陈居杲
- 作品数：7 被引量：8H指数：1
- 供职机构：河南大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省杰出人才创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TRAIL-R2的表达与肿瘤诊断治疗及预后相关性研究
- 马远方白慧玲张军李淑莲刘广超杜耀武都景芳刘英杰刘峰涛陈居杲赵昆朋
- 应用领域和技术原理通过基因-r-程技术制备了TRAIL-R2，即死亡受体5(DR5)，并利用它通过单克隆抗体技术制备了抗DR5的单抗，并且利用获得的识别DR5不同表位的两株单抗制备了检测DR5的双抗体夹心ELISA试剂盒...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤
- mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡的外源性机制
- 2009年
- 目的:探讨抗人死亡受体5(DR5)单克隆功能抗体(mDRA-6)对人白血病Jurkat细胞诱导凋亡的外源性机制。方法:用显微镜观察mDRA-6作用后的Jurkat细胞形态学变化,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析技术对Jurkat细胞的凋亡进行定量分析;利用免疫印迹技术检测凋亡细胞的Caspase 10、Caspase 9、Caspase8、Caspase 7、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达及活化情况。结果:mDRA-6在5 mg/L浓度作用Jurkat细胞30min时就出现典型的细胞凋亡形态改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测显示,Jurkat细胞在30 min、60min1、20 min的凋亡率分别为30.20%、69.03%、79.55%。免疫印迹技术检测显示Caspase 9、Caspase 8、Caspase7、Caspase 3均呈现活化片断的表达,而Caspase 10无变化。结论:mDRA-6可通过细胞膜表面死亡受体信号传导途径诱导Jurkat细胞的凋亡,本研究为mDRA-6的人源化改造及后续的实验研究打下了基础。
- 杜耀武刘峰涛陈居杲赵昆朋马远方
- 关键词：死亡受体5单克隆抗体JURKAT细胞细胞凋亡
- DR5胞外段基因的表达及功能初步鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白。方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEM(-T Easy载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30 a中,在E.coliBL21(DE3)实现蛋白表达。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。ELISA法分析其与抗DR5单克隆抗体(mAb)结合能力。结果:克隆到人DR5基因的胞外段基因,测序结果和报道的一致;构建了人DR5胞外段基因的原核表达载体并实现在E.coliBL21(DE3)中大量表达;SDS-PAGE表明所表达蛋白与预期蛋白的相对分子质量(Mr)一致;Western blot及ELISA的结果表明该蛋白能与抗DR5抗体反应,竞争阻断试验表明DR5胞外段可阻断TRAIL对Jurkat细胞生长的抑制。结论:成功地制备了具有生物活性的DR5胞外区,为后续研究打下了基础。
- 陈居杲王玉刚赵昆朋谷欣黎燕马远方沈倍奋
- 关键词：RT-PCR原核表达
- TRAIL-R2的表达与肿瘤诊断、治疗及预后相关性研究
- 马远方白慧玲张军李淑莲刘广超杜耀武都景芳刘英杰刘峰涛陈居杲
- 一、所属领域：医药高新技术。二、主要内容： 1.通过基因工程技术制备TRAIL-R2(又称死亡受体5，简称DR5)的胞外段蛋白，即可溶性DR5；2.通过单克隆抗体技术制备了抗TRAIL-R2的单抗：两种特异识别TRAIL...
- 关键词：
- 关键词：免疫细胞化学方法试剂盒肿瘤诊断
- 抗人DR5功能性抗体mDRA-6诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的机制被引量：6
- 2009年
- 背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)及其死亡受体的功能性单克隆抗体具有杀伤肿瘤细胞的活性。我们研制了抗人死亡受体5(death receptor,DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6),本研究对其诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase分子机制进行初步探讨。方法:mDRA-6作用后,琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测细胞存活情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡情况;观察Caspase-10、-9、-8、-3等的抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白Caspase-10、-9、-8、-3,多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、BH3相关结构域死亡激动剂(BH3interactingdomain death agonist,Bid)、短缩的Bid(truncated Bid,tBid)、细胞色素C(cytochrome c,Cyto C)等活化裂解的情况。结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的诱导凋亡作用且呈量-效关系。2.0μg/mL mDRA-6作用Jurkat细胞0.25h、0.5h、1h、2h,其凋亡率分别为16.2%、28.3%、69.2%、78.2%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA-6诱导的细胞凋亡,抑制率为77.9%,Caspase-3和Caspase-9抑制剂作用的抑制率分别为54.2%、8.7%,而Caspase-10的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、-3、-9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,PARP的降解片段亦增加,Bid激活降解为tbid,Cyto C大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现。结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是通过激活Caspase路径和线粒体路径来完成的。
- 杜耀武刘广超王靖赵粤萍李淑莲陈居杲蒋祺蔡静马远方
- 关键词：死亡受体5JURKAT细胞细胞凋亡
- 人源TRAIL胞外段基因的克隆、表达与功能的初步检测被引量：1
- 2007年
- 目的 获得人源TRAIL胞外段结构域在大肠杆菌中可溶性表达，并初步鉴定其功能。方法 RT-PCR法从人外周血单个核细胞中扩增TRAIL胞外段基因，克隆入pGEM-T-Easy载体，DNA序列测定鉴定正确性。为了便于纯化目的蛋白，将其克隆入原核表达载体pET-30a，并在其氨基端加上组氨酸标签。采用E．coliBL21（DE3）表达，Ni亲和柱分离纯化目的蛋白。SDS-PAGE和Westernblot鉴定原核表达产物。MTT法、PI染色法及瑞氏．姬姆萨染色法观察TRAILHis蛋白的生物学活性。结果 所表达目的蛋白相对分子质量（Mr）与预期蛋白Mc相一致，该蛋白分别可以与抗TRAIL多克隆抗体及抗组氨酸标签抗体反应，并可抑制人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的增殖和诱导Jurkat细胞凋亡。结论 获得了具有生物学活性的TRAIL蛋白，为对其生物学功能及肿瘤治疗的进一步研究奠定了基础。
- 赵昆朋王玉刚陈居杲黎燕马远方沈倍奋
- 关键词：TRAIL原核表达免疫印迹
- 人DR5胞外段基因的克隆、表达及其单克隆抗体的制备
- 背景
死亡受体5/(death receptor , DR5/)是肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体/(tumor necrosis factor related apoptosis inducing li...
- 陈居杲
- 关键词：DR5凋亡单克隆抗体
- 文献传递
