乔宏雷
- 作品数：11 被引量：3H指数：1
- 供职机构：长春生物制品研究所更多>>
- 发文基金：吉林省卫生厅医学科研基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组CHO乙肝疫苗生产中DM EM浓缩液的应用
- 2001年
- 金立杰乔宏雷孙俊业高峰徐冬冬
- 关键词：细胞培养液
- 滤柱制备精制小牛血清方法的建立
- 1999年
- 乔宏雷高峰等
- 不同时间采集的小牛血清对CHO-C_(28)细胞培养及表达的影响被引量：2
- 2005年
- 通过研究小牛血清对CHO-C28细胞培养及HBsAg表达的影响,探讨小牛血清的不同采集时间对血清质量的影响。采集出生后4、8、12h(未进食)小牛的血清,对CHO-C28细胞进行传代、换液培养,并检测乙肝表面抗原(HBsAg)表达量。结果可见:①在细胞传代4次时,4h采集的血清细胞生长状态良好,8h采集的血清细胞出现明显的衰老,12h采集的血清细胞大面积死亡;②在细胞维持换液方面,4h采集的血清可维持细胞换液25次以上,8h采集的血清可勉强维持20次,12h采集的血清维持细胞换液10次时已大部分死亡;③乙肝表面抗原(HBsAg)表达量的检测结果,同批培养上清,4h采集的血清培养细胞表达量最高。可见,小牛出生后采集血清时间越早越好。
- 周长军戴长河何巍乔宏雷宋泽民赵小琳
- 关键词：小牛血清细胞培养
- HEV ORF2截短融合蛋白的原核表达及其免疫原性
- 2020年
- 目的原核表达3型戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)第2个开放阅读框(open reading frame 2,ORF2)截短融合蛋白(HEV3-179-Fe),并检测其免疫原性。方法分别扩增HEV3-179和Fe蛋白基因片段,经Overlap PCR法连接并扩增,克隆至载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-HEV179-Fe,将其转化感受态E.coli BL21(DE3),取阳性菌株,IPTG诱导表达融合蛋白HEV3-179-Fe,进行10%SDS-PAGE分析。目的蛋白经镍离子金属鳌合亲和层析纯化后,加入硫酸铵进行病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)重构,置电镜下观察。HEV3-179-Fe蛋白VLPs与氢氧化铝佐剂吸附后免疫小鼠,ELISA法测定效价,以评价HEV ORF2截短融合蛋白的免疫原性。结果重组表达质粒pET-28a-HEV3-179-Fe构建正确。目的蛋白HEV3-179-Fe相对分子质量约40000,主要以包涵体形式存在,表达量均达35%以上,纯度约95%,可与鼠抗HEV 3多抗发生特异性反应。硫酸铵重构后于电镜下可见直径约20 nm的VLPs,其免疫小鼠的血清效价达1∶4800000以上。结论原核表达了HEV3-179-Fe,且在小鼠体内具有较好的免疫原性。本实验为以HEV ORF2-179蛋白为基础的VLPs基因工程疫苗的研发奠定了基础。
- 周永飞乔宏雷赵丹莹唐剑光常东英韩顺子常军亮张健刘玉林曹玉锋
- 关键词：戊型肝炎病毒基因重组原核表达免疫原性
- 一种铜锌超氧化物歧化酶突变体的原核表达、纯化及酶活性测定
- 2020年
- 目的原核表达、纯化一种铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)突变体,并检测其酶活性。方法将经热力学优化的Cu,Zn-SOD突变体基因亚克隆至pET-28a载体中,构建重组表达质粒SOD1-pET-28a,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达;在500 mL摇瓶培养条件下,通过改变加入Cu、Zn离子的量优化诱导表达条件;表达的重组蛋白经初步纯化后,测定酶活性。结果重组表达质粒SOD-pET-28a经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15000,主要以可溶性形式表达;工程菌株在500 mL摇瓶培养条件下培养至10 h左右,A600至3.5左右时加入终浓度为0.1 mmol/L IPTG、0.2 mmol/L ZnCl2、0.5 mmol/L CuSO4,可获得最佳表达量(29.2%);初步纯化获得的重组蛋白纯度为97.32%,比活为5.08×103U/mg。结论成功利用大肠埃希菌表达系统表达了一种经热力学优化的Cu,Zn-SOD突变体,初步纯化的突变体具有较好的酶活性,为进一步摸索大规模生产工艺及实际应用奠定了基础。
- 唐剑光张健锋常东英曹玉锋乔宏雷高洪喜迟春萍
- 关键词：铜锌超氧化物歧化酶原核表达层析酶活性
- 制备重组CHO细胞乙型肝炎疫苗的新方法
- 本发明涉及将含有乙型肝炎病毒表面抗原的溶液，通过疏水层析、硫酸纤维素层析以及凝胶过滤层析等多步处理，获得纯化或部分纯化的乙型肝炎病毒表面抗原的方法，实施所述方法的装置系统，使用所述系统通过所述方法获得的乙肝病毒表面抗原纯...
- 盛军陈万革金立杰李德娟阎昆明乔宏雷孙俊业周长军刘延明谷铁军罗璇赵睿王佳凤
- 文献传递
- 皮内注射用重组乙型肝炎卡介苗联合疫苗及制备方法
- 本发明提供了一种皮内注射用重组乙型肝炎卡介苗联合疫苗，特别提供了重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)与卡介苗(BCG)菌液的配比处方、冷冻干燥工艺，同时还提供了涉及该联合疫苗的保护剂、接种剂量、接种途径，属于疫苗生产制...
- 金立杰杨丽华陈万革王志赵小琳郑晓丽王洪飞于爱东孙俊业邹福学刘延明王玉武周长军李德娟杨彤乔宏雷刘艾红于漫轮罗璇蔡岩李利袁丽
- 文献传递
- 重组乙型肝炎卡介苗联合疫苗及制备方法
- 本发明提供了一种重组乙型肝炎卡介苗联合疫苗，特别提供了重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)与卡介苗(BCG)菌液的配比处方、冷冻干燥工艺，同时还提供了涉及该联合疫苗的保护剂、接种剂量、接种途径，属于疫苗生产制备工艺技术...
- 金立杰杨丽华陈万革王志赵小琳郑晓丽王洪飞于爱东孙俊业邹福学刘延明王玉武周长军李德娟杨彤乔宏雷刘艾红于漫轮罗璇蔡岩李利袁丽
- 文献传递
- 制备重组CHO细胞乙型肝炎疫苗的新方法
- 本发明涉及将含有乙型肝炎病毒表面抗原的溶液，通过疏水层析、硫酸纤维素层析以及凝胶过滤层析等多步处理，获得纯化或部分纯化的乙型肝炎病毒表面抗原的方法，实施所述方法的装置系统，使用所述系统通过所述方法获得的乙肝病毒表面抗原纯...
- 盛军陈万革金立杰李德娟闫昆明乔宏雷孙俊业周长军刘延明谷铁军罗璇赵睿王佳凤
- 文献传递
- 在CHO-C28细胞大规模培养中提高收获次数及HBsAg的表达
- 2003年
- 目的 :在CHO -C2 8细胞大规模培养过程中增加收获次数 ,延长细胞收获周期 ,提高HBsAg收获量。方法 :采用 15L转瓶培养CHO -C2 8细胞 ,分 3组 ,对比观察不同小牛血清含量及pH值对细胞生长及HBsAg表达的影响 ,优化最佳培养条件。结果 :三组比较 ,实验 1组的收获次数最多 ,达 2 5次以上 ,HBsAg的表达量最高 ,收液量最多。结论 :优化了CHO -C2 8细胞的培养条件。
- 周长军金立杰赵小琳陈万革何巍乔宏雷杨文冲
- 关键词：细胞HBSAG
