高晓蓉 作品数:51 被引量:278 H指数:10 供职机构: 大连理工大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省教育厅资助项目 辽宁省科技厅基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 环境科学与工程 医药卫生 更多>>
转植酸酶基因玉米的获得及其后代的初步鉴定 被引量:10 2008年 构建了仅含有启动子序列、植酸酶基因和终止子序列的线性基因转化元件(UPN)及其两端分别带有T-DNA边界序列(T-UPN)和一段载体序列(V-UPN)的不同线性转化元件,不含选择性标记基因和载体骨架序列,采用花粉管通道法对选定的玉米自交系进行转化,对728株T1代转化玉米PCR检测。结果表明,UPN、T-UPN、V-UPN3个转化元件的阳性率分别为0.44%、2.2%和1.8%,平均转化率为1.5%。检测时,以种子在果穗上的不同位置分别播种、检测。结果表明,PCR阳性株都是来源于第5~9圈的种子,这个部位的阳性率达到3.57%,说明花粉管通道法转化玉米的成功率与种子结实的位置有关。植酸酶比活结果说明外源基因在转化玉米植株内实现了蛋白质水平的表达。 刘欣芳 高晓蓉 苏乔 安利佳 李月明关键词:花粉管通道法 玉米 植酸酶 无载体无标记转植酸酶基因大豆的获得 植物转基因技术的迅猛发展对传统的作物育种已产生了深刻的影响,然而,自从1998年有人提出转基因生物的安全性问题以后,转基因农作物的种植面积增长速度明显减慢。原因是由于以往的转基因操作中,转化的载体上不可避免的带有载体骨架... 高晓蓉关键词:花粉管通道 泡盛曲霉 植酸酶 作物育种 生物安全性 反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列 被引量:16 2001年 采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。 李秋莉 高晓蓉 范琦 袁晓东 刘大伟 安利佳关键词:辽宁碱蓬 甜菜碱醛脱氢酶 基因工程 RACE 反转录 反义4CL与UGPase双价基因在烟草中的转化及表达分析 被引量:7 2007年 构建了携带紫穗槐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)基因和4-香豆酸:辅酶A连接酶(4-coumarate:coenzyme A ligase,4CL)反义基因的双价基因植物表达载体,用热激法转化至根癌农杆菌LBA4404中,并用制备的农杆菌工程菌进行了烟草转化。PCR及Southern杂交结果证实,双价基因已成功整合到烟草基因组中。综纤维素和硫酸木质素含量测定结果显示,转基因烟草纤维素含量增加,木质素含量减少,表明双价基因能够有效表达。 梁海泳 夏秀英 高晓蓉 苏乔关键词:4-香豆酸 木质素 双价基因 一种新的耐热性植酸酶基因在烟草中的表达 被引量:6 2007年 [目的]探究一种新的耐热性植酸酶基因在烟草中的表达结果。[方法]克隆了泡盛曲霉植酸酶基因编码区全序列,使其在烟草中高效表达,对重组植酸酶与天然植酸酶性质进行初步的分析和比较。[结果]对烟草叶片的植酸酶活性检测结果表明,重组植酸酶基因在烟草中得到较高水平表达,转基因植株的最高植酸酶活力为对照烟草的13倍;对烟草重组植酸酶蛋白的酶学性质进行了初步分析,结果表明重组植酸酶拥有与天然植酸酶同样的最适pH值和最适温度,耐热性略微下降,但在80℃处理15 min后仍有33%的残余酶活力。[结论]该研究为该植酸酶基因转化饲料作物的开发提供理论依据,也为泡盛曲霉植酸酶的工业化生产开辟了新的途径。 高晓蓉 王国坤 王严 夏秀英 安利佳关键词:泡盛曲霉 植酸酶 耐热性 转基因烟草 一种耐热性植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究 被引量:5 2006年 采用半固态发酵方式培养泡盛曲霉(Aspergillus awamori)AS3.324,通过有机膜超滤、阴离子交换层析、凝胶层析后,得到纯化的植酸酶。酶学性质表明,其反应最适温度为50-55℃,最适pH为5.5,在37℃下以植酸钠为底物的Km值为1.03 nmol/L,Vmax为2.13μmol/(L.min)。EDTA基本不影响植酸酶活性;Ca2+,Mg2+,Mn2+对植酸酶活性有轻微的抑制作用;Fe2+,Zn2+对酶促反应有显著的抑制作用。对该酶的耐热性研究表明,经较高温度条件处理后,仍有较高残余酶活性,与当今商品化的植酸酶相比,有较强的耐热性。泡盛曲霉植酸酶作为动物饲料添加剂具有广泛的应用前景。 王国坤 高晓蓉 安利佳关键词:植酸酶 酶学性质 热稳定性 泡盛曲霉 一种降解土壤中多环芳烃的复合材料及其制备方法和应用 本发明公开了一种降解土壤中多环芳烃的复合材料及其制备方法和应用,属于农业环境技术污染土壤修复材料领域。将海带渣粉高温热解成生物炭并加以改性,将生物炭材料与菌液混合吸附,完成生物炭对微生物的固定,分离后得到产物。利用本发明... 高晓蓉 李明旭 贾凌云文献传递 烟曲霉WY-1植酸酶基因的克隆及其在烟草中的表达 被引量:3 2007年 以自行筛选的烟曲霉WY-1为出发菌株,通过PCR方法克隆其植酸酶基因,并构建了含有植物信号肽序列的植酸酶基因植物表达载体,利用农杆菌介导的叶盘法对烟草叶片进行了遗传转化。结果表明,PCR鉴定和Southern杂交分析说明植酸酶基因已整合到烟草的基因组中;RT-PCR检测结果证实了植酸酶基因已得到转录表达;酶活性分析表明功能性的植酸酶已成功表达在烟草中,这是烟曲霉植酸酶基因在烟草中的首次表达。 王严 高晓蓉 苏乔 夏秀英 安利佳关键词:烟曲霉 植酸酶基因 烟草 无花果曲霉(A.ficuumAs3.324)植酸酶基因的克隆及表达 本研究经筛选植酸酶酶源菌株,获得发酵液植酸酶活性较高的测试菌无花果曲霉(A.ficu-umAs3.324),该酶最适作用pH值为2.5和5.5,最适作用温度为55℃,生理温度37℃时的酶活性为最高酶活性的72%。60℃时... 高晓蓉 苏乔 安利佳文献传递 一步PCR快速扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA3′末端序列(英文) 被引量:20 2002年 根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条基因特异性引物 ,与通用引物并用 ,一步PCR成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 3′末端。与常规的 3′RACE法相比 ,一步PCR法具有快速、简便、经济等优点 ,是一种非常快捷的扩增cDNA 李秋莉 高晓蓉 袁晓东 刘大伟 安利佳关键词:辽宁碱蓬 甜菜碱醛脱氢酶 快速扩增