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一种大量制备鼠源性多克隆抗体的方法被引量：6: 2006年; 用人绒毛膜促性腺激素或人免疫球蛋白作为抗原,经小剂量、多次免疫Balb/c鼠,并于其腹腔内注射NS-1骨髓瘤细胞,制备了大量高效价的鼠源性多克隆抗体腹水.该实验为快速制备大量鼠源性多克隆抗体提供了一种新的方法.; 吕琦邓双胜马岚; 关键词：多克隆抗体腹水人绒毛膜促性腺激素人免疫球蛋白

血清透明质酸HA定量检测的新方法: 2000年; 目的建立一种可用于血清透明质酸HA定量检测的新方法.方法采用透明质酸HA纯品按常规方法免疫兔子,经心脏采血和亲和纯化获得抗HA多抗.采用常规单抗杂交瘤技术免疫小鼠,经细胞融合、阳性细胞株筛选及单克隆化,最终获取阳性HA单抗细胞株.采用腹水法制取HA单抗,蛋白A亲和株纯化抗体.利用上述自制的高质量的抗HA单抗和多抗,建成HA定量检测双抗体夹心酶联免疫检测法:以HA单抗包被酶标板,封闭洗涤后加入HA纯品及待测样品,放置洗涤后加入HA多抗,放置洗涤后再依次加入酶标二抗羊抗免IgG-HRP和底物OPD显色读数.并用此新方法来检测HA纯品及其不同期肝纤维化大鼠血清中HA的浓度.结果经心脏采血和纯化后,获得80mL抗HA多抗血清,其抗体的含量为14.35g/L,亲和常数为1×10-7mol-1,效价达1×10-7.共做了三批细胞融合,三批的融合率分别为:18.5%(71/384),22.1%(85/384),60.2%(231/384),总融合率为33.6%(387/1152).各批的阳性率分别为:21.1%(15/71),23.5%(20/85),12.1%(28/231),总阳性率为16.3%(63/387).从这些阳性杂交瘤细胞株中共选出了6株阳性较高的,克隆了其中两株,2C3F2,2C3B8.并制备了2C3F2的腹水.经纯化后,其含量、效价和亲和常数分别为:7.88%,1×10-5和1.97×10-6mo1-1.以效价为10-3HA单抗包被酶标软板,并以加入10-3浓度的HA多抗来组配建立HA定量检测法时,其光吸收值A492nm最高.用此组配来检测HA纯品时,其检测精度至少在1ng,其灵敏度与以往检测的方法相比相同或相近.用此法来检测大鼠肝硬变病程中血清HA的浓度变化,结果表明在第1,3,6,9及12wk时的血清HA含量分别为0.21μg@L-1,7.98μg@L-1,20.10μg@L-1,229.73μg@L-1和324.74μg@L-1.结论利用只针对HA的高特异高敏感性抗HA单抗和多抗建立起来的双抗体夹心法比起现有的HA放免或酶免试剂盒更为简便、经济、快速和灵敏准确.若经进一步完善,是有可能发展成为一种用于血清HA; 马岚赵力生李春华邓双胜王泽华袁航; 关键词：透明质酸肝硬化抗体免疫酶技术

大鼠肝硬变病程中血清透明质酸的动态变化被引量：4: 2000年; 目的通过系统测定大鼠肝硬变病程中血清透明质酸 HA 的动态变化,来探讨其用于肝纤维化的测试和监控的临床价值.方法利用 CCl_4损伤 SD 大鼠造成肝硬变模型(n=6),综合分析不同时间取材的实验组和正常对照组(n=6)之间血清肝纤维化指标-血清 HA 浓度、肝组织病理改变以及 HA 在肝组织中的免疫组织化学定位.结果在大鼠肝硬变的病变发展过程中,血清 HA 含量在3(7.98 ng/mL),6(20.10 ng/mL),9(229.73 ng/mL),12(324.74 ng/mL)周时,均较正常组(0周:0.21 ng/mL)有极显著升高(P<0.01),其中9 wk 和12 wk 的血清 HA 含量比正常对照组分别高出1094和1546倍.而在0→3 wk、3→6 wk、6→9wk、9→12wk 时,血清 HA 平均增加的倍数依次为38,2.5,11.4和1.4倍.同时,肝组织病理学结果(HE 染色)显示,CCl_4诱发的肝纤维化大鼠在9 wk 以前无明显变化;9 wk～12 wk 时,与正常肝组织相比,有明显肝细胞坏死,同时伴有肝细胞质分布不均匀程度的加深及红细胞增多成团现象.此外,12 wk 组还出现明显的肝细胞气球样变性现象及局部炎症细胞浸润.同期用免疫组化法观察 HA 在不同期肝硬变大鼠肝内的分布,镜检发现只在12 wk 有少量 HA 的特异性分布.结论动态观察血清 HA 数值可用于早期肝纤维化的预测和肝纤维化的分期.; 马岚赵力生李春华吕琦李仁宽邓双胜; 关键词：透明质酸四氯化碳免疫组织化学

表达肿瘤抗原HPV-58E7的HLA-A^＊0201阳性宫颈癌细胞模型的构建和鉴定: 2015年; 为建立内源性表达58型人乳头瘤病毒(Huamn papillomavirus type 58,HPV-58)重要癌抗原E7蛋白的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型.以HPV-58全基因组为模板,采用PCR法扩增E7蛋白的编码基因,构建真核表达载体p EGFP-N2-HPV58E7;转化大肠杆菌DH5α,通过DNA测序鉴定质粒载体;经除内毒素纯化后,将大量制备的重组质粒瞬时转染293T细胞,采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法研究重组质粒在人源细胞中的表达情况;最后,选择HPV检出阴性的HLA-A*0201阳性人宫颈癌C33A细胞株为宿主细胞,采用脂质体转染、G418抗性加压筛选和细胞克隆化培养技术,建立能够稳定表达HPV-58 E7的恒定转染细胞株.采用RT-PCR、Western-blot和细胞增殖测定等方法从转录、翻译和表型等3个层次对所建细胞株进行鉴定研究.研究结果显示:克隆制备了HPV-58 E7蛋白的编码基因;构建获得了能够在人源细胞中表达HPV58E7-EGFP融合蛋白的真核表达质粒;并成功建立了能够稳定表达HPV-58 E7的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型;核酸和蛋白水平的鉴定结果表明所建模型细胞能够表达HPV-58 E7癌抗原,宿主细胞本身表达的Ⅰ类组织相容性抗原HLA-A*0201有望通过内源性抗原加工途径将E7抗原的细胞毒性T细胞(Cytotoxic lyphocyte,CTL)表位提呈到细胞表面;另外,细胞增殖试验结果亦表明该细胞模型体现出E7蛋白显著的诱导细胞增殖的生物学特征.总之,能够稳定表达HPV-58 E7癌蛋白的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型的建立为后续即将展开的以HPV-58 E7为靶标的宫颈癌治疗性疫苗和药物的寻找和研究奠定基础.; 林洁李旋吕琦童亮张士煜邓双胜

P53基因诱导性表达质粒的构建及人工控制表达的初步研究: 该研究建立的转p53基因的两个细胞株以及p53基因对肿瘤细胞生长抑制的可逆性研究,对深入研究p53基因的生理功能和克隆p53基因的下游基因都有重要的意义.该文还就作者在质粒DNA重组中建立的两项新的技术改进即不用人工合成...; 邓双胜; 关键词：P53基因细胞生长生理功能

改善大分子质粒DNA重组效率的新方法被引量：20: 1997年; 采用两次连接法对一个质粒载体为 7 65kb ,插入子为 1 4 7kb的片段进行重组连接 ,使连接效率大大提高 .此方法对于大分子的质粒DNA重组是非常有效的 .; 谭德勇邓双胜孟玲昝瑞光; 关键词：DNA 质粒DNA

磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2: 2007年; 为建立磺胺类药物残留的免疫化学分析方法，利用磺胺甲基嘧啶（SM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2）分子结构中的芳香氨基，采用重氮反应和戊二醛法将其与载体蛋白（牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白）交联制备抗原，最终获得5株抗SM和18株抗SM2杂交瘤细胞株．对杂交瘤细胞株的核型、抗体的亚类和轻链型、抗体的异相包被ELISA反应性以及抗体的竞争反应性和交叉反应性进行了分析和评价．其中SM抗体11c8结合SM的竞争抑制质量浓度Ic50为14．1弘∥L，与类似物SD的交叉反应性接近20％，但与其他类似物低于10％．SM2抗体中的6株抗体的竞争抑制质量浓度IC50在38．8—70．0μL范围内，287，4D5，13c9，14c5和16c2抗体与类似物SM的交叉反应性达到73．5％。132．9％，而15D10抗体与SM的交叉反应性低于5％．因此，本研究所获得的磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶抗体，可用于SM和SM2残留的免疫分析方法研究和应用．; 吕琦王泽华邓双胜马岚; 关键词：磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体磺胺类

不用接头进行异末端DNA重组的方法: 1996年; 用过渡载体通过两次重组进行不同粘性末端之间的ＤＮＡ重组．该方法不需要替换接头，从而省去昂贵的试剂和平末端连接这种较难的操作，既经济，简单又有效，易于操作．; 谭德勇邓双胜; 关键词：DNA重组

血清透明质酸HA定量检测的新方法: 2001年; 血清HA值是反映肝纤维化的重要指标,定量测定血清HA对了解肝纤维化程度,转归均有重要价值.目前检测HA多采用以HA结合蛋白即HABP为主要试剂的放免药盒进行测定.但由于HABP的提取、纯化和标记等过程均很复杂,稳定性也差,使得试剂盒的稳定性差,价格也偏高.我们利用已有的抗HA单抗和多抗建立了一种新的HA定量检测双抗体夹心法,避免了上述方法的不足,其结果如下.; 马岚赵力生李春华邓双胜王泽华袁航; 关键词：透明质酸血液血清学单克隆抗体肝硬化酶联免疫吸附测定

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