在操作复杂及需要辅助设备等问题。为了能够找出一种既容易操作，又不需要特殊设备的核移植方法，本研究对胞质内注射技术进行了改进,尝试了一种新的核移植方法——非Piezo辅助的全细胞胞质内注射法，即不通过Piezo辅助。不破坏供体细胞膜直接将供体细胞注入卵母细胞内，并且比较了这种方法与电融合法对猪体细胞核移植效率的影响。探讨了非Piezo辅助的全细胞胞质内注射法在猪体细胞核移植上的可行性。
- 孔庆然罗一博田江天王振坤张力刘忠华
- 关键词：体细胞核移植
- 猪Nanog基因四环素诱导干扰载体的构建和鉴定
- 2011年
- Nanog基因是在早期胚胎和干细胞等多能性细胞中特异表达的重要基因,但有关猪Nanog基因功能的相关研究甚少。四环素诱导干扰载体是一种可通过四环素等药物条件性诱导干扰目的基因的载体,尤其适用于在发育过程中起着关键作用的基因沉默。常规的四环素干扰系统为二元载体,与一元载体相比获得针对特定基因干扰的稳定细胞系所需周期更长。首先通过构建pGenesil1.0-shRNA重组干扰载体,瞬时转染稳定过表达猪Nanog基因的猪胎儿成纤维细胞后通过Realtime-PCR筛选出干扰效率可达80%以上的干扰片段。之后将筛选得到的干扰片段插入到改造的一元四环素诱导干扰载体TREsilencer,对稳定表达猪Nanog基因的猪胎儿成纤维细胞进行了瞬时转染。实验分别通过光密度检测以及Realtime-PCR检测了不同浓度doxycycline的诱导效率和干扰效率。结果表明,所构建的四环素诱导干扰载体TREsilencer-shRNA5随着四环素浓度的增加,诱导Nanog基因的干扰效率增加,在处理浓度为1μg/ml时干扰效率可达70%以上,为后续得到可诱导的稳定干扰猪Nanog基因的细胞系和进一步研究猪Nanog基因功能奠定了基础。
- 张力罗一博牟彦双朱江李慧刘忠华
- 关键词：四环素NANOG
- 卵泡抑制素基因在猪成纤维细胞中过表达研究被引量：1
- 2016年
- 利用piggy Bac转座子将卵泡抑制素(follistatin)基因整合入猪基因组中,检测follistatin基因表达情况及其对细胞分化基因p53和desmin的影响。结果表明:piggy Bac转座子将follistatin基因转座整合入猪基因组中,整合入基因组的位点均为TTAA位点。整合后的follistatin基因可以正常的转录表达,follistatin的过表达引起p53和desmin基因的表达上调。
- 牟彦双罗一博魏延昌孔庆然刘忠华
- 关键词：PIGGYBAC转座子成纤维细胞
- PiggyBac转座子介导EGFP在猪体细胞和克隆胚胎中的表达
- PiggyBac转座子是来源于鳞翅目昆虫Trichoplusia ni.的DNA转座子,因其可以携带长达14kb的DNA片段在多个物种的基因组上进行转座,所以可以作为良好的遗传操作工具。本实验以EGFP为标记基因,转座子...
- 罗一博张力武美玲朱江刘忠华
- 关键词：PIGGYBAC猪体细胞克隆胚胎转基因
- 文献传递
- PiggyBac转座子介导外源基因在猪成纤维细胞及胚胎中表达研究
- 转基因动物是指以实验方法导入外源基因,在染色体组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。转基因动物有非常重大的生产和科研作用。转基因动物是对多种生命现象本质深入了解的工具,如研究基因的结构与功能的关系,细胞发育的潜能性,细胞...
- 罗一博
- 关键词：PIGGYBAC转座子外源基因成纤维细胞胚胎移植
