顾征
- 作品数:4 被引量:17H指数:2
- 供职机构:中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 抗人膀胱癌单克隆抗体重、轻链可变区基因体外扩增、克隆及序列分析被引量:2
- 1996年
- 应用人工合成的两套引物,从分泌抗人膀胱癌特异性单抗的杂交瘤细胞BDI-1中提取总DNA。以之作模板,经PCR法扩增出重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入PUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。结果表明:重链可变区基因全长366bp,编码122个氨基酸,属于小鼠重链可变区的SubgroupII,由种系基因中的VH与D基因的Dsp2.2及JH4基因重排而成;轻链可变区基因全长324bp,编码108个氨基酸,属于小鼠轻链可变区的SubgroupIV,由种系基因中的Vκ与Jκ4基因重排而成。与已发表的抗体可变区基因序列比较。
- 萧飒俞莉章顾征刘喜富郭应禄顾方六王勇陈艾宋海燕林晴黄华梁
- 关键词:基因表达调节单克隆抗体轻链
- 抗人CD3单抗轻、重链可变区基因的克隆及序列分析被引量:2
- 1996年
- 根据抗体基因可变区两端保守序列FR1和FR4,设计并化学合成轻重链PCR扩增引物。从体外培养细胞UCHT1中提取总RNA,反转录成cDNA,以cDNA为模板经PCR扩增轻,重链可变区基因片段。将扩增片段克隆至pUC19质粒,筛选阳性克隆并测序,序列分析结果为重链366pb,编码122个氨基酸,轻链327bp。
- 萧飒顾征王勇陈艾林晴张卫国蒋欣黄华梁沈倍奋
- 关键词:PCR
- 抗人CD3单链抗体与改形单域抗体的表达被引量:9
- 1996年
- 设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因V_H和V_K,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因V_H,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆V_H基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-V_H改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30%左右.
- 刘喜富萧飒顾征王勇陈艾林晴张卫国黄华梁孙健陈润生沈倍奋陈兴
- 关键词:CD3单链抗体分子设计基因表达
- 抗人肺腺癌单克隆抗体重、轻链可变区基因的分离克隆和序列测定被引量:8
- 1996年
- 根据鼠免疫球蛋白重。轻链可变区基因FR1和FR4的序列保守性,化学合成了适于体外扩增Ig重、轻链可变区基因(V_H和V_L)的数对引物。以分泌抗人肺腺癌单抗的杂交瘤细胞株WLA-2C4的基因组DNA为模板,PCR扩增V_H和V_L基因,分别克隆人pUC19载体。转化子经蓝、白斑筛选,酶切鉴定,双脱氧测序证实确为鼠单抗可变区基因,其中V_H基因全长为348bp,编码116aa,属重链ⅡB亚类;V_L基因全长318bp,编码106aa,属K轻链Ⅵ亚类。
- 王勇刘喜富顾征萧飒陈艾林晴黄华梁王登顺李新元
- 关键词:单克隆抗体可变区基因克隆