顾卫娟
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南京医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 可诱导型睾丸特异性启动子Cre工具鼠的建立及HRB2细胞功能研究
- 目的:构建睾丸支持细胞和精原细胞特异表达的2种可诱导型Cre工具鼠 方法:通过设计合成引物PCR扩增出AMH和STRA8的启动子,用EcoR I和Spe I酶切后连接到同样用EcoR I和Spe I酶切的载体PCAG-E...
- 顾卫娟
- 关键词：CRE重组酶转基因小鼠显微注射蛋白相互作用
- 文献传递
- HRB2基因对细胞增值影响的研究
- 2010年
- 目的:研究HRB2基因对细胞增值的影响。方法:设计4对HRB2 RNA寡核苷酸片段,经退火制备的双链DNA oligo,连接经双酶切的线性化PLKO.1-TRC-SP6载体上,转化后经PCR鉴定,阳性克隆测序,质粒抽提,应用Lipofectamine2000将质粒导入293T细胞,包装成慢病毒,再感染靶细胞293T,用嘌呤霉素筛选15天后,收集细胞抽提RNA,实时定量RT-PCR检测HRB2 mRNA水平,评价干扰效果。Western免疫印迹进一步确认有效作用靶点。通过划痕愈合实验和绘制生长曲线研究HRB2基因对细胞增值的影响。结果:载体构建成功。包装成慢病毒感染293T细胞系,发现:2号和4号靶点敲减HRB2基因效率达84%和88%。差别有统计学意义。通过western进一步证实了2号和4号是抑制HRB2的有效作用靶点。划痕愈合实验和绘制生长曲线的结果显示2号和4号靶点细胞株细胞生长受到抑制,并且4号较2号稍明显。结论:成功构建并筛选了携带有人HRB2基因的shRNA慢病毒载体及有效靶点,研究发现HRB2基因对细胞增值产生了影响,这为进一步研究HRB2的生物学功能提供了实验平台。
- 顾卫娟毕焕京李建民
- 关键词：RNA干扰慢病毒细胞增值
