骈亚亚 作品数:10 被引量:11 H指数:2 供职机构: 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 甘肃省科技重大专项计划 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 农业科学 更多>>
猪链球菌2型Ⅳ型分泌系统组分VirD4与毒力相关性分析 被引量:4 2015年 【目的】构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33毒力岛89 K上的Ⅳ型分泌系统组分Vir D4敲除突变株,初步分析其活性和毒力,为进一步研究猪链球菌2型在逃避宿主天然免疫杀伤中的作用提供基础。【方法】以05ZYH33基因组为模板,PCR扩增Vir D4基因上下游同源臂,以穿梭质粒p SET1为模板,PCR扩增氯霉素抗性基因Cm,通过重叠PCR技术搭建上述3个片段并连接至温敏载体p SET4s,构建基因敲除载体p SET4s∷Vir D4;通过同源重组构建基因敲除突变株ΔVir D4;通过体外全血杀伤实验、CD1小鼠竞争感染及攻毒实验对突变株和野生株的毒力进行比较分析。【结果】获得了基因敲除突变株ΔVir D4,通过对比发现其毒力与野生株相比有所降低。【结论】猪链球菌2型Ⅳ型分泌系统组分Vir D4与其毒力相关,并在早期抵抗天然免疫细胞杀伤中发挥一定作用。 王俊平 郑玉玲 骈亚亚 郭洁 郝淮杰 姜永强关键词:猪链球菌2型 毒力 猪链球菌2型ABC转运蛋白gene0910敲除突变体的构建及活性分析 被引量:2 2010年 目的:构建猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)强毒株05ZYH3389K毒力岛上的ABC转运蛋白gene0910敲除突变体,并初步分析其活性,为进一步研究猪链球菌假想毒力因子在致病中的作用提供实验基础。方法:以猪链球菌2型05ZYH33基因组为模板,扩增gene0910两侧各约500bp左右的片段为上下游同源臂,以pSET1质粒为模板,扩增氯霉素抗性基因Cm为中间片段,采用重叠PCR方法搭建三个片段,并克隆到自杀载体pSET4S上,构建基因敲除的载体。电转化05ZYH33感受态细胞,经30℃双交换和40℃质粒丢失,最后点板法筛选出基因敲除突变体△0910。对突变株和野生株的生物学活性及小鼠的致病性进行了初步比较。结果:PCR分析和测序结果均显示gene0910完全被氯霉素抗性基因Cm所替代,基因敲除突变体构建成功。结论:突变株的生物学活性和对小鼠的致病性与野生株相比差异不显著。 骈亚亚 郭洁 郑玉玲 袁媛 姜永强关键词:猪链球菌2型 ABC转运蛋白 基因敲除 我国猪链球菌2型新毒力因子的研究 猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,SS2)是一种重要的人兽共患病病原菌,能引起人和猪的脑膜炎、心内膜炎、关节炎、肺炎、败血症以及突发性死亡。中国于1998年和2005年在江苏和四川局... 骈亚亚关键词:猪链球菌 毒力因子 发病机制 文献传递 2型猪链球菌gene0969基因敲除突变体的构建及毒力分析 被引量:1 2010年 目的:构建2型猪链球菌强毒株05ZYH33毒力岛89K上的Ⅳ型分泌系统组分gene0969敲除突变体,初步分析其活性,为进一步研究猪链球菌假想毒力因子在致病中的作用提供实验基础。方法:以05ZYH33基因组为模板,PCR扩增gene0969基因的上下游片段;以穿梭质粒pSET1为模板,PCR扩增氯霉素抗性基因Cm;采用重叠PCR方法搭建3个片段,并克隆到自杀载体pSET4s上,构建基因敲除载体,通过同源重组构建gene0969突变体,再用小鼠感染模型对突变株和野生株的毒力进行比较。结果:获得了gene0969基因敲除突变体,并发现其毒力与野生型相比有下降趋势。结论:2型猪链球菌假想毒力因子gene0969可能与毒力有关,其作用和机制值得进一步分析。 郭洁 骈亚亚 郑玉玲 袁媛 姜永强 陈福生关键词:2型猪链球菌 基因敲除 山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体的制备及抗体结合抗原表位的筛选 被引量:2 2014年 本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolumsubsp.capripneumoniae,Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术(ELISA)和免疫印迹(Western blotting)技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。 郑莹莹 骈亚亚 储岳峰 赵萍 贺英 简莹娜 姜永强 逯忠新关键词:山羊支原体山羊肺炎亚种 单克隆抗体 2型猪链球菌胞壁蛋白MRP的截短表达、纯化及抗原保护性评价 被引量:1 2012年 目的:扩增猪链球菌2型(Streptococcus suis 2)05Z33中的mrp基因,并在大肠杆菌BL21中重组表达,以获得高纯度的重组MRP截短蛋白,验证其抗原保护性。方法:以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建表达质粒,利用亲和层析对目的蛋白进行纯化,免疫新西兰大白兔制备抗血清并测其效价。通过抗原保护实验及抗血清调理的全血杀伤实验验证重组MRP蛋白抗原保护性。结果:重组MRP蛋白在大肠杆菌中高浓度表达,纯化获得了高纯度的MRP截短蛋白并制备获得了抗血清。经该蛋白免疫过的CD-1小鼠与阴性对照组相比,存活率显著升高。经抗血清调理后,野生株05ZYH33在全血中的存活率显著降低,突变株ΔMRP无显著变化。结论:MRP蛋白有较高的抗原保护性。 王萍萍 骈亚亚 袁媛 郑玉玲 姜永强 熊正英关键词:猪链球菌2型 MRP 2型猪链球菌双组分调控系统SalK/SalR抗吞噬机制的初步研究 2013年 目的确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用。方法透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株ΔsalKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作用,通过THP-MΦ细胞吞噬模型评价猪链球菌的抗吞噬能力。结果透射电子显微镜观察发现突变株ΔsalKR荚膜消失,革兰氏染色结果和免疫荧光标记实验显示salKR缺失导致更多的猪链球菌被THP-MΦ细胞吞噬,THP-MΦ细胞吞噬模型进一步证实突变株ΔsalKR比野生株更容易被THP-1细胞吞噬。结论双组分调控系统SalK/SalR通过调控荚膜的形成来抵抗THP-MΦ细胞的吞噬。 付忠琳 骈亚亚 李雪琴 郑玉玲 马世良 袁媛 霍春月关键词:2型猪链球菌 荚膜 我国猪链球菌2型新基因的功能研究 目的:构建猪链球菌2型89K毒力岛的5个突变株(05-SSU0910,05-SSU0946,05-SSU0948,05-SSU0973,05-SSU0969)和胞壁蛋白的4个突变株(05-SSU0272,05-SSU10... 骈亚亚关键词:猪链球菌2型 基因表达 文献传递 2型猪链球菌Fbps基因敲除突变体的构建及毒力分析 被引量:2 2012年 目的:敲除2型猪链球菌(SS2)强毒株05ZYH33中的Fbps基因,研究该基因敲除对菌株生物活性及毒力的影响,为深入探讨猪链球菌致病机制提供实验基础。方法:从05ZYH33基因组中扩增Fbps基因上、下游同源臂,从pSET1质粒中扩增氯霉素抗性基因Cm,通过重叠PCR的方法将3个片段整合后连接到温敏自杀载体pSET4s上,电转入05ZYH33感受态细胞,通过改变培养温度实现双交换和质粒丢失,最后经抗性筛选获得敲除株05ZYH33ΔFBPS,分析敲除株的生物学性状,以CD1小鼠作为体外感染模型对突变株和野生株进行毒力比较。结果:PCR分析和测序结果均显示Fbps基因敲除成功,动物实验结果显示Fbps基因敲除后05ZYH33的毒力有所下降。结论:与野生株相比,突变株对小鼠的毒力有所降低。 谢文龙 骈亚亚 吴凯 郑玉玲 姜永强 陈福生关键词:2型猪链球菌 基因敲除 猪链球菌H因子结合蛋白截短体的表达、纯化及其结合人血清IgG的活性分析 2014年 目的构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb-N(45-344aa)和Fhb-C(345-664aa)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,获得高纯度的重组蛋白,鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性。方法以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建His-Fhb-N和His-Fhb-C重组表达质粒,利用亲和层析纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。蛋白G亲和层析柱从健康人血清中纯化人IgG(hIgG),Western blot法和生物膜干涉(BLI)鉴定和分析His-Fhb与hIgG结合的活性。结果成功构建了带His标签的原核表达质粒并获得了His-Fhb-N和His-Fhb-C截短表达蛋白,验证出Fhb特异性地与hIgG结合,且结合区域位于Fhb-N(45-344aa)。结论 Fhb能够结合hIgG,结合区域位于Fhb-N。 李雪琴 刘鹏 骈亚亚 郑玉玲 姜永强 袁媛 霍春月关键词:2型猪链球菌