于彦婷
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 一种植物双元表达载体pMHZ112及应用
- 本发明公开了一种植物双元表达载体pMHZ112、植物双元干扰表达载体pMHZ112<I>-SQS-SA</I>和pMHZ112<I>-SQE-SA</I>，转化到农杆菌GV3101中，再将农杆菌GV3101转染人参愈伤组...
- 王义张美萍蒋世翠孙春玉王康宇张明哲于彦婷翟俊峰张洪斌
- 文献传递
- 人参SQE基因干扰载体的构建及转化被引量：4
- 2011年
- 目的探讨SQE基因对人参皂苷合成的影响。方法根据SQE基因保守区序列,分别设计合成其正反义片段引物行RT-PCR扩增,扩增产物分别与pMD18-T质粒连接后转化E.coli DH5α,获得的pMD18-T-SQE-S、pMD18-T-SQE-A重组质粒经双酶切后,将正反义片段与质粒pMHZ112反向连接,转化E.coli DH5α,构建SQE基因RNAi双元表达载体pMHZ112-SQE。电击法将鉴定正确的重组质粒pMHZ112-SQE转化农杆菌GV3101感受态细胞,再利用农杆菌介导法转化人参愈伤组织,提取抗性人参愈伤组织细胞基因组DNA,进行PCR检测并计算抗性愈伤转化率;同时提取人参皂苷,采用HPLC方法检测抗性人参愈伤组织的皂苷含量。结果结果显示总RNA较完整无降解,质量较好;RT-PCR扩增产物正反义片段大小与预期一致;重组质粒pMD18-T-SQE-S、pMD18-T-SQE-A和pMHZ112-SQE分别经双酶切进行测序鉴定,结果表明目的基因已插入重组质粒且连接方向正确。人参愈伤组织细胞基因组DNA的PCR检测结果显示1个菌落经2对引物扩增结果均呈阳性,证明构建的pMHZ112-SQE重组质粒已成功整合入植物基因组中,其抗性愈伤转化率为1%。转化pMHZ112-SQE重组质粒后,人参抗性愈伤组织中单体皂苷Rg1、Re、Rc含量明显下降,Rb1略有升高,实验组与对照组(转化空质粒)间Rg1、Re、Rb1、Rc的含量差异显著(均P<0.05);而2组均未检测出Rb2和Rd。结论成功构建了SQE基因RNAi双元表达载体,通过转化人参愈伤组织抑制SQE基因的表达,可以调控人参皂苷含量发生相应的改变。
- 于彦婷任丽孙春玉蒋世翠王义张美萍
- 关键词：人参基因药物载体皂苷类
- 一种植物双元表达载体pMHZ112及应用
- 本发明公开了一种植物双元表达载体pMHZ112、植物双元干扰表达载体pMHZ112 -SQS-SA 和pMHZ112 -SQE-SA ，转化到农杆菌GV3101中，再将农杆菌GV3101转染人参愈伤组织，获得了人参主要的...
- 王义张美萍蒋世翠孙春玉王康宇张明哲于彦婷翟俊峰张洪斌
- 文献传递
