黄海霞
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：桂林医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西研究生教育创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 亲磷脂酸磷脂酶A1基因沉默降低MIN6细胞胰岛素分泌水平被引量：5
- 2014年
- 目的:探讨亲磷脂酸磷脂酶A1(PA-PLA1)基因沉默对小鼠分泌胰岛素细胞MIN6分泌功能的影响。方法:根据GenBank中小鼠PA-PLA1基因mRNA序列构建siRNA表达载体(pGPU6-PA-PLA1)并转染MIN6,实时荧光定量PCR和Western blot筛选有效干扰载体。将获得的有效干扰载体转染MIN6细胞48 h后进行葡萄糖刺激实验,检测其胰岛素分泌的变化。结果:酶切及测序证实成功构建了4个靶向PA-PLA1的siRNA表达载体。实时荧光定量PCR和Western blot分析显示siRNA表达载体pGPU6-PA-PLA1-1885具有较高的干扰效率,其转染的MIN6细胞PA-PLA1 mRNA水平降至对照组的46.3%,PA-PLA1蛋白水平降至对照组的33.9%,同时胰岛素分泌水平降至对照组的65.0%(P<0.05)。结论:PA-PLA1基因沉默可降低MIN6的胰岛素分泌水平。
- 莫之婧苏何玲朱华李红岩杨易史云龙黄海霞刘永明
- 关键词：SIRNA基因沉默胰岛素分泌
- 乙型肝炎病毒前S2蛋白激活人酰基蛋白硫酯酶1启动子
- 2015年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S2蛋白(preS2)对人酰基蛋白硫酯酶1(APT1)启动子的作用。方法生物信息学方法确定人APT1启动子序列。PCR扩增人APT1启动子和HBV preS2基因,分别插入pGL3和pcDNA3.1(-)质粒构建人APT1启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-APT1和HBV preS2真核表达质粒pcDNA3.1(-)-preS2。将pGL3-APT1和pcDNA3.1(-)-preS2共转染人肝癌细胞系HepG2,然后通过检测细胞荧光素酶活性来评价preS2对人APT1基因启动子的作用。数据用独立样本t检验分析。结果测序结果证实pcDNA3.1(-)-preS2与pGL3-APT1与实验设计相符。pGL3-APT1的荧光素酶活性是阳性对照质粒pGL3-Control的荧光素酶活性的1.2倍(P<0.01)。pcDNA3.1(-)-preS2与pGL3-APT1共转染HepG2细胞的荧光素酶活性为无preS2基因质粒pcDNA3.1(-)与pGL3-APT1共转染HepG2细胞荧光素酶活性的2.6倍(P<0.01)。结论本研究克隆的人APT1启动子序列具有高启动子活性;HBV preS2可激活人APT1启动子。
- 杨易刘健翔李红岩黄海霞史云龙刘永明苏何玲
- 关键词：蛋白质前体启动子反式激活
- 甜瓜鲨烯合酶分子结构分析及原核表达
- 目的：克隆甜瓜鲨烯合酶（SQS）基因并对其序列进行生物信息学分析，构建甜瓜SQS原核表达载体，为甜瓜葫芦素类的生物合成调控研究提供新的线索和实验依据。 方法：应用异硫氰酸胍法从甜瓜叶中提取总 RNA， Oligo(dT...
- 黄海霞
- 关键词：甜瓜鲨烯合酶基因克隆原核表达分子结构
- 甜瓜鲨烯合酶基因克隆及酶分子结构分析被引量：3
- 2017年
- 葫芦素类是主要分布于葫芦科植物中具有多种医药活性的四环三萜类化合物,目前药用葫芦素原料主要从甜瓜蒂中提取。该研究从甜瓜中克隆葫芦素类合成关键酶——鲨烯合酶(SQS)的基因,并对其序列进行了生物信息学分析。结果表明:DNA测序和BLASTRefSeqGene分析表明,克隆的甜瓜SQS基因片段具有完整的该酶基因开放阅读框架(ORF)序列。ORF分析显示,甜瓜SQS由417氨基酸残基构成,等电点为7.56。对推衍的甜瓜SQS氨基酸序列分析结果提示,该酶二级结构以α螺旋为主。结构域预测结果表明,SQS属于异戊二烯合酶家族,具有法呢酰基二磷酸及镁离子的结合位点。三级结构预测提示,甜瓜SQS为单体酶,其活性中心主要由几个α螺旋围绕形成的穴状结构。磷酸化位点分析显示,S^(48)处于酶活性中心相关^(47)VSRSF^(52)的模体中,而S^(196)是正选择位点,提示这两处磷酸化位点可能是甜瓜SQS酶活性调节的关键部位。以甜瓜SQS基因ORF序列构建系统发生树的系统发生分类结果与形态学分类结果一致。该研究结果为葫芦素类的生物合成调控研究提供了新的线索和实验依据。
- 黄海霞苏何玲史云龙肖雅伦谭燕莲梁杨浩刘永明吴耀生
- 关键词：甜瓜鲨烯合酶基因克隆
