蔡宏
- 作品数：64 被引量：184H指数：10
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌四联核酸疫苗免疫原性和保护效率被引量：16
- 2003年
- 对结核杆菌四联DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价。用结核分枝杆菌Ag85B,MPT-64,MPT-63和ESAT-6等4个分泌蛋白基因的表达载体首次免疫小鼠21d后,Ag85B抗体滴度达到1:200,二次免疫后为1:102400,三次免疫后为1:1288。MPT-64和MPT-63的抗体滴度在首次免疫21d后即高达1:25600,二、三次免疫后呈下降趋势。三次免疫21d后均未检测到ESAT-6的特异性抗体。用该DNA四联苗免疫小鼠后,4种蛋白都诱导脾脏细胞产生较高水平的细胞应答(产生了特异性γ-干扰素)。三次免疫后经静脉强毒攻击,四联苗免疫组小鼠肺脏的细菌数比对照空载体组减少了99.8％,保护水平显著高于BCG疫苗组、对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体pJW4303的对照小鼠,肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的50％～70％,而四联苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,实质无肉芽肿,肺泡轮廓清晰。研究证实,Ag85B,MPT-64,MPT-63和ESAT-6四种分泌蛋白编码基因组成的四联DNA疫苗具有很高的免疫应答水平和保护效率。
- 蔡宏田霞呼西旦潘怡李国利庄玉辉朱玉贤
- 关键词：结核病结核分枝杆菌免疫原性免疫应答
- 结核分支杆菌HSP65 DNA疫苗的制备和重组蛋白的原核表达被引量：1
- 2005年
- 结核分支杆菌分子量为 65ku的热应激蛋白 (HSP65)是一种非常重要的抗原 ,为了研制结核病核酸疫苗 ,构建编码HSP65DNA ,并将其分别克隆到原核和真核载体中进行了表达。以标准结核分支杆菌H3 7Rv基因组DNA为模板 ,用PCR法扩增出HSP65基因 ,经限制性内切酶消化后 ,插入真核表达载体pJW43 0 3中 ,获得重组质粒pJW HSP65。同时将HSP65基因插入原核表达载体pET 2 2b(+) ,获得重组质粒pET2 2b HSP65。将pET2 2b HSP65重组质粒转化大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL2 1 (DE3 ) /PolysS ,用IPTG诱导 ,进行蛋白表达。结果表明 ,经酶切鉴定和序列测定证实插入片断为目的基因HSP65,构建成功了真核重组质粒pJW HSP65即可作为结核病DNA疫苗。经SDS PAGE检验证明可以在大肠杆菌细胞中高效表达 ,将表达蛋白进行纯化 。
- 赵博蔡宏于大海朱玉贤
- 关键词：结核分支杆菌HSP65DNA疫苗
- 结核分枝杆菌DNA三价苗的细胞与体液应答研究被引量：3
- 2003年
- 本文构建了含分枝杆菌抗原Ag85B(30kDa) ,MPT - 83(2 6kDa)和ESAT - 6 (6kDa)分泌蛋白的真核表达载体pJW 4 30 3,酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,证明上述三种重组质粒能在COS7细胞中表达出特异蛋白。三种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠 ,首免 ,二免和三免小鼠后 2 1dAg85B抗体平均滴度分别为 1∶32 0 0 ,1∶5 12 0 0和 1∶10 2 4 0 0 ,MPT - 83抗体平均滴度二次免疫和三次免疫后 2 1d测得为 1∶2 5和 1∶5 0 ,三次免疫后均未检测到ESAT - 6特异性抗体。在三免后 2 1dAg85B和MPT - 83的特异性细胞因子γ -干扰素的浓度分别 2 75 pg/ml±16 5 ,2 2 0 pg/ml± 19 8;而ESAT - 6的γ -干扰素浓度为 2 2 0 pg/ml± 9 9。本研究表明 ,多价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答 ,可能有利于增强疫苗对抗结核病的抗性。
- 蔡宏田霞李淑霞胡勤朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌细胞免疫应答AG85BESAT-6
- DNA疫苗初免-BCG加强免疫法提高小鼠抗结核分枝杆菌感染效率的研究被引量：2
- 2007年
- 对结核分枝杆菌DNA四价疫苗(编码Ag85B,MPT64,MPT70和TB10.4抗原)初发免疫、卡介苗(BCG)加强免疫后小鼠产生免疫应答的能力和抗结核杆菌感染效率进行了分析.攻毒后细菌计数结果显示,DNA初免、BCG加强组肺脏和脾脏载菌数的对数值比阴性对照组下降1.0～1.3(P<0.01),且显著低于DNA四价苗和BCG组(P<0.05).3次免疫后,BCG加强组外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞显著增多(P<0.05);经4种抗原分别刺激,BCG加强组脾细胞产生的抗原特异性IFN-γ和IL-2水平显著高于其他免疫组,其中Ag85B抗原诱导产生的IFN-γ浓度为1250ng/L,IL-2浓度为230ng/L,分别是DNA四价苗组的1.6,1.7倍(P<0.05),是BCG组PPD诱导产生相应细胞因子浓度的2.6倍和2.2倍(P<0.05);此外,BCG加强组肺脏中分泌穿孔素的淋巴细胞数量也显著增加(P<0.05).结果表明,DNA初发免疫、BCG加强免疫法能显著提高小鼠CD4+,CD8+T细胞介导的免疫应答,增强小鼠抗结核杆菌感染能力,是提高结核病疫苗免疫效果的新途径.
- 李敏余大海蔡宏
- 关键词：结核分枝杆菌DNA疫苗BCG疫苗TH1型细胞因子
- 一种牛分枝杆菌三联核酸疫苗
- 本发明公开了一种牛分枝杆菌三联核酸疫苗。本发明所提供的牛分枝杆菌三联核酸疫苗，牛分枝杆菌三联核酸疫苗，是将Ag85B、MPT-83和MPT-64基因，分别单独克隆到真核表达载体中，将得到的三种表达载体进行联合形成的混合物...
- 蔡宏朱玉贤
- 文献传递
- 结核分枝杆菌四价DNA疫苗免疫原性和保护效率研究被引量：11
- 2005年
- 对结核杆菌四价DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价.用编码结核分枝杆菌Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3等4种抗原蛋白的基因分别构建的单价DNA疫苗混合成四价苗免疫小鼠.3次免疫后21天,四种抗原特异性抗体滴度分别达到1:6 400、1:51 200、1:6 400、1:6 400.四种蛋白质均能诱导脾脏细胞产生较高水平的抗原特异性IFN-γ,浓度分别为10 582.14 ng/L、13 635.97 ng/L、14 213.15 ng/L和9 657.35 ng/L.三次免疫后经静脉强毒攻击,四价苗组小鼠肺脏和脾脏的载菌数分别减少到阴性组的1/650和1/130.对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体免疫的小鼠肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的70%～80%,而四价苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,肺泡轮廓清晰.研究首次证实,Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3 4种结核杆菌抗原蛋白编码基因组成的四价DNA疫苗,具有很高的免疫应答水平和保护效率.
- 顾田园蔡宏田霞余大海朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌抗原蛋白免疫原性
- DDA提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的研究被引量：2
- 2006年
- 将编码结核杆菌的三种抗原Ag85B，MPT64，MPT83的基因片段分别插入到真核表达载体中，混合后作为组合疫苗免疫小鼠，DDA作为佐剂提高了三价疫苗的免疫原性和免疫保护效果。添加DDA后Ag85B，MPT64，MPT83抗原特异的IFN-γ的含量分别为（265．37±79．2）U／ml，（185．31±58．3）U／ml，（108．13±54．4）U／ml，分别比非佐剂组高16U／ml，45U／ml，2U／ml。IL-4的含量在各组中相差不多，仅为纳克级。攻毒后细菌计数结果显示，肺脏和脾脏的载菌量在添加佐剂的三价组中降低了三个数量级，都达到了未加佐剂组相应脏器的一半菌量。病理切片显示结果与载菌量一致，添加佐剂组肺部淋巴细胞相对较少，巨噬细胞增多。因此，DDA作为佐剂提高了组合疫苗的免疫效果。
- 余大海田霞蔡宏朱玉贤
- 关键词：结核分支杆菌免疫效果
- 结核分枝杆菌多价核酸疫苗的构建及免疫原性被引量：18
- 2002年
- 将编码结核分枝杆菌MPT-64,Ag85B和ESAT-6分泌蛋白的结构基因或包括信号肽的全基因序列定向克隆到真核表达载体pJW4303中,转化到TOP10大肠杆菌,提取质粒DNA,经限制性核酸内切酶鉴定及序列分析证实含有正确的上述3种分泌蛋白的结构基因（包括信号肽）全序列.用脂质体介导法将重组表达质粒导入COS7细胞内并进行瞬时表达,收集表达细胞或浓缩上清液,12％或15％的 SDS-PAGE电泳分离,用结核杆菌特异性抗体进行免疫印迹杂交,证明上述3种重组质粒能在哺乳动物细胞中表达出特异蛋白.3种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠21d后,Ag85B抗体的平均滴度即达到 1:3200,第2次免疫21d后达到1:102400.MPT-64抗体的平均滴度在首免21d后为1:50.第2次免疫21后为1:200.两次免疫21d后均未检测到ESAT-6的特异性抗体.三免21后Ag85B的特异性细胞因子γ-干扰素的浓度为110pg/mL;而 MPT-64和ESAT-6的γ-干扰素浓度未检测到.实验在国内首次用结核杆菌多价DNA疫苗对小鼠进行了免疫实验,二免后的抗体水平已达到或超过国内外已报道的单价苗最高抗体水平,表明多价核酸疫苗和分泌型蛋白载体有利于增强疫苗的保护性应答.
- 蔡宏潘怡朱玉贤李国利庄玉辉
- 关键词：结核分枝杆菌免疫原性细胞应答结核病体液免疫应答
- 结核分枝杆菌热休克蛋白Hsp70在原核表达载体中的克隆表达与鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的对结核分枝杆菌的一种热休克蛋白Hsp70基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达。方法以结核杆菌H37Rv菌株基因组DNA为模板,用PCR法对基因Hsp70进行扩增,产物与载体质粒pET-22b(+)构建表达Hsp70的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coliDH5α内提取质粒,酶切鉴定,再转化入表达宿主E.coliBL21(DE3)PlysS菌株内,对转化菌株以IPTG进行诱导后,破菌,离心,上清进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行免疫印迹分析。结果电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白,所表达的蛋白质相对分子质量为70 000,抗体检测有特异带大小为70kDa。结论成功进行了结核杆菌分泌热休克蛋白Hsp70基因的克隆表达。
- 苏洁蔡宏朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白克隆
- 聚乙烯醇水凝胶复合物修复关节软骨缺损的实验研究
- 实验目的:研究应用聚乙烯醇水凝胶复合物作为关节软骨替代物修复成年犬的关节软骨缺损.实验方法:取10只成年犬随机分为两组,实验组8只,对照组2只.在犬双后肢膝关节股骨内髁负重面制造6mm直径的全层软骨缺损区,实验组在缺损区...
- 蔡宏
- 关键词：软骨损伤聚乙烯醇水凝胶
- 文献传递
