任充华
- 作品数：11 被引量：5H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法
- 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种基因无缝编辑方法。该方法构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5.CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Don...
- 张智英白义春徐坤魏泽辉和林洁任充华邵斯旻吴芸刘中天
- 文献传递
- 一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法
- 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法。所述基因无缝编辑方法首先构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5. CRISPR/Ca...
- 张智英白义春徐坤魏泽辉和林洁任充华邵斯旻吴芸刘中天
- 文献传递
- 大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA与orfC重组腺病毒的制备及应用
- 2012年
- 【目的】扩增大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC,制备orfA和orfC重组腺病毒,并感染Hela229和SPC-A-1细胞,以检测orfA和orfC对肿瘤细胞的影响。【方法】从pWDSV全长表达载体中扩增WDSV辅助基因orfA和orfC,构建orfA和orfC基因的重组腺病毒载体以及对照空载体,采用脂质体介导法转染HEK293细胞进行包装和扩增,用绿色荧光蛋白法测定重组腺病毒的滴度;将重组腺病毒转染肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1,采用Weastern Blot方法检测基因orfA和orfC的表达情况,并用MTT法检测其对肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的影响。【结果】PCR扩增获得了891bp的orfA基因和360bp的orfC基因,成功构建了对照空载体pAdEasy-l-CK和含有orfA和orfC基因的腺病毒载体pAdEasy-l-orfA和pAdEasy-l-orfC,转染HEK293细胞并进行包装后获得了重组腺病毒Ad-CK、Ad-orfA和Ad-orfC,用Hela229细胞测得其滴度分别为5.67×109,2.00×109和7.33×108 GFU/mL。重组腺病毒对肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的生长具有抑制作用。【结论】初步证明了orfA和orfC基因对人类肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的生长具有抑制作用,为进一步研究WDSV辅助基因对人类肿瘤的影响以及肿瘤萎缩的分子机理奠定了基础。
- 张优优徐坤王亮亮张婷婷辛颖任充华闫强张智英
- 关键词：重组腺病毒肿瘤
- 利用结构优化的TALE-TF高效诱导MEF细胞内源基因Oct4的表达（英文）
- 2017年
- 转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控。通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达。但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效率还不确定。本文设计了不同长度N端的TALENs哺乳动物及酵母表达载体,对应哺乳动物绿色荧光报告载体及酵母报告载体。分别在哺乳动物细胞和酵母细胞上对不同长度N端TALENs的活性进行了检测。检测结果发现,含120个氨基酸N端的TALEN在酵母AH109细胞中的活性最高,N端长度为153个氨基酸的TALENs在293T细胞中表现最高的活性,但N端长度为153、140和160个氨基酸的TALENs的活性差异不显著(P>0.05)。随后,将结构优化了的TALE-TF用于小鼠胎儿成纤维细胞中激活Oct4基因。相对阴性对照组,TALE-TF将Oct4基因表达量上调了418倍。本研究结果表明,在哺乳动物细胞和酵母细胞中,具有最高活性TALENs的N端长度是不同的。本研究用结构优化的TALE-TF诱导内源基因高水平的表达,为从体细胞中获得iP S细胞提供了研究策略。
- 吴芸张志强李铎徐坤韩芙蓉任充华闫强王昕张智英
- 人工靶向核酸酶活性鉴定及阳性编辑细胞富集系统优化研究
- 基因组编辑技术在过去的三十年间已经发生了巨大变化,从最开始的同源重组技术演变到核酸酶靶向切割产生双链断裂切口进而高效改造基因组。人工靶向核酸酶技术已经从锌指核酸酶(ZFNs)跨过转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)...
- 任充华
- 关键词：锌指核酸酶
- 文献传递
- 人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因腺病毒载体的构建及包装被引量：3
- 2012年
- 【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-hTERT。将pAdEasy-hTERT PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后,收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液;反复扩增3次后,测定重组hTERT腺病毒的滴度。【结果】①利用酶切连接的方法得到了穿梭载体pAdTrack-hTERT;②通过同源重组将外源目的基因hTERT整合到腺病毒骨架载体中,得到重组质粒pAdEasy-hTERT;③成功获得了滴度为6.73×1010 GFU/mL的高滴度腺病毒颗粒。【结论】含有hTERT基因的重组腺病毒颗粒包装成功,为后续哺乳动物原代细胞永生化研究奠定了基础。
- 任充华张婷婷杨涵江王昕陈知龙张智英
- 关键词：重组腺病毒细胞永生化
- 一种真核细胞III型启动子表达CRISPR sgRNA的方法及其应用
- 本发明是利用一个真核细胞III型启动子（U6或H1）启动由Drosha切割位点串联的多个发卡结构小RNA的表达，在真核细胞内表达后可以产生多个有生物活性的CRISPR？sgRNA，以U6-sgRNA-shRNA-sgRN...
- 张智英闫强徐坤邢佳妮郭杨任充华
- 文献传递
- 酵母β-母葡聚糖在畜禽生产上的应用被引量：2
- 2014年
- 酵母β-葡聚糖分布广泛，在畜禽生产上的应用潜力很大。本文主要讨论了β-葡聚糖的提取方法、生物活性，重点讨论酵母β-葡聚糖作为饲料添加剂在畜禽生产上的应用。
- 马琤任充华张智英
- 关键词：酵母Β-葡聚糖畜禽生产饲料添加剂糖分
- 人工锌指蛋白文库的构建
- 2014年
- 【目的】以猪基因组为模板,扩增天然锌指,以此建立人工锌指蛋白文库,为猪基因组的定点操作及基因表达研究奠定基础。【方法】利用质粒JMB378和JMB440构建锌指文库骨架载体JMB378-ZF1-MCS,然后根据天然锌指蛋白接头序列的保守性,设计5条简并引物扩增猪基因组中的天然单锌指结构域,将其与JMB378-ZF1-MCS载体上的人工锌指ZF1中识别GGC的锌指蛋白连接,构建二锌指蛋白文库,通过酶切方式再将天然单锌指结构域插入到二锌指蛋白文库中,构建三锌指蛋白文库。测定锌指库容量及阳性率,并通过酶切和测序检测锌指库的多样性。【结果】构建了基于猪天然锌指模块的包含ZF1的三锌指蛋白文库,库容量达到1.5×106 CFU。该文库中含有一个人工锌指蛋白ZF1和2个天然型锌指蛋白,能够对基因组中所有以GGC起始的9bp靶序列进行筛选。【结论】构建了基于天然单锌指模块的三锌指蛋白文库,为构建新型锌指蛋白提供了一种可行的方法。
- 周罡张龙刘中天任充华麻丽霞张智英
- 关键词：锌指文库构建
- 奶山羊alpha S1 casein基因靶向敲除的研究
- 本研究建立了酵母细胞水平直接筛选活性锌指核酸酶系统，为特异锌指核酸酶的直接获得提供了一种新的快捷方法。针对奶山羊alpha S1 casein基因，利用此系统筛选的活性锌指核酸酶实现了内源靶基因的高效敲除。阳性克隆的富集...
- 王令林娟任充华张智英
- 关键词：奶山羊锌指核酸酶
- 文献传递
