- 一个耐热碱性磷酸酯酶突变型的研究被引量：3
- 2000年
- 为了进一步揭示蛋白质的耐热机制，对含有耐热碱性磷酸酯酶（ＦＤ－ＴＡＰ）的表达质粒ｐＴＡＰ５０３Ｆ进行了随机诱变，用菌落原位显色法从约５０００个转化子中筛选到４个耐热性下降的突变型克隆，并对其中１个克隆（ＴＡＰＭ３）进行了部分酶学性质、ＤＮＡ和氨基酸序列的研究。酶学性质研究表明，与野生型相比，该突变型酶的耐热性有较大幅度的下降，而热激活性无明显改变。 ＤＮＡ序列分析表明在１２３９位ＴＡＰＭ３发生Ｇ→Ａ转换，导致４２７位的甘氨酸变为丝氨酸（Ｇ４２７５），这种突变对酶的耐热性、米氏常数、活化能影响较为明显。这说明只须１个氨基酸置换就会对蛋白质耐热性变化起巨大作用，并且氨基酸残基侧链的大小、电荷等能使蛋白质结构松散的性质，会导致蛋白质耐热性下降。
- 袁有忠赵思汇周宗祥季朝能盛小禹毛裕民
- 关键词：耐热碱性磷酸酯酶蛋白质耐热机制
- 一种耐热碱性磷酸酯酶及其表达
- 本发明属生物工程技术领域，涉及一种耐热碱性磷酸酯酶。本发明提供了该耐热碱性磷酸酯酶的氨基酸序列，以及编码该氨基酸序列的DNA片段。本发明还包括克隆有该DNA片段或其一部分的表达载体和生产该重组酶的方法。同时还涉及利用该酶...
- 盛小禹毛裕民袁有忠季朝能周宗祥
- 文献传递
- 人类抗砷相关基因(hARRG)的克隆和表达被引量：15
- 2000年
- 目的 :克隆并表达人类抗砷基因 human arsenite resistance related gene(h ARRG)。 方法 :从人胎脑中获得 m RNA,建立 c DNA文库 ,通过大规模测序克隆出一人类新基因。 结果 :该基因全长 1170 bp,读框为 (ORF)72 3bp,经序列分析 ,与中国仓鼠抗砷基因 arsenite resistance gene (asr2 )同源性达 88%。根据 ORF设计引物 ,PCR扩增 ,扩增产物酶切后装入 PQE30质粒 ,诱导后获得 >40 %的高效表达。用镍亲和层析法纯化后纯蛋白回收率 >80 %。 结论 :首次在国内成功克隆并表达了人类抗砷相关基因 h ARRG。
- 杨磊王国荃应康黄瑾戴建凉袁有忠刘建平谢毅毛裕民
- 关键词：抗砷基因克隆砷中毒基因表达
- 人类新基因arsenite-resistance gene(asr2)的克隆和表达被引量：3
- 1999年
- 杨磊应康黄瑾袁有忠戴建凉谢毅
- 关键词：人类新基因遍在蛋白基因表达产物中国仓鼠
- 编码序列的(G+C)%与蛋白质的耐热性相关性分析被引量：7
- 1999年
- 运用计算机统计方法，对以木糖异构酶为主的几个蛋白质家族的核酸和氨基酸序列进行分析，发现密码于各位上的（G+C）％与编码序列的（G＋C）％成线性正相关。大多数氨基酸的含量与编码序列的（G＋C）％也存在相关性。按其相关性，将氨基酸分为正相关、负相关和不相关3类。对木糖异构酶氨基酸序列和酶的耐热性的统计发现，那些在统计学上显著的、可能提高蛋白质耐热性的氨基酸替换，往往伴随着编码序列中GC含量的上升。这提示了GC的水平上升，不仅能提高核酸的稳定性，而且有助于提高蛋白的耐热性。
- 朱蔚郑佐华袁有忠周宗祥毛裕民
- 关键词：木糖异构酶耐热性
- 一种耐热碱性磷酸酯酶及其表达
- 本发明属生物工程技术领域,涉及一种耐热碱性磷酸酯酶。本发明提供了该耐热碱性磷酸酯酶的氨基酸序列,以及编码该氨基酸序列的DNA片段。本发明还包括克隆有该DNA片段或其一部分的表达载体和生产该重组酶的方法。同时还涉及利用该酶...
- 盛小禹毛裕民袁有忠季朝能周宗祥
- 文献传递
- 耐热碱性磷酸酯酶基因的DNA序列分析被引量：4
- 1998年
- 从栖热菌中克隆到产耐热碱性磷酸酯酶（FD－TAP）基因并进行了DNA序列分析，结果表明此2．0kb的片段含有一个1056bp的开放阅读框，编码501个氨基酸的蛋白质，其N端有一26个氨基酸的信号肽．在起始密码子的上游5bp处有一个5＇－GGAGGT－3＇的SD序列．基因编码区的（G＋C）％为68．7％，第3位密码子（G＋C）％为92．7％．FD－TAP的氨基酸序列与大肠杆菌等生物的碱性磷酸酯酶氨基酸序列比较，相同性为27％，相似性为38％．中央β－折叠区及与活性中心相关的氨基酸残基高度保守．表明FD－TAP具有与大肠杆菌碱性磷酸酯酶相似的结构和作用机制．在相当于大肠杆菌碱性磷酸酯酶的His370至His412两个金属离子结合部位之间，FD－TAP有一72个氨基酸的插入片段，提示该插入片段与FD－TAP的高耐热性相关．
- 袁有忠季朝能佟石盛小禹毛裕民
- 关键词：基因DNA序列分析嗜热细菌
- 一种耐热碱性磷酸酯酶及其表达
- 本发明属生物工程技术领域,涉及一种耐热碱性磷酸酯酶。本发明提供了该耐热碱性磷酸酯酶的氨基酸序列,以及编码该氨基酸序列的DNA片段。本发明还包括克隆有该DNA片段或其一部分的表达载体和生产该重组酶的方法。同时还涉及利用该酶...
- 盛小禹毛裕民袁有忠季朝能周宗祥
- 文献传递
- 耐热碱性磷酸酯酶的研究
- 袁有忠
- 关键词：磷酸酯酶基因克隆
- 耐热碱性磷酸酯酶的基因克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：8
- 1998年
- 以pUC118质粒为载体,以E.coil TGl为受体,构建了产耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)的菌株Thermus sp.FD3041的染色体基因文库。在包含1.2万个转化子的文库中,90％的转化子插入有3～10kb的外源DNA片段。用菌落原位碱性磷酸酯酶显色法从文库中筛选到5个阳性克隆。对其中的1个克隆(pTAP362)所产的TAP进行了研究,发现克隆的TAP与出发菌株所产的TAP的热稳定性、最适反应温度和最适pH等性质都相同。通过做物理图谱和测定部分缺失的质粒的TAP活性,将TAP基因定位于2kb的BamHⅠ-HindⅢ DNA片段上。模拟PCR实验表明该酶可用于PCR扩增产物的检出。
- 袁有忠盛小禹吕鸿雁佟石毛裕民
- 关键词：基因克隆大肠杆菌
