赵金存
- 作品数：9 被引量：18H指数：1
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- 结核分枝杆菌LprG基因的克隆、表达
- 2007年
- 目的构建结核分枝杆菌LprG基因的融合表达载体,在大肠杆菌中进行表达,为研究其在结核病诊断中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出LprG基因,克隆到pEASY T1中,序列测定正确后,再亚克隆到融合表达载体PET28a(+)中,转化入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果获得结核分枝杆菌LprG蛋白,凝胶薄层扫描分析表达量在38%左右,主要以可溶性形式存在。结论获得了重组结核分枝杆菌LprG蛋白,为以后研究奠定了基础。
- 张欣张荣波赵金存
- 关键词：结核分枝杆菌克隆
- 结核分支杆菌LprG基因的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中重组表达MTB LprG基因,纯化回收,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法从MTB H37Rv基因组中PCR扩增出MTB LprG基因,克隆到pEASYT1载体中,经序列测定后,再亚克隆到表达载体pET28a(+)中,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Western-blot分析鉴定,采用Ni-NTA柱纯化LprG蛋白。结果扩增产物序列无突变,重组表达载体pET28a(+)-LprG酶切鉴定正确,LprG蛋白在E.coliBL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白的38%左右,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析在27kDa处见到目的蛋白条带,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度较高的该蛋白。结论构建了LprG基因的重组表达载体,获得了纯化的蛋白,为以后研究奠定了基础。
- 张欣张荣波赵金存
- 关键词：克隆纯化
- 神经纤毛蛋白-1的原核表达及兔抗小鼠神经纤毛蛋白-1抗体免疫学活性的研究
- 2007年
- 目的:在原核系统中分段表达神经纤毛蛋白-1(Nrp1);将纯化的蛋白免疫家兔后获得特异的抗体,并将其应用于检测组织和细胞中Nrp1分子的表达。方法:提取BALB/c胎鼠脑组织总RNA,通过RT-PCR分段扩增获得Nrp1基因片段,将PCR产物插入表达载体pET28a(+),获得含5个Nrp1基因片段的重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达并纯化;将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔获得针对目的蛋白的特异性多克隆抗体;利用Nrp1特异性多抗检测胎鼠脑组织和HeLa细胞中Nrp1的表达。结果:在原核系统中分段表达了Nrp1蛋白,通过Ni-NTA纯化了Nrp1蛋白片段;纯化的Nrp1蛋白免疫新西兰大白兔获得了具有免疫活性的多抗;兔抗小鼠Nrp1特异性多抗可用于检测组织、真核细胞中Nrp1的表达。结论:应用原核系统成功地表达了Nrp1蛋白,兔抗小鼠Nrp1特异性多抗可用于免疫学检测Nrp1分子的表达。
- 王文玲于洁薄洪贾汝静袁志宏黄前荣赵金存王炜高晓明
- 关键词：神经纤毛蛋白-1蛋白表达抗体免疫学
- SARS冠状病毒刺突蛋白与核衣壳蛋白
- 赵金存
- 关键词：SARS冠状病毒刺突蛋白核衣壳蛋白B细胞表位T细胞表位
- SARS冠状病毒刺突蛋白与核衣壳蛋白诱导免疫应答的研究
- 赵金存
- 关键词：严重急性呼吸系统综合征日冕形病毒免疫学
- SARS冠状病毒刺突蛋白450-650片段抗原性及受体结合能力的研究
- 目的:SARS冠状病毒(SARS-CoV)刺突(S)蛋白在病毒与细胞表面受体血管紧张素酶2(ACE2)的结合过程中起关键作用。其受体结合结构域(RBM)位于424-494位氨基酸,并折叠成两个反向β片层(β5和β6)。我...
- 赵金存袁志宏贾汝静赵振东徐晓军吕平张岩高晓明
- 关键词：SARS冠状病毒刺突蛋白B细胞表位
- 文献传递
- SARS-CoV N蛋白小鼠T细胞表位筛选及其免疫功能研究
- 目的:筛选三种不同遗传背景的小鼠识别的SARS-CoV N蛋白T细胞表位,并研究N蛋白特异性T细胞的性质及其T细胞表位多肽在细胞免疫和体液免疫中的作用。方法:首先合成涵盖N蛋白全长的41条多肽(相邻多肽前后有5个氨基酸残...
- 赵金存黄前荣王炜高晓明
- 关键词：T细胞表位TH1细胞免疫应答
- 文献传递
- SARS冠状病毒NS融合蛋白的重组表达纯化与免疫学性质分析(英文)被引量：1
- 2005年
- 刺突蛋白(S)和核心蛋白(N)是SARS冠状病毒的主要结构蛋白.在病毒细胞受体结合和病毒包装过程起重要作用.重组融合表达这2种蛋白具有较高的诊断学价值.对SARS病毒N蛋白和S蛋白氨基酸序列进行计算机分析,选择含有优势抗原表位的N蛋白1～227位氨基酸片段和S蛋白450～650位氨基酸片段,采用序列重叠延伸策略(sequenceoverlappingextension,SOE)构建编码N1227LinkerS450650新型融合蛋白的基因片段,导入原核表达载体,实现融合蛋白在大肠杆菌的高效表达.利用组氨酸标签亲和层析的方法纯化,获得高纯度的融合蛋白.对该融合蛋白的结构特征模拟分析的结果显示,其免疫化学性质均无显著改变.采用ELISA和Western印迹方法对其识别SARS冠状病毒特异性抗体的能力进行初步鉴定,显示该融合蛋白具有较好的抗原性和特异性,可有效特异性地检测恢复期SARS病人血清中抗SARS冠状病毒结构蛋白的抗体,可以作为SARS冠状病毒感染的辅助诊断手段.
- 贾汝静袁志宏赵金存王炜赵振东高晓明徐晓军
- 关键词：SARS冠状病毒组氨酸标签抗原性酶联免疫吸附实验
- 人CD4^+CD25^+调节性T细胞系的建立与功能分析被引量：16
- 2003年
- 目的 :建立可在体外长期培养的人CD4+CD2 5+调节性T细胞系并研究其免疫生物学特性。方法 :用流式分选的方法从健康人外周血淋巴细胞中得到CD4+CD2 5+T细胞 ,并对其进行体外长期培养、扩增 ;淋巴细胞转化实验分析其免疫抑制功能 ,流式细胞法分析其表型。结果 :经对人CD4+CD2 5+T细胞的长期培养扩增 ,获得具有免疫抑制功能的调节性T细胞系。该T细胞系对经TCR的刺激不敏感 ,且能抑制同一来源或同种异型CD4+CD2 5-T细胞的活化 ,大剂量IL 2可以逆转其抑制功能。长期培养的CD4+CD2 5+T细胞 ,膜表面CD2 5和CTLA 4分子持续高表达 ,而CD4+CD2 5-T细胞CD2 5和CTLA 4分子的表达呈周期性变化。结论 :将CD4+CD2 5+T细胞体外扩增培养成系 ,其功能和表型与同一来源的CD4+CD2
- 戴振鹏赵金存张岩白小薇高晓明
- 关键词：功能分析CD4^+CD25^+T细胞免疫调节CTLA-4
