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细胞骨架破坏对体外培养兔软骨细胞基质代谢分泌的影响被引量：1: 2012年; 目的观察微丝、微管和中间纤维3种细胞骨架（CSK）成分破坏对体外培养关节软骨细胞基质代谢的影响。方法取2个月龄新西兰大白兔10只，取双膝关节软骨行软骨细胞培养，随机分为4组，即正常对照组、微丝破坏组（加入0．01mg／L细胞松弛素一D破坏肌动蛋白）、微管破坏组（加入0．4mg／L秋水仙素破坏微管蛋白）、中间纤维破坏组（加入175mg／L丙烯酰胺破坏波形蛋白）。培养3d后，各组取部分细胞消化并爬片，行免疫荧光染色及共聚焦显微镜荧光值半定量检测，观察细胞微丝蛋白、微管蛋白和波形蛋白的形态及含量变化。并于培养第3、6、9天取细胞上清液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和阿尔新蓝法检测各组上清液中Ⅱ型胶原和糖胺多糖（GAG）的含量。结果微丝、微管、中间纤维破坏组与对照组比较，荧光度值分别从83．70、82．82、77．93降至60．45、57．86、55．56（P〈0．05，n=30）。微管破坏组和中间纤维破坏组在第3、6、9天上清液中的Ⅱ型胶原和GAG含量均明显低于对照组（P〈0．05），而微丝破坏组与对照组在第3、6、9天上清液中的Ⅱ型胶原和GAG含量差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论预设浓度的CSK破坏剂可以破坏软骨细胞相应的CSK成分，且微管和中间纤维破坏组软骨细胞基质代谢水平显著下降，而微丝破坏组对软骨细胞基质代谢的水平无明显影响。; 曹晓明杨朝晖段王平郭恒王磊卫小春; 关键词：软骨细胞细胞骨架

微管蛋白破坏对软骨细胞代谢功能的影响: 目的：探讨微管蛋白破坏对体外关节软骨细胞代谢功能的影响。　　方法：2月龄新西兰大白兔8只,处死后取双膝关节全层软骨,采用常规0.4％Pronase酶和0.025％Ⅱ型胶原酶依次消化为软骨细胞培养3天贴壁后,分为对照组...; 郭恒; 关键词：微管蛋白软骨细胞蛋白多糖 MMP-13; 文献传递

细胞骨架中间纤维破坏对体外软骨细胞代谢功能的影响被引量：4: 2011年; 目的探讨破坏中间纤维对体外软骨细胞代谢功能的影响。方法 2个月龄新西兰大白兔双膝关节全层软骨消化为原代软骨细胞,培养3d贴壁后,分为对照组和实验组,对照组用原代培养基继续培养,实验组在原代培养基中加入中间纤维破坏剂丙烯酰胺(终浓度为2.5mmol/L)。加药后第1、2天利用磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞早期凋亡率,第6天用细胞爬片苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态的改变,第3、6、9天用实时定量聚合酶链反应法测定软骨细胞Ⅱ型胶原、糖胺多糖以及基质金属蛋白酶(MMP)-13mRNA的表达量。结果实验组在加药后第2天软骨细胞的早期凋亡率高于对照组(P<0.05);和对照组相比较,实验组在加药后第6天HE染色观察到细胞形态不规则,呈多角形,胞核深染且分裂像增多,细胞基质减少;在加药后第3、6、9天检测到实验组Ⅱ型胶原和糖胺多糖的mRNA表达相对于对照组下降(P<0.05);在加药后第6、9天MMP-13mRNA表达显著增加(P<0.01)。结论中间纤维破坏后可以诱导软骨细胞的早期凋亡,致Ⅱ型胶原和糖胺多糖产生减少,而炎性因子MMP-13表达增多,可能是骨关节炎产生的一个重要环节。; 王磊郭恒段王平卫小春; 关键词：软骨细胞基质金属蛋白酶类细胞骨架

微管蛋白破坏对软骨细胞代谢功能的影响被引量：2: 2011年; 目的探讨微管蛋白破坏对体外关节软骨细胞代谢功能的影响.方法 2月龄新西兰白兔8只,处死后取双膝关节全层软骨,采用常规0.4%链酶菌蛋白酶和0.025%Ⅱ型胶原酶依次消化为软骨细胞培养3 d贴壁后,分为对照组和实验组,对照组继续用原代培养基（90%DMEM/F12±10%胎牛血清）培养,实验组在原代培养基中加入微管蛋白破坏剂秋水仙素（终浓度为0.1μmol/L）.加药后第1、2天用Annexin-Ⅴ/PI流式细胞术检测软骨细胞早期凋亡率,加药后第6天细胞爬片HE染色观察细胞形态的改变,加药后第3、6、9天取细胞用实时定量荧光反转录聚合酶链式反应法测定软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖以及MMP-13 mRNA的表达量,同时在加药后第3、6、9天取细胞上清液,用ELISA法和阿尔新蓝法检测各组上清液中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量.结果实验组第2天软骨细胞早期凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）;与对照组比较,实验组第6天软骨细胞呈不规则多角形,胞核深染且分裂象增多,细胞基质减少,实验组第3、6、9天软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达量较对照组均明显降低（P＜0.05）,第6、9天实验组软骨细胞MMP-13mRNA表达较对照组明显增高（P＜0.01）,同时实验组第3、6、9天上清液中的Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量均明显低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）.结论微管蛋白破坏可致软骨细胞早期凋亡,导致体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖等基质成分合成减少,炎性因子MMP-13的表达增多.; 郭恒段王平李琦曹晓明王磊卫小春; 关键词：微管蛋白软骨细胞胶原

膝骨关节炎患者体重指数与下肢力线关系的病例对照研究被引量：18: 2011年; 目的:探讨膝骨关节炎患者体重指数与双下肢力线的关系。方法:2008年7月至2010年6月,收集因膝骨关节炎行全膝关节置换术的膝内翻患者78例,男17例,女61例;年龄41～85岁,平均68.1岁。体重指数采用普通成年人体重指数(body mass index,BMI)的分类标准分为3组:正常组,BMI<24.0,男3例,女11例,14例28膝,平均年龄(69.5±4.7)岁;超重组,24.0≤BMI<28.0,男4例,女25例,共29例58膝,平均年龄(66.4±7.9)岁;肥胖组,BMI≥28.0,男10例,女25例,共35例70膝,平均年龄(69.1±8.3)岁。采用躯体X线测量系统测量平卧位和负重位的双下肢力线角度。结果:正常组与超重组患者,平卧位及负重位下肢力线膝内翻角度差异均无统计学意义。肥胖组平卧位膝内翻角度与其他两组差异无统计学意义,负重位膝内翻角度与其他两组差异有统计学意义。体重指数与平卧位和负重位膝内翻角无明显相关性。3组负重位膝内翻角度均大于平卧位。结论:肥胖骨关节炎患者负重位时膝内翻角度增大,提示肥胖是导致下肢力线内翻角度增大的一个重要因素。; 李琦段王平曹晓明郭恒王磊卫小春; 关键词：骨关节炎体重病例对照研究

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郭恒

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