代辉
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达被引量：2
- 2019年
- 目的研究在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中精氨酸甲基转移酶PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达的机制。方法在MDA-MB-231细胞中分别过表达C/EBPα和敲低PRMT1,在蛋白和mRNA水平检测c-myc表达量;ChIP-qPCR和EMSA检测C/EBPα与c-myc启动子的结合能力;荧光素酶双报告基因检测PRMT1和C/EBPα对c-myc启动子的调控作用。结果过表达C/EBPα、敲低PRMT1后,c-myc表达明显下降;C/EBPα蛋白3个甲基化位点35位、156位和165位精氨酸突变为苯丙氨酸后(3RF),C/EBPα对c-myc启动子的转录抑制明显减弱。而3个位点同时突变成赖氨酸后(3RK),PRMT1对c-myc的调控作用消失。结论在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,PRMT1通过甲基化C/EBPα调控c-myc的转录。
- 林群刘丽铭代辉张艳君张业
- 关键词：C/EBPΑC-MYC
- JMJD6参与调节肿瘤抑制因子p53的转录活性
- 2012年
- 目的确定JMJD6与转录因子p53的相互作用,研究JMJD6对p53转录活性的影响,并通过鉴定JMJD6的赖氨酸羟化酶活性探讨其可能的作用机制。方法免疫共沉淀技术和GST pull-down实验分析JMJD6和p53的相互作用及其作用区域;荧光素酶双报告基因系统检测JMJD6对p53靶基因启动子活性的影响;体外羟基化实验和质谱鉴定JMJD6的羟化酶活性。结果 JMJD6与p53相互作用,并由p53的C端结构域介导;JMJD6参与激活p53的转录活性;JMJD6具有赖氨酸羟化酶活性,可以催化组蛋白H4发生羟基化。结论赖氨酸羟化酶JMJD6可以结合肿瘤抑制因子p53并参与调节其转录活性。
- 张艳君程谟斌代辉沈珝琲张业
- 关键词：P53
- 组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9对myogenin基因表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的利用本组构建的小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9真核表达质粒及RNA干扰(siRNA)质粒,在体外成肌细胞分化模型C2C12细胞中检测SET7/9对肌肉分化关键基因myogenin基因表达的影响。方法转染SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9至C2C12细胞,Western blot技术验证其表达;利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测SET7/9对myogenin基因mRNA水平的影响;利用双荧光素酶报告系统检测SET7/9对myogenin基因启动子活性的影响;转染SET7/9的siRNA质粒,利用Real-time PCR技术检测其抑制效果以及对myogenin mRNA水平的影响。结果 SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9可在C2C12细胞中有效表达;SET7/9可使myogenin mRNA水平升高并能够促进myogenin启动子活性升高;干扰SET7/9表达可使myogenin mRNA水平降低。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9可激活肌肉分化关键基因myogenin的转录。
- 潘炜松代辉张业沈珝琲
- 关键词：RNA干扰MYOGENIN
- 染色质体外组装相关蛋白的表达纯化及组装体系的建立被引量：1
- 2012年
- 目的提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuclear assemblyprotein-1)及ACF(ATP-utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系。方法在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测。结果获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋白八聚体及组蛋白特异伴侣NAP-1和ACF;建立了由质粒DNA、纯化的真核细胞核内重组组蛋白、重组NAP-1、重组ACF及ATP为核心成分的体外染色质组装的无细胞系统,经微球菌核酸酶检测组装成功。结论利用体外分离纯化的多种重组蛋白,可成功构建基因的染色质模板,为在体外染色质模板上进行基因转录的调控机制研究奠定了基础。
- 赵忠亮赵吉成代辉沈珝琲张业
- hsp90α基因在染色质模板上的热诱导转录
- 2004年
- 目的在体外将带有hsp90α基因启动子的报告基因质粒pBLCAT3α1组装为染色质模板,用于研究hsp90α基因的热诱导转录。方法采用竞争性RT-PCR定量检测基因启动子活性的方法,研究染色质模板的体外组装,并比较染色质模板与裸露DNA模板上基因的转录活性。结果优化了热休克处理的HeLa全细胞抽提物在基因转录活性研究中的实验条件:用体外重组表达的染色质组装相关因子与核心组蛋白在体外与hsp90α基因启动子质粒组装成染色质;证明染色质模板的hsp90α基因体外转录水平低于裸露DNA模板,而其热诱导效率显著高于对照组。结论在体外组装的染色质模板具有阻遏hsp90α基因转录的活性,但明显提高了该基因的热诱导表达效率。
- 李兆勇代辉杨珺张业吴宁华沈珝琲
- 关键词：体外转录RT-PCR
- RA诱导SH-SY5Y细胞分化中NEF3基因表达的调控
- 2009年
- 目的 研究全反式维甲酸（RA）诱导神经母细胞瘤分化过程中NEF3表达的调控。方法 用RA诱导神经母细胞SH—SYSY，用实时RT—PCR分析NEF3和Brg1的mRNA表达；并同时测定RGl蛋白的表达。共转染含有2．8kb NEF3上游序列的报告基因质粒、Brg1的表达质粒或者其负显性突变质粒，检测后两者对NEF3-CAT启动子活性的调控。结果 RA诱导12—24h，SH—SY5Y细胞中NEF3与Brg1几乎同时表达出现第1个高峰，之后表达量下降。共转染结果显示Brg1可促进NEF3-CAT表达增加，而其突变型没有作用。结论 RA诱导初期，染色质重塑复合物ATP酶亚基Brg1可能导致NEF3上游调控序列所处的染色质结构发生改变，从而有利于NEF3基因的表达。
- 张莉沈金花代辉张业沈珝琲
- 关键词：RA
