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马卫列: 作品数：29 被引量：74H指数：5; 供职机构：广东医科大学更多>>; 发文基金：东莞市高等院校科研机构科技计划项目广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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人β-COP-shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测被引量：1: 2015年; 目的采用常规转染试剂难以将人β-COP-shRNA转染至THP-1细胞。构建人β-COP特异性的shRNA慢病毒载体,并测定其对靶基因β-COP的抑制效应。方法设计合成针对人β-COP基因靶点特异的4对shRNA寡聚单链DNA,插入p GMLV-SC1载体中,构建慢病毒重组载体。将重组载体和包装质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒并测定滴度。用慢病毒感染THP-1细胞,定量PCR和Western blot检测干扰载体对β-COP基因的干扰效果。结果测序证实,β-COP基因的shRNA寡聚核苷酸序列已插入慢病毒载体,转染HEK 293T细胞,经包装得到4种慢病毒,病毒滴度为1×109TU/m L。定量PCR分析显示,4种β-COP-shRNA慢病毒感染的THP-1细胞中β-COP基因mRNA表达量分别为0.831±0.065、0.675±0.079、0.260±0.050、0.497±0.067,较对照(1.000±0.000)明显升高(P<0.01);其抑制率分别为16.9%、32.5%、74.0%和50.3%。Western blot结果表明,4种干扰载体均可抑制β-COP蛋白表达,其中β-COP-shRNA 3的沉默效率为76.4%。结论成功构建了人β-COP-shRNA干扰载体,证实了干扰载体对靶基因有较好的沉默效果。; 马卫列丁航李观强肖娟张志珍; 关键词：脂质代谢

氧化芍药苷对泡沫细胞胆固醇流出的影响被引量：9: 2017年; 目的分析氧化芍药苷对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法 THP-1细胞加入160 nmol/L佛波酯(PMA)24 h,再加入50μg/ml乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)建立泡沫细胞模型,CCK-8法测定氧化芍药苷的细胞毒性,同位素标记法测定各处理组泡沫细胞胆固醇流出率。共聚焦显微镜观察泡沫细胞内脂肪分化相关蛋白(ADFP)表达变化,Western blot分析泡沫细胞中ADFP、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白表达变化。结果成功建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型。氧化芍药苷毒性分析表明,质量浓度在200.0μg/ml以下无细胞毒性。150.0μg/ml与200.0μg/ml氧化芍药苷处理泡沫细胞,胆固醇流出率分别为(10.317±0.508)%与(11.265±0.713)%,与apo A-1组相比,差异有统计学意义(P<0.05),均高于apo A-1组。氧化芍药苷处理的泡沫细胞内ADFP荧光明显减弱。Western blot分析泡沫细胞ADFP表达量降低28%。氧化芍药苷处理组PPARα表达量增加51%,ABCA1表达量增加45%。结论实验表明氧化芍药苷可通过上调PPARα增加ABCA1表达,进而促进泡沫细胞胆固醇流出。; 唐菀泽马卫列丁航向乐张志珍; 关键词：THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出

Ykt6结构与膜融合功能研究进展被引量：1: 2015年; 真核细胞含有复杂的内膜系统,细胞内的物质交换通过囊泡运输方式来完成。囊泡运输主要包括运输囊泡的出芽、定向移动、锚定和膜融合等过程,SNAREs蛋白在膜融合过程中发挥重要作用。SNAREs分为定位于运输囊泡上的v-SNARE和定位于靶位膜上的t-SNARE,二者相互作用形成SNARE复合体,促进膜融合的发生。Ykt6是真核生物高度保守的一种SNAREs蛋白,由N-末端longin结构域、SNARE core结构域和C-末端CAAX盒组成。细胞质中longin结构域、SNARE core结构域和脂质相互作用具有多种构象。棕榈酰化的Ykt6由无活性的自抑构象转变为有活性的开放构象参与囊泡转运过程,在膜融合和囊泡融合中起着重要作用。本文主要介绍近年来有关SNARE Ykt6的结构与功能研究进展。; 肖娟马卫列丁航张志珍; 关键词：SNARES 囊泡转运膜融合

HPLC法测定apoA-1介导的泡沫细胞胆固醇流出的实验研究被引量：4: 2015年; 目的建立用高效液相色谱(HPLC)法测定载脂蛋白A-1(apoA-1)介导的泡沫细胞内胆固醇流出率的实验方法。方法人单核细胞THP-1用160nmol/L佛波酯(PMA)诱导24h分化为贴壁巨噬细胞(PMA组),再用50μg/mL乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)处理48h,诱导巨噬细胞变成泡沫细胞(ac-LDL组);加入含apoA-1的1640培养基培养24h(apoA-1组)。油红O染色和HPLC法测定细胞内胆固醇水平,鉴定巨噬细胞源性泡沫细胞模型。采用HPLC分析和液体闪烁计数法测定apoA-1介导的泡沫细胞内胆固醇流出率。结果 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经油红O染色后,细胞内可明显观察到大量红色脂滴存在。胆固醇水平测定显示,ac-LDL组内游离胆固醇、总胆固醇和胆固醇酯的水平明显高于PMA组(P<0.01)。ac-LDL处理细胞48h后,ac-LDL组内总胆固醇水平为80.25μg/mg细胞蛋白,胆固醇酯水平为47.65μg/mg细胞蛋白,占总胆固醇的59.38%,与PMA组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。HPLC分析和液体闪烁计数法结果表明,apoA-1介导泡沫细胞内apoA-1组胆固醇流出率分别为5.63%和7.08%(P<0.01)。结论本研究成功建立了酶促反应结合HPLC测定泡沫细胞内胆固醇流出的方法,为后续研究细胞脂质代谢提供了实验基础。; 马卫列龚晓华李观强丁航兰柳波陈小谊张志珍; 关键词：泡沫细胞载脂蛋白A-1 胆固醇流出

磷酸二酯酶7及其抑制剂被引量：7: 2012年; 磷酸二酯酶7(phosphodiesterase7,PDE7)作为体内特异性水解第二信使环腺苷一磷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的一类蛋白水解酶,通过调控组织细胞内cAMP水平及机体信号传导活动,参与了体内多种疾病的发生发展过程.PDE7主要分布于前炎症细胞及免疫细胞.最新研究表明,PDE7作为一个新的潜在的抗动脉粥样硬化及抗炎症免疫类药物的新靶点,其抑制剂可能在研究及治疗动脉粥样硬化及慢性阻塞性肺病等免疫炎症类疾病方面具有重要意义.本文简述PDE7基因结构、生物学功能以及其抑制剂研究,并重点就其与疾病之间联系做一综述.; 饶勇龚晓华马卫列张志珍

蒙古长爪沙鼠颌下静脉丛真空采血法探讨被引量：3: 2014年; 目的探讨蒙古长爪沙鼠(Mongolian gerbil)颌下静脉丛真空采血的技术与方法,提高蒙古长爪沙鼠实验的成功率。方法选取40只蒙古长爪沙鼠,麻醉后将静脉输液针刺入颌下静脉丛血管取血。结果成功获得沙鼠静脉血,每只沙鼠的采血量可达0.3-0.6 m L。结论此方法可多次重复采血,血液标本质量高,创伤小,是一种简便、安全、采血量多的采血方法。; 金丹丹张劲松丁航兰柳波张志珍马卫列

半边旗活性成分5F对MCF-7细胞增殖的影响: 兰柳波汪宗桂马卫列

三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM的侵袭、转移及MTA1、nm23H_1基因表达的影响被引量：3: 2006年; 目的：研究三羟异黄酮（genistein）对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法：以台盼蓝拒染法检测genistein对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响；用Transwell小室法检测genistein对HO-8910PM细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响；RT—PCR分析MTAI及nm23H1 mRNA的表达。结果：50μmol／L的genistein作用细胞6h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和趋化运动能力，抑制率分别为（21．08±3．12）％和（17．15±2．01）％；25～100μmol／Lgenistein作用HO-8910PM细胞24h后，明显下调MTA1 mRNA的表达，上调nm23H1 mRNA表达水平。结论：genistein能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910 PM的侵袭和运动能力。genistein抗肿瘤侵袭转移的作用机制与MTA1 mRNA的表达下调和nm23H1 mRNA表达上调有关。; 马卫列丁航符伟玉周克元; 关键词：异黄酮卵巢癌 MTA1 NM23H1

人胰高血糖素样肽-1类似物基因治疗对糖尿病大鼠机体代谢的影响被引量：2: 2010年; 目的观察人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)对糖尿病大鼠模型机体代谢的影响。方法建立糖尿病大鼠模型,尾静脉注射携带hGLP-1类似物基因的重组表达载体(pIRES2-EGFP/Val2-hGLP-1),观察30d,期间测定相关指标。结果治疗后糖尿病大鼠体重、进食及饮水量改善明显(P<0.01)。治疗15d后,血糖水平由(27.06±1.73)mmol/L降至(17.57±2.17)mmol/L(P<0.01),血清胰岛素水平由(5.53±0.79)mIU/L升高至(9.88±0.96)mIU/L(P<0.01)。总胆固醇水平降低(P<0.05或P<0.01)。hGLP-1蛋白在胰腺、肝、肾、肌肉组织中表达。结论 hGLP-1类似物基因可导入糖尿病大鼠体内并成功表达,基因治疗降低大鼠血糖,血脂水平,改善大鼠的机体代谢。; 李晓丽刘振马卫列张志珍; 关键词：基因治疗血糖胰岛素

用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素: 2006年; 目的利用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素(endostatin)。方法采用PCR技术从pMFGendo质粒上扩增出小鼠endostatin完整的cDNA序列,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体pThiohisA中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达重组融合蛋白,SDS-PAGE分析表达产物为包涵体,将包涵体纯化后通过镍柱亲和层析得到纯化的、可溶性的小鼠内皮抑素,经SDS-PAGE分析鉴定。结果高效表达出相对分子量约32KD的重组融合蛋白,灰度扫描软件分析显示,其表达量占菌体总蛋白质的35.9%,经镍柱亲和层析获得了高纯度的小鼠内皮抑素重组融合蛋白,纯度可达95%,得率为0.27g/L。结论用硫氧还蛋白融合表达系统在大肠杆菌中表达的小鼠内皮抑素重组融合蛋白易纯化并具有高活性。; 马卫列刘芳何承伟; 关键词：内皮抑素融合蛋白肿瘤

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